Un complejo de anticuerpo biespecífico y digoxigenina conjugada a un agente terapéutico o de diagnóstico.

Un complejo de

a) un anticuerpo biespecífico específico contra digoxigenina y una proteína diana,

que comprende un primer sitio de unión al antígeno que se une a digoxigenina y un segundo sitio de unión al antígeno que se une a una proteína diana, y

b) digoxigenina, en el que la digoxigenina está conjugada a un agente terapéutico o de diagnóstico seleccionado del grupo que consiste en un péptido, un compuesto pequeño, un compuesto pequeño radiactivamente marcado y un reactivo de obtención de imágenes,

en el que dicho sitio de unión al antígeno que se une específicamente a digoxigenina comprende como dominio variable de la cadena pesada SEQ ID NO. 3 con las mutaciones S49A, I57A y A60P, y como dominio variable de la cadena ligera SEQ ID NO. 5.

Un complejo de anticuerpo biespecífico y digoxigenina conjugada a un agente terapéutico o de diagnóstico Campo de la invención La presente invención se refiere a complejos de a) anticuerpos biespecíficos y fragmentos de anticuerpos contra una proteína diana y b) una digoxigenina conjugada a un agente terapéutico o de diagnóstico, métodos para su producción, su uso como plataforma de administración para agentes terapéuticos o de diagnóstico, composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos, y usos de los mismos.

Antecedentes de la invención La medicina molecular requiere agentes que interaccionen específica y eficazmente con células diana. La eficaz

administración in vivo de agentes terapéuticos o de diagnóstico funcionales a un tejido o célula diana todavía sigue siendo uno de los mayores obstáculos en el desarrollo de fármacos. Un enfoque es acoplar las cargas a un vehículo de administración que se dirige específicamente a células, por ejemplo, a un anticuerpo. Las cargas deben acoplarse con buena estabilidad para asegurar el direccionamiento específico y evitar la liberación no específica sistémica de la carga. Sin embargo, para permitir la entrada en la célula, la carga se libera idealmente en o dentro de células diana. Combinar la buena estabilidad dentro de la circulación con la liberación eficaz en la diana es un cuello de botella importante en el desarrollo de conjugados. La mayoría de los conjugados del estado de la técnica no consisten en un tipo de molécula definida, sino que son una mezcla de moléculas con diferentes cantidades de cargas acopladas en posiciones variables. Un inconveniente importante de estos conjugados es que los procedimientos de conjugación necesitan adaptarse a cada anticuerpo y cada carga; por tanto, las cargas no pueden intercambiarse fácilmente, también el enlace covalente puede producir inmunogenicidad.

Se ha desarrollado una amplia variedad de formatos de anticuerpos recombinantes en el pasado reciente, por ejemplo, anticuerpos biespecíficos tetravalentes por fusión de, por ejemplo, un formato de anticuerpo IgG y dominios monocatenarios (véase, por ejemplo, Coloma, M.J., et al., Nature Biotech 15 (1997) 159-163; documento WO 2001/077342; y Morrison, S.L., Nature Biotech 25 (2007) 1233-1234) . También se han desarrollado varios otros formatos nuevos en los que la estructura central del anticuerpo (IgA, IgD, IgE, IgG o IgM) ya no es retenida tal como dia-, tria-o tetracuerpos, minicuerpos, varios formatos monocatenarios (scFv, Bis-scFv) , que pueden unirse a dos o más antígenos (Holliger P, et al., Nature Biotech 23 (2005) 1126 -1136; Fischer N., Leger O., Pathobiology 74 (2007) 3-14; Shen J, et al., Journal of Immunological Methods 318 (2007) 65-74; Wu, C. et al., Nature Biotech. 25

(2007) 1290-1297) .

Los anticuerpos biespecíficos son capaces de unirse simultáneamente a dos dianas diferentes y así también de administrar una gran variedad de cargas a los tejidos o células diana. Hasta la fecha se han descrito anticuerpos biespecíficos específicos para ciertas dianas de células. Sin embargo, esta metodología tiene una desventaja importante, ya que requiere que los anticuerpos se produzcan contra cada agente deseado para uso de diagnóstico y terapéutico. El documento WO2005/004809 divulga anticuerpos biespecíficos que se unen a DTPA y CEA o CD20.

El documento US 7.429.381 divulga un método de direccionamiento previo de dos etapas, en el que un anticuerpo biespecífico específico para un hapteno de HSG y una proteína de la superficie celular se administra primero a la 45 célula y a continuación se usa para capturar un hapteno de HSG con el que está quelado un catión terapéutico o de diagnóstico o un agente terapéutico o de diagnóstico. Los haptenos son moléculas pequeñas, tales como pesticidas, fármacos, hormonas y toxinas, que son normalmente no inmunogénicas, a menos que se acoplen a algunas macromoléculas tales como proteínas. Sin embargo, el uso de anticuerpos anti-hapteno de HSG biespecíficos en un método de direccionamiento previo de dos etapas tiene varias limitaciones.

