Líneas celulares que expresan Nav y métodos para su utilización.

Una línea celular manipulada genéticamente para expresar de manera estable un NaV 1.

7 humano que comprende una subunidad alfa 9 de NaV, una subunidad beta 1 de NaV y una subunidad beta 2 de NaV, en la que la línea celular se produce mediante un método que comprende las etapas de:

a) proporcionar una pluralidad de células que expresan mRNA que codifica o codifican el NaV 1.7 humano;

b) dispersar las células individualmente en recipientes de cultivo individuales, proporcionando de este modo una pluralidad de cultivos celulares separados;

c) cultivar las células con un conjunto de condiciones de cultivo deseadas usando un método de cultivo celular automatizado caracterizado porque las condiciones son sustancialmente idénticas para cada uno de los cultivos celulares separados, durante el cual se normaliza el cultivo de las diversas células por cultivo celular separado, y en el que se hacen pases de los cultivos separados en el mismo calendario;

d) someter a ensayo los cultivos de células separados para medir la expresión del NaV 1.7 humano al menos dos veces y para medir un factor Z' en el ensayo de potencial de membrana; e

e) identificar un cultivo celular separado que expresa el NaV 1.7 humano a un nivel uniforme en ambos ensayos y que produce un factor Z' de al menos 0,6 en el ensayo de potencial de membrana, obteniendo de este modo dicha colección de células;

en la que el ensayo de potencial de membrana comprende:

i) cultivar en placas células de la línea celular a 10.000 - 25.000 células por pocillo en una placa de 384 pocillos en medio de crecimiento;

ii) mantener las células en la placa de 384 pocillos en una incubadora de cultivo celular a 37 ºC con CO2 al 5% durante 22-24 horas;

iii) retirar el medio de crecimiento de la placa de 384 pocillos;

iv) incubar las células en la placa de 384 pocillos con un colorante de potencial de membrana de florescencia azul diluido en un tampón de carga que comprende NaCl 137 mM, KCl 5 mM, CaCl2 1,25 mM, HEPES 25 mM, glucosa 10 mM durante 1 hora a 37 ºC;

v) añadir a las células incubadas a) 25 μM de veratridina y 5-25 μg/ml de veneno de escorpión para pocillos de control positivo; o b) un tampón de control para pocillos de control negativo;

vi) cargar la placa de 384 pocillos en un lector de placas fluorescentes de alto rendimiento; y

vii) medir las señales de fluorescencia de células de los pocillos de control positivo y los pocillos de control negativo, en la que el factor Z' se calcula usando las señales de fluorescencia de células medidas de la etapa vii) y usando la ecuación:

Factor Z' ≥ 1 - ((3σcontrol positivo + 3σcontrol negativo)/ (μcontrol positivo - μcontrol negativo))

en la que control σpositivo representa una desviación típica de los controles positivos del ensayo; control σnegativo representa una desviación típica de los controles negativos del ensayo; control μpositivo representa el valor medio de los controles positivos; y control μnegativo representa el valor medio de los controles negativos.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2009/032902.

Solicitante: CHROMOCELL CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 685 U.S. HIGHWAY ONE NORTH BRUNSWICK, NJ 08902 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SHEKDAR,Kambiz, DEDOVA,OLGA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K14/705 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
  • G01N33/68 SECCION G — FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen proteínas, péptidos o aminoácidos.

PDF original: ES-2640817_T3.pdf

 

  • Fb
  • Twitter
  • G+
  • 📞

Patentes similares o relacionadas:

Anticuerpos ANTI-CEACAM6 y usos de los mismos, del 17 de Enero de 2018, de NATIONAL RESEARCH COUNCIL OF CANADA: Un anticuerpo de un solo dominio aislado o purificado o un fragmento del mismo, que comprende una región determinante de complementariedad (CDR) 1 que comprende la secuencia […]

Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR, del 17 de Enero de 2018, de THE JOHNS HOPKINS UNIVERSITY: Composición farmacéutica que comprende: (a) un anticuerpo que se une específicamente a B7-H7CR definido por la secuencia de aminoácidos […]

Proteínas de fusión del receptor de linfocitos T y conjugados y procedimientos de uso de las mismas, del 10 de Enero de 2018, de ALTOR BIOSCIENCE CORPORATION: Un complejo de fusión del receptor de linfocito T soluble que comprende un receptor de linfocito T y un polipéptido biológicamente activo conectados […]

Proteínas estables, del 27 de Diciembre de 2017, de HEPTARES THERAPEUTICS LIMITED: Una proteína de fusión que comprende, desde el extremo N hasta el extremo C: a) una primera porción de un receptor acoplado a proteínas G de la Familia B (GPCR) […]

Proteína de fusión, del 20 de Diciembre de 2017, de NIHON PHARMACEUTICAL CO., LTD: Una proteína de fusión caracterizada porque una proteína (X), que contiene un sitio reconocido por autoanticuerpos que son la causa de una enfermedad autoinmunitaria de tipo […]

Receptores del sabor dulce-umami y umami-dulce humanos quiméricos, del 6 de Diciembre de 2017, de SENOMYX INC.: Una línea celular que expresa un polipéptido receptor del sabor quimérico que comprende el dominio extracelular de T1R2 y la región transmembranaria […]

Polipéptido útil en terapia celular adoptiva, del 29 de Noviembre de 2017, de UCL BUSINESS PLC: Un polipéptido que tiene la fórmula: St-R1-S1-Q-S2-R2 en la que St es una secuencia de tallo que, cuando el polipéptido se expresa en la superficie de una célula […]

Proteínas de unión multi-diana antagonistas de CD86, del 29 de Noviembre de 2017, de Aptevo Research and Development LLC: Una proteína de fusión multi-específica, que comprende un dominio de unión a CD86 unido a un dominio de unión heterólogo mediante un dominio intermedio, […]