Hialuronidasa bacteriana y proceso para su producción.

Un método para la producción de hialuronidasa a partir de Streptomyces koganeiensis ATCC 31394 que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ.

ID. Nº 21 que comprende las siguientes etapas:

a) inocular un medio de cultivo bacteriano en un biorreactor con un inóculo de células recombinantes que contienen al menos un vector que comprende la secuencia mostrada como SEQ ID NO: 41;

b) someter el contenido del biorreactor de la etapa a) a fermentación a un pH entre 6,7 y 7,1 en presencia de una solución nutritiva;

c) añadir un inductor de los genes lac a la mezcla de la etapa b);

d) someter la mezcla de la etapa c) a un periodo de inducción de entre 8 y 24 horas;

e) centrifugar las células bacterianas obtenidas en la etapa d);

f) volver a suspender los gránulos obtenidos en la etapa e) y someter la suspensión resultante a choque osmótico;

g) extraer las proteínas periplásmicas por centrifugación de la suspensión de la etapa f);

h) purificar la fracción proteica que tiene actividad enzimática de hialuronidasa obtenida en la etapa g) mediante una secuencia de:

i. cromatografía de intercambio iónico fuerte y aislamiento de la fracción de actividad enzimática de hialuronidasa;

ii. cromatografía de intercambio catiónico débil y aislamiento de la fracción de actividad enzimática de hialuronidasa;

y

iii. cromatografía de interacción hidrofóbica aromática y aislamiento de la fracción de actividad enzimática de hialuronidasa.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2014/062193.

Solicitante: FIDIA FARMACEUTICI S.P.A..

Nacionalidad solicitante: Italia.

Dirección: VIA PONTE DELLA FABBRICA 3/A 35031 ABANO TERME (PD) ITALIA.

Inventor/es: VACCARO, SUSANNA, MESSINA,LUCIANO, MUSUMECI,LUCA.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K14/315 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Streptococcus (G), p. ej. Enterococci.
  • C12N9/26 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 9/00 Enzimas, p. ej. ligasas (6.; Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas. › actúan sobre enlaces alfa-glucosídicos-1, 4, p. ej. hialuronidasa, invertasa, amilasa.

PDF original: ES-2643485_T3.pdf

 

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