Diacuerpos covalentes y usos de los mismos.

Una molécula de diacuerpo que comprende una primera cadena polipeptídica y una segunda cadena polipeptídica,

en la que:

(a) dicha primera cadena polipeptídica comprende, en la dirección desde N terminal hacia C terminal:

(i) un primer dominio que comprende una región de unión de un dominio variable de la cadena ligera de una primera inmunoglobulina (VL1) específica para un primer epítopo,

(ii) un segundo dominio que comprende una región de unión de un dominio variable de la cadena pesada de una segunda inmunoglobulina (VH2) específica para un segundo epítopo, y

(hi) un tercer dominio que comprende la secuencia de aminoácidos FNRGEC (la SEQ ID NO: 23), la secuencia de aminoácidos VEPKSC (SEQ ID NO: 79) o la mutación V215A de las mismas que tiene la secuencia AEPKSC (residuos de aminoácidos 245-350 de SEQ ID NO: 18); y

en la que dicho primer dominio y segundo dominio están unidos covalentemente entre sí mediante un conector peptídico de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 15 7, 8 o 9 residuos de aminoácidos, de forma que el primer dominio y el segundo dominio no se asocian para formar un sitio de unión del epítopo; y

(b) dicha segunda cadena polipeptídica comprende, en la dirección desde N terminal hacia C terminal:

(i) un cuarto dominio que comprende una región de unión de un dominio variable de la cadena ligera de la segunda inmunoglobulina (VL2)

(ii) un quinto dominio que comprende una región de unión de un dominio variable de la cadena pesada de la primera inmunoglobulina (VH1), y

(iii) un sexto dominio que comprende la secuencia de aminoácidos FNRGEC (SEQ ID NO: 23), la secuencia de aminoácidos VEPKSC (SEQ ID NO: 79) o la mutación V215A de las mismas que tiene la secuencia AEPKSC (residuos de aminoácidos 245-350 de SEQ ID NO: 18);

y en la que:

(1) cuando dicho tercer dominio comprende dicha secuencia de aminoácidos FNRGEC (SEQ ID NO: 23), dicho sexto dominio comprende dicha secuencia de aminoácidos VEPKSC (SEQ ID NO: 79) o la mutación V215A de la misma, y cuando dicho tercer dominio comprende dicha secuencia de aminoácidos VEPKSC (SEQ ID NO: 79) o la mutación V215A de la misma, dicho sexto dominio comprende dicha secuencia de aminoácidos FNRGEC (SEQ ID NO: 23);

(2) dicho cuarto dominio y quinto dominio están unidos covalentemente entre sí mediante un péptido de 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 residuos de aminoácidos, de forma que el cuarto dominio y el quinto dominio no se asocian para formar un sitio de unión del epítopo;

(3) dicha primera cadena polipeptídica y dicha segunda cadena polipeptídica están unidas covalentemente a 35 través de un puente de disulfuro entre dicho tercer dominio y dicho sexto dominio;

(4) dicho primer dominio y dicho quinto dominio se asocian para formar un primer sitio de unión (VL1) (VH1) que se une a dicho primer epítopo;

5) dicho segundo dominio y dicho cuarto dominio se asocian para formar un segundo sitio de unión (VL2) (VH2) que se une al segundo epítopo; y

(6) dicho primer y segundo epítopo son diferentes; y

en la que la molécula de diacuerpo es capaz de unirse simultáneamente al primer y al segundo epítopo.