OB-FOLD usado como estructura para diseño por ingeniería de nuevos agentes de unión específicos.

Un método para obtener una variante de una proteína OB-fold de partida que se une a una diana y que presenta una afinidad nanomolar o mejor con dicha diana,

en el que dicha diana es una proteína o un péptido y en el que dicha afinidad se mide por resonancia de plasmón superficial de competición, que comprende las etapas de

a) proporcionar una biblioteca combinatoria de variantes de dicha proteína OB-fold de partida en que de 5 a 32 restos implicados en la unión de dicha proteína OB-fold de partida con su ligando nativo se han aleatorizado, y opcionalmente en el que dichas variantes comprenden adicionalmente una inserción de 1 a 15 restos de aminoácido aleatorios en el bucle 3 y/o una inserción de 1 a 15 restos de aminoácido aleatorios en el bucle 4 y/o una inserción de 1 a 20 restos de aminoácido aleatorios en el bucle 1, y opcionalmente en el que de 1 a 4 restos de dicha proteína OB-fold de partida se han delecionado,

b) expresar dichas variantes de dicha biblioteca por presentación en ribosoma

c) exponer dichas variantes expresadas obtenidas en la etapa b. a dicha diana inmovilizada, en el que dicha diana es una proteína o un péptido

d) seleccionar dichas variantes que se unen a dicha diana inmovilizada

e) eluir y recuperar el ARNm de dichas variantes seleccionadas en la etapa d.

f) traducir de forma inversa y amplificar dicho ARNm recuperado para obtener una sub-biblioteca de variantes seleccionadas de dicha proteína OB-fold de partida

g) realizar de nuevo las etapas b. a f. desde cero hasta tres rondas

h) expresar dichas variantes de dicha sub-biblioteca después de la etapa g. por presentación en ribosoma

i) exponer dichas variantes expresadas obtenidas en la etapa h. a dicha diana que está biotinilada

j) incubar esta composición que comprende dichas variantes expresadas y dicha diana de interés de la etapa i.

k) capturar complejos ternarios (ARNm-ribosoma-agente de unión) unidos a diana biotinilada con perlas recubiertas con estreptavidina magnéticas

l) lavar dichas perlas y aislar el ARNm

m) traducir de forma inversa y amplificar dicho ARNm recuperado para obtener una sub-biblioteca de variantes seleccionadas de dicha proteína OB-fold de partida

n) seleccionar un elemento de dicha sub-biblioteca de la etapa m., en el que dicho elemento codifica una variante de dicha proteína OB-fold de partida que comprende de 5 a 32 restos mutados en la superficie de contacto de unión con el ligando nativo de dicha proteína OB-fold de partida y que se une a dicha diana, y en el que la afinidad de dicha variante por dicha diana es una afinidad nanomolar o mejor.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E12156817.

Solicitante: INSTITUT PASTEUR.

Nacionalidad solicitante: Francia.

Dirección: 28, RUE DU DOCTEUR ROUX 75015 PARIS FRANCIA.

Inventor/es: PECORARI,FRÉDÉRIC, ALZARI,PEDRO.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K14/195 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de origen bacteriano.
  • C07K16/12 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales bacterianos.
  • C07K16/42 C07K 16/00 […] › contra inmunoglobulinas (anticuerpos anti-idiotípicos).
  • C12N15/10 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).

PDF original: ES-2602782_T3.pdf

 

  • Fb
  • Twitter
  • G+
  • 📞

Patentes similares o relacionadas:

Encapsulamiento celular de alto rendimiento para examen o selección, del 19 de Octubre de 2016, de UNIVERSITAT ZURICH: Método para seleccionar un conjunto de secuencias de una biblioteca de secuencias de ácido nucleico expresadas, en el que - se proporciona una pluralidad de células, […]

Ácidos nucleicos que codifican polipéptidos quiméricos para la identificación sistemática de bibliotecas, del 5 de Octubre de 2016, de F. HOFFMANN-LA ROCHE AG: Una composición de moléculas de ácido nucleico (ARN y/o ADN) que codifican una población de especies de polipéptido quimérico, en la que cada molécula de ácido nucleico codifica […]

PROCEDIMIENTO PARA DISEÑAR POLIPÉPTIDOS PSEUDOANCESTRALES CON CARACTERÍSTICAS MEJORADAS, del 3 de Octubre de 2016, de UNIVERSIDAD DE GRANADA: Procedimiento para diseñar polipéptidos pseudoancestrales con características mejoradas. La presente invención tiene por objeto un procedimiento para la […]

Humanización rápida de anticuerpos, del 28 de Septiembre de 2016, de Bioatla LLC: Un método para producir un anticuerpo humanizado, comprendiendo el método: (a) sintetizar bibliotecas de fragmentos de ADN de doble hebra de cadena […]

Un ensayo de doble híbrido fluorescente (F2H) para la visualización directa de interacciones de proteínas en células vivas, del 28 de Septiembre de 2016, de LUDWIG-MAXIMILIANS-UNIVERSITAT MÜNCHEN: Un procedimiento in vitro para detectar interacciones proteína-proteína, que comprende: (a) expresar en una célula eucariota una primera proteína de fusión que comprende […]

Micropartículas de alcohol de polivinilo, esféricas, magnetizables, procedimiento para su fabricación y uso de las mismas, del 28 de Septiembre de 2016, de PerkinElmer chemagen Technologie GmbH: Método para la producción de micropartículas de alcohol de polivinilo esféricas y magnetizables, con una distribución del tamaño de partícula del orden de […]

Método para identificar dianas antibióticas por secuenciación complementada, del 31 de Agosto de 2016, de Discuva Limited: Un método para identificar un gen esencial que sirve como una diana antibiótica en una bacteria, comprendiendo el método las etapas de: (a) generar un mutante […]

ANTICUERPOS HUMANIZADOS ESPECÍFICOS PARA TANTO CD45RB COMO CD45RO, del 17 de Febrero de 2012, de NOVARTIS AG: Anticuerpo humanizado anti-CD45RO/RB que comprende una región variable de cadena pesada de SEQ ID No:9 o de SEQ ID No:10 y una región variable de cadena ligera […]

‹‹ Derivados de isoxazol-tiazol como agonistas inversos del receptor GABA A para su uso en el tratamiento de trastornos cognitivos

Procedimiento para la producción de laminados en forma de cinta ››