Cambio de temperatura para una expresión con mayor rendimiento de polipéptidos en levaduras y otras células transformadas.

Un método para producir una proteína deseada, que comprende:

(a) cultivar células eucariotas que comprenden uno o más genes que proporcionan la expresión de dicha proteína deseada a una primera temperatura;

y

(b) cultivar dichas células eucariotas a una segunda temperatura y permitir que dichas células eucariotas produzcan dicha proteína deseada, en donde el cultivo comprende una fase de alimentación discontinua;

en donde

(i) dichas células eucariotas comprenden células de levadura que son células de Pichia pastoris;

(ii) dicha proteína deseada comprende un anticuerpo de longitud completa que comprende dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas;

(iii) dicha primera temperatura es entre 27,5 grados C y 28,5 grados C y dicha segunda temperatura es entre 30 grados C y 31 grados C;

(iv) el promotor o promotores que regulan la transcripción del uno o más genes que codifican dicha proteína deseada no son inducibles por la temperatura;

(v) la etapa (a) comprende cultivar dichas células eucariotas en un medio de cultivo que comprende glicerol como una fuente de carbono hasta que dicho glicerol se agota;

(vi) el método incluye la adición de un bolo de etanol al cultivo concurrentemente con el agotamiento del glicerol; y

(vii) dicho método aumenta el rendimiento de dicha proteína y/o disminuye la abundancia relativa de una o más variantes asociadas al producto en relación con el mismo método realizado sin una diferencia entre dicha primera temperatura y dicha segunda temperatura.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/030453.

Solicitante: Alder Biopharmaceuticals, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 11804 North Creek Parkway South Bothell, WA 98011 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: HARTNER,Franz, McNeill,Patricia,Dianne, LESNICKI,GARY, YOUNG,MARK.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/00 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.
  • C07K16/18 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
  • C07K16/24 C07K 16/00 […] › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C12N1/16 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › Levaduras; Sus medios de cultivo.
  • C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.

PDF original: ES-2749751_T3.pdf

 

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