Probiótico para el llanto infantil excesivo.

Una composición bacteriana que comprende de 104 a 1012 ufc/g de células viables de Pediococcus pentosaceus que tienen la capacidad de inducir la producción de interleucina-10,

donde la producción de interleucina-10 por macrófagos THP-1 en presencia de células de Pediococcus pentosaceus expresada como incremento normalizado es superior a la producción de interleucina-10 por el control negativo, que son macrófagos THP-1 en ausencia de células de Pediococcus pentosaceus, cuando el incremento normalizado se determina mediante las siguientes etapas:

(a) diferenciar monocitos THP-1 en macrófagos mediante el crecimiento de la línea celular de monocitos THP-1 de la colección de células de Public Health England, número de catálogo 88081201, en medio Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 con suero bovino fetal (FBS) al 10 % y con forbol-12-miristato-13-acetato (PMA) hasta una concentración final de 0,16 μM;

(b) dejar crecer los macrófagos THP-1 en medio RPMI 1640 con FBS al 10% en placas ELISA de 24 pocillos hasta una concentración final de 106 macrófagos/pocillo;

(c) incubar durante 2,5 horas los macrófagos THP-1 con lipopolisacárido (LPS) a una concentración final de 10 ng/mL, y lavar los macrófagos THP-1con el medio solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (D-PBS);

(d) tener preparado un cultivo de células de Pediococcus pentosaceus obtenido haciendo crecer las células en medio de Man, Rogosa y Sharpe (MRS) una noche a 37 ºC en una atmósfera con CO2 al 5 %;

(e) añadir a cada pocillo ELISA 500 μL de medio RPMI 1640 con FBS al 10 % y una cantidad apropiada de una dilución de células de Pediococcus pentosaceus hasta obtener una relación final de 25:1, es decir, 2,5 x 107 ufc de células de Pediococcus pentosaceus: 106 macrófagos THP-1;

(f) incubar los macrófagos THP-1 con las células de Pediococcus pentosaceus durante 2,5 horas a 37 ºC o sin las células de Pediococcus pentosaceus en las mismas condiciones como control negativo;

(g) lavar los macrófagos THP-1 con medio D-PBS para eliminar las células de Pediococcus pentosaceus, posteriormente añadir a los macrófagos THP-1 medio RPMI 1640 con FBS al 10 % suplementado con 50 μg/mL de gentamicina, 10 μg/mL de ampicilina y 12 μg/mL de cloranfenicol, incubar a 37 °C con CO2 al 5-7 %, y tomar 25 partes alícuotas a las 5 y 24 horas;

(h) centrifugar las partes alícuotas y ensayar los líquidos sobrenadantes para la cuantificación de interleucina-10 mediante citometría de flujo; y

(i) calcular el incremento normalizado de la concentración de interleucina-10, con la fórmula (IL-1024h - IL-105h) / IL- 105h; donde IL-105h y IL-1024h es la concentración de interleucina-10 en pg/mL a 5 y 24 horas, respectivamente.