La principal desventaja es la complejidad del enfoque, que implica la preparación y dosificación de dos reactivos separados y las consiguientes cuestiones de momento preciso y relación. Además, no es posible analizar el complejo resultante del anticuerpo biespecífico y el agente terapéutico o de diagnóstico. Por tanto, es difícil predecir propiedades farmacológicas, estequiometría y posibles productos de degradación del agente terapéutico o de 55 diagnóstico capturado por el anticuerpo biespecífico.

Además, los conjugados actualmente usados no pueden aplicarse a la mayoría de los agentes terapéuticos, ya que la conjugación frecuentemente produce actividad reducida o eliminada del agente terapéutico o alteraciones no deseadas de las capacidades de unión del anticuerpo.

Por tanto, existe la necesidad de una plataforma de administración bien definida, eficaz y específica para agentes terapéuticos y de diagnóstico con liberación eficaz de la carga en la diana que puedan aplicarse ampliamente.

Sumario de la invención 65 La presente invención se refiere a un complejo de

a) un anticuerpo biespecífico específico contra digoxigenina y una proteína diana, que comprende un primer sitio de unión al antígeno que se une a digoxigenina y un segundo sitio de unión al antígeno que se une a una proteína diana, y

b) digoxigenina, en el que la digoxigenina está conjugada a un agente terapéutico o de diagnóstico seleccionado del grupo que consiste en un péptido, un compuesto pequeño, un compuesto pequeño radiactivamente marcado y un reactivo de obtención de imágenes, en el que dicho sitio de unión al antígeno que se une específicamente a digoxigenina comprende como dominio variable de la cadena pesada SEQ ID NO. 3 con las mutaciones S49A, I57A y A60P, y como dominio variable de la cadena ligera SEQ ID NO. 5.

En una realización, el anticuerpo biespecífico se caracteriza porque comprende a) un anticuerpo bivalente monoespecífico que consiste en dos cadenas pesadas del anticuerpo de longitud

completa y dos cadenas ligeras del anticuerpo de longitud completa, por lo que cada cadena comprende solo un dominio variable,

b) dos conectores de péptido,

c) dos anticuerpos monocatenarios monovalentes monoespecíficos que consisten cada uno en un dominio variable de la cadena pesada del anticuerpo, un dominio variable de la cadena ligera del anticuerpo y un conector monocatenario entre dicho dominio variable de la cadena pesada del anticuerpo y dicho dominio variable de la cadena ligera del anticuerpo;

En una realización, el anticuerpo biespecífico se caracteriza porque el anticuerpo está humanizado.

En una realización, el anticuerpo biespecífico se caracteriza porque la proteína diana es un antígeno de la superficie celular. Preferentemente, el antígeno de la superficie celular es un antígeno de tumor. En una realización, la proteína diana es Her2. En una realización, la proteína diana es IGF1R. En una realización, la proteína diana es CD22.

En una realización, el complejo se caracteriza porque el agente terapéutico o de diagnóstico es un péptido.

En una realización, el complejo se caracteriza porque el agente terapéutico o de diagnóstico es un compuesto pequeño.

En una realización, el complejo se caracteriza porque el compuesto pequeño está radiactivamente marcado.

En una realización, el complejo se caracteriza porque el agente terapéutico o de diagnóstico es un reactivo de obtención de imágenes.

Otra realización de la invención es el complejo según la invención para su uso en la administración de un agente terapéutico o de diagnóstico a una célula o tejido diana.

Otra realización de la invención es el complejo según la invención para su uso en terapia contra el cáncer dirigida.

Otra realización de la invención es el complejo según la invención para su uso en radioterapia dirigida.

Otra realización de la invención es el complejo según la invención para su uso en terapia contra el cáncer dirigida.

Otra realización de la invención es el complejo según la invención para su uso en radioterapia dirigida.

Otra realización de la invención es el uso del complejo según la invención para la fabricación de un medicamento para terapia contra el cáncer dirigida.

Otra realización de la invención es el uso del complejo según la invención para la fabricación de un medicamento para radioterapia dirigida.

Otra realización de la invención es el complejo según la invención para su uso en... [Seguir leyendo]

1. Un complejo de a) un anticuerpo biespecífico específico contra digoxigenina y una proteína diana, que comprende un primer sitio de unión al antígeno que se une a digoxigenina y un segundo sitio de unión al antígeno que se une a una proteína diana, y b) digoxigenina, en el que la digoxigenina está conjugada a un agente terapéutico o de diagnóstico seleccionado del grupo que consiste en un péptido, un compuesto pequeño, un compuesto pequeño radiactivamente marcado y un reactivo de obtención de imágenes, en el que dicho sitio de unión al antígeