Ácidos nucleicos de control para múltiples parámetros.

Un procedimiento para aislar y simultáneamente amplificar un primer y un segundo ácido nucleico diana que pueden estar presentes en una o más muestras fluidas,

comprendiendo dicho procedimiento las etapas automatizadas de:

a. añadir un ácido nucleico patrón cuantitativo a cada una de dichas muestras fluidas, en el que la secuencia del ácido nucleico patrón cuantitativo se deriva de una fuente diferente del origen de las muestras fluidas, es diferente de las otras secuencias de ácido nucleico de las muestras fluidas, se deriva de un genoma vegetal y presenta mutaciones "scramble", en el que dicho ácido nucleico patrón cuantitativo tiene una concentración de entre 20 x LDD y 5000 x LDD

b. combinar un material de soporte sólido y dicha una o más muestras fluidas en uno o más recipientes durante un período de tiempo y en condiciones suficientes para permitir que los ácidos nucleicos que comprenden los ácidos nucleicos diana y el ácido nucleico patrón cuantitativo queden inmovilizados sobre el material de soporte sólido

c. aislar el material de soporte sólido del otro material presente en las muestras fluidas en una estación de separación

d. purificar los ácidos nucleicos en dicha estación de separación y lavar el material de soporte sólido una o más veces con un tampón de lavado

e. poner en contacto los ácidos nucleicos diana purificados y el ácido nucleico patrón cuantitativo purificado con reactivos de amplificación que comprenden al menos un conjunto distinto de cebadores para cada uno de dichos ácidos nucleicos diana y para dicho ácido nucleico patrón cuantitativo en al menos dos recipientes de reacción para la amplificación del al menos el primer y segundo ácidos nucleicos diana y del ácido nucleico patrón cuantitativo en los al menos dos recipientes de reacción

f. incubar en dichos recipientes de reacción dichos ácidos nucleicos diana purificados y dicho ácido nucleico patrón cuantitativo purificado con dichos reactivos de amplificación durante un período de tiempo y en condiciones suficientes para que se produzca una reacción de amplificación indicativa de la presencia o ausencia de dichos ácidos nucleicos diana mientras se amplifica el primer pero no el segundo ácido nucleico diana en el primer recipiente de reacción y se amplifica el segundo pero no el primer ácido nucleico diana en el segundo recipiente de reacción

g. detectar y medir las señales generadas por los productos de amplificación de dichos ácidos nucleicos diana y que son proporcionales a la concentración de dichos ácidos nucleicos diana, y detectar y medir una señal generada por dicho ácido nucleico patrón cuantitativo

h. determinar la cantidad de uno o más de dichos ácidos nucleicos diana usando el ácido nucleico patrón cuantitativo como referencia en el que las condiciones para la amplificación y detección en las etapas e. a g. son idénticas para dichos primer y segundo ácidos nucleicos diana purificados y dicho ácido nucleico patrón cuantitativo.