Método para producir músculo cardiaco por ingeniería (EHM).
Un método para producir músculo cardiaco preparado por ingeniería (EHM),
comprendiendo el método las etapas de:
(i) proporcionar una mezcla de reconstitución sin suero en uno o más moldes, comprendiendo dicha mezcla de reconstitución (a) un medio esencial mínimo sin suero; (b) un suplemento sin suero que resulta en una concentración final de 0,5-50 mg/ml de albúmina, 1-100 μg/ml de transferrina, 0,1-10 μg/ml de etanol amina, 0,003-0,3 μg/ml de selenito de sodio, 0,4-40 μg/ml de L-carnitina HCl, 0,1-10 μg/ml de hidrocortisona, 0,05-5 μg/ml de suplemento de ácidos grasos, 0,0001-0,1 μg/ml de triyodo-L-tironina (T3) y 0,2-2 mg/ml de colágeno; y (c) una mezcla de miocitos cardiacos humanos y no miocitos humanos, en el que 20 a 80% de la mezcla celular total son miocitos cardiacos; en el que los miocitos cardiacos no se producen usando un proceso que implica modificar la identidad genética de la línea germinal de los seres humanos o que implica el uso de un embrión humano para propósitos industriales o comerciales;
en el que la mezcla de reconstitución tiene un pH de 7,2 a 7,6;
(ii) cultivar la mezcla de reconstitución sin suero en dicho uno o más moldes, mediante lo cual se permite que la mezcla de reconstitución sin suero se condense durante al menos 15 min;
(iii) cultivar la mezcla obtenida en la etapa (ii) en dicho uno o más moldes en un medio de cultivo EHM sin suero hasta que la mezcla se condensa hasta al menos 50% de su espesor original, en el que dicho medio de cultivo EHM comprende (a) un medio basal que comprende 0,5-3 mmoles/L de Ca2+; (b) un suplemento sin suero como se define en (i)(b); (c) 0,5-10 mmoles/L de L-glutamina; (d) 0,01-1,0 mmoles/L de ácido ascórbico; (e) 1-100 ng/ml de IGF-1; y
(f) 1-10 ng/ml de TGFß1;
(iv) cultivar la mezcla obtenida en la etapa (iii) bajo estiramiento mecánico en un medio de cultivo EHM sin suero como se define en la etapa (iii) (a)-(f), mediante lo cual se forma EHM generador de fuerza.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E13181352.
Solicitante: Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Universitätsmedizin.
Inventor/es: ZIMMERMANN,WOLFRAM-HUBERTUS, TIBURCY,MALTE, HUDSON,JAMES.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N5/071 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células o tejidos de vertebrados, p.ej. células o tejidos humanos.
PDF original: ES-2615396_T3.pdf
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