Método de purificación para proteínas dependientes de vitamina K mediante cromatografía de intercambio aniónico.

Método para la separación de proteína dependiente de vitamina K inactiva de proteína dependiente de vitamina K activa en un método para la purificación de una proteína dependiente de vitamina K que comprende las etapas de:

(a) cargar un material de resina de intercambio aniónico (a continuación también "el primer material de resina de intercambio aniónico") con la proteína dependiente de vitamina K en un tampón de carga en ausencia o baja concentración de cationes divalentes, opcionalmente seguido por de una a tres etapas de lavado;

(b) eluir la proteína dependiente de vitamina K con un eluyente que comprende calcio y un contraión para formar un eluato que contiene la proteína dependiente de vitamina K, en el que:

- está comprendido calcio 1-3 mM en el eluyente

- el eluyente tiene una conductividad de 14 - 23 mS/cm (25 °C) y

- el pH del eluyente es de entre 7,0 y 9,0, en el que la etapa (b) se selecciona del siguiente grupo:

- la conductividad es de entre 18 y 20 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,0 -7,4 y Ca++ 1 mM,

- la conductividad es de entre 18,5 y 21 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,4 - 7,6 y Ca++ 1 mM,

- la conductividad es de entre 19 y 22,5 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,6 - 8,0 y Ca++ 1 mM, o

- la conductividad es de entre 20 y 23 mS/cm (25 °C) a un pH de 8,0 - 9,0 y Ca++ 1 mM,

- la conductividad es de entre 15 y 17,0 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,0 - 7,4 y Ca++ 2 mM,

- la conductividad es de entre 16 y 18 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,4 - 7,6 y Ca++ 2 mM,

- la conductividad es de entre 19,5 y 22 mS/cm (25 °C) a un pH de 8,0 - 9,0 y Ca++ 2 mM,

- la conductividad es de entre 14,0 y 15 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,0 - 7,4 y Ca++ 3 mM,

- la conductividad es de entre 15 y 15,5 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,4 - 7,6 y Ca++ 3 mM,

- la conductividad es de entre 14 y 16,5 mS/cm (25 °C) a un pH de 7,6 - 8,0 y Ca++ 3 mM, o

- la conductividad es de entre 15 y 19 mS/cm (25 °C) a un pH de 8,0 - 9,0 y Ca++ 3 mM.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2014/055120.

Solicitante: Baxalta Incorporated.

Inventor/es: MITTERER, ARTUR, HASSLACHER, MEINHARD, FIEDLER, CHRISTIAN, MITTERGRADNEGGER,DOMINIK.

Fecha de Publicación: 24 de Septiembre de 2018.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07K1/18 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 1/00 Procedimientos generales de preparación de péptidos. › Cromatografía de intercambio iónico.
C07K14/745 C07K […] › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Factores de coagulación sanguínea o de fibrinolisis.
C12N9/64 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › que provienen de tejido animal, p. ej. renina.

PDF original: ES-2682928_T3.pdf

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