Procedimientos para el enriquecimiento de ácido nucleico mutado de una mezcla.

Un procedimiento de enriquecimiento de una variante de un ácido nucleico diana en una mezcla de ácidos nucleicos de una muestra,

existiendo el ácido nucleico diana en forma de dos secuencias variantes, en el que dichas variantes difieren en una posición de un único nucleótido, comprendiendo el procedimiento:

proporcionar la muestra que incluye el ácido nucleico diana en el que la variante que se va a enriquecer está presente en la muestra en baja abundancia entre un gran exceso de la otra variante;

proporcionar un oligonucleótido que sea complementario a una cadena del ácido nucleico diana en una concentración que esté en exceso molar con respecto al ácido nucleico diana, en el que el oligonucleótido esté fijado con un marcador de afinidad y esté perfectamente emparejado en la posición de un único nucleótido con la variante que se va a enriquecer y tenga un emparejamiento erróneo en la posición de un único nucleótido con la otra variante;

proporcionar las condiciones adecuadas para la hibridación del oligonucleótido con el ácido nucleico diana para generar polinucleótidos de doble hélice que consistan en el oligonucleótido y una cadena de cualquier variante del ácido nucleico diana;

poner en contacto los polinucleótidos de doble hélice con un compuesto de intercalación entre emparejamientos erróneos que se una preferentemente solo a los polinucleótidos de doble hélice que contengan un emparejamiento erróneo, en el que dicho compuesto pueda catalizar además la escisión con luz de una cadena del polinucleótido de doble hélice en el sitio de emparejamiento erróneo;

25 someter a los polinucleótidos de doble hélice a la luz, dando como resultado tanto polinucleótidos de doble hélice escindida como no escindida;

aplicar tanto los polinucleótidos de doble hélice escindida como no escindida a una matriz de afinidad que reconozca y se una al marcador de afinidad en el oligonucleótido;

proporcionar las condiciones mediante las cuales se desnaturalice solo el polinucleótido de doble hélice escindida y eliminar la cadena sencilla desnaturalizada de la matriz de afinidad; y

proporcionar un tampón en condiciones para desnaturalizar la doble hélice del polinucleótido no escindida; y obtener el tampón que contiene una cadena de la variante enriquecida del ácido nucleico diana, en el que el compuesto de intercalación entre emparejamientos erróneos es Rh(bpy)2(chrysi)3+, Rh(bpy)2(phzi)3+ o sus análogos, como se muestra en la figura 1, en la que N representa nitrógeno, Rh representa rodio y R1, R2 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, alquilo, arilo, un soporte sólido y un enlazador fijado con un marcador de afinidad.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2014/075460.

Solicitante: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG.

Nacionalidad solicitante: Suiza.

Dirección: GRENZACHERSTRASSE 124 4070 BASEL SUIZA.

Inventor/es: GUPTA, AMAR, SCHOENBRUNNER,NANCY, JANSSEN,KEVIN.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2676062_T3.pdf

 

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