Composiciones y kits para recuento molecular.

Un método para contar la cantidad de apariciones de una molécula diana de ARNm en una muestra que comprende:

(a) proporcionar una pluralidad de marcadores oligonucleotídicos, en el que un marcador oligonucleotídico de la pluralidad de marcadores oligonucleotídicos comprende una secuencia específica diana, una secuencia identificadora exclusiva y una secuencia de cebador de PCR universal opcional, y en el que la secuencia específica diana comprende una secuencia oligo dT;

(b) combinar una muestra que comprende una molécula diana de ARNm que comprende una secuencia de poliA con la pluralidad de marcadores oligonucleotídicos de manera que la secuencia oligo dT del marcador oligonucleotídico se hibride con la secuencia de poliA de la molécula diana de ARNm para formar una molécula de ARNm etiquetada, en el que cada molécula diana de ARNm se puede hibridar con un marcador oligonucleotídico diferente, y en el que la región identificadora exclusiva identifica de manera exclusiva las apariciones de la molécula diana de ARNm;

(c) sintetizar una copia de la molécula diana de ARNm etiquetada mediante transcripción inversa para formar una molécula de ADN etiquetada, en el que al menos una porción del marcador oligonucleotídico actúa como cebador para la reacción de transcripción inversa, y en el que la molécula de ADN etiquetada comprende una copia de la molécula diana de ARNm y un marcador oligonucleotídico;

(d) detectar la molécula de ADN etiquetada, un complemento de la molécula de ADN etiquetada, un complemento inverso de la molécula de ADN etiquetado o una porción de esta; y

(e) determinar un recuento de las diferentes moléculas de ADN etiquetadas y contar, de esta manera, la cantidad de apariciones de una molécula diana de ARNm en la muestra.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2013/028103.

Solicitante: Cellular Research, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 4040 Campbell Avenue, Suite 110 Menlo Park, CA 94025 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: FODOR, STEPHEN, P., A., FU,GLENN K, WILHELMY,JULIE.

Fecha de Publicación: 10 de Enero de 2018.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2663234_T3.pdf

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