Métodos para el análisis masivo paralelo de ácidos nucleicos en células individuales.
Un método para analizar al menos dos secuencias de ácido nucleico en una célula individual contenida dentro de una población de al menos 10.
000 células, en el que la célula individual se aísla en una microgotita de emulsión, comprendiendo dicho método:
proporcionar un primer conjunto de sondas de ácido nucleico, comprendiendo el primer conjunto una primera sonda que comprende una secuencia que es complementaria a una primera sub-secuencia de ácido nucleico diana, comprendiendo una segunda sonda una secuencia que es complementaria a una segunda sub-secuencia del primer ácido nucleico diana y una segunda secuencia que es complementaria a una secuencia exógena, comprendiendo una tercera sonda la secuencia exógena y una secuencia que es complementaria a una primera sub-secuencia de un segundo ácido nucleico diana, y una cuarta sonda que comprende una secuencia que es complementaria a una segunda sub-secuencia de la segunda secuencia de ácido nucleico diana, en donde el primer ácido nucleico diana o el segundo ácido nucleico diana comprende una secuencia de receptor de células T o una secuencia de inmunoglobulina;
aislar las células individuales con al menos un conjunto de sondas de ácido nucleico;
amplificar la primera y segunda secuencias de ácido nucleico diana de manera independiente, en donde la primera secuencia de ácido nucleico diana se amplifica utilizando la primera sonda y la segunda sonda, y en donde la segunda secuencia de ácido nucleico diana se amplifica utilizando la tercera sonda y la cuarta sonda; hibridar la secuencia exógena a su complemento;
amplificar la primera secuencia de ácido nucleico diana, la segunda secuencia de ácido nucleico diana y la secuencia exógena, utilizando las primera y cuarta sondas, generando con ello un complejo fusionado; y
realizar una reacción de secuenciación a granel para generar información de la secuencia para al menos 100.000 complejos fusionados a partir de al menos 10.000 células dentro de la población de células, en donde la información de la secuencia es suficiente para co-localizar la primera secuencia de ácido nucleico diana y la segunda secuencia de ácido nucleico diana en una célula individual de la población de al menos 10.000 células.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/065600.
Solicitante: Gigagen, Inc.
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 407 Cabot Road South San Francisco, CA 94080 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: MEYER,Everett Hurteau, JOHNSON,DAVID SCOTT.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2615733_T3.pdf
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