Cuantificación de TNFR2:Fc plegado erróneamente.

Método para determinar la cantidad relativa de TNFR2:Fc con puente disulfuro Cys78-Cys88 en una muestra que comprende TNFR2:

Fc con puentes disulfuro Cys74-Cys88/Cys78-Cys96 y TNFR2:Fc con puente disulfuro Cys78-Cys88, en el que el método comprende las etapas de:

(a) proporcionar una muestra que comprende una mezcla de TNFR2:Fc con puente disulfuro Cys78-Cys88 y TNFR2:Fc con puentes disulfuro Cys74-Cys88/Cys78-Cys96;

(b) desnaturalizar y alquilar la muestra de la etapa (a);

(c) someter la muestra resultante de la etapa (b) a digestión tríptica en condiciones no reductoras;

(d) someter la muestra resultante de la etapa (c) a HPLC, separando de ese modo fragmentos indicativos de TNFR2:Fc con puente disulfuro Cys78-Cys88, en el que dichos fragmentos consisten en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4 ("T7");

(e) realizar una integración de pico para el pico indicativo de fragmentos que consisten en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4 ("T7"), y para un pico no afectado por la formación de puentes disulfuro de Cys74, Cys78, Cys88 y Cys96 que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 5 ("T27"), tal como se obtiene a partir de la etapa (d); en el que el pico no afectado por la formación de puentes disulfuro de Cys74, Cys78, Cys88 y Cys96 no se ve afectado por la formación de puentes disulfuro en absoluto y es indicativo de la TNFR:Fc total en la muestra; y

(f) calcular la cantidad relativa según la fórmula (1)**Fórmula**

en el que la secuencia de aminoácidos de la parte de TNFR2 de TNFR2:Fc tiene al menos el 97% de identidad con los aminoácidos 1-235 de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E14177696.

Solicitante: SANDOZ AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: LICHTSTRASSE 35 4056 BASEL SUIZA.

Inventor/es: FUCHS, MICHAEL, MAYER, ROBERT, POSCH,CHRISTOPH, RUPPRECHTER,ALFRED, LAMANNA,WILLIAM, HOLZMANN,JOHANN, TOLL,HANSJÖRG.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K1/16 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › por cromatografía.
  • C07K14/715 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › para citoquinas; para linfoquinas; para interferones.

PDF original: ES-2733298_T3.pdf

 

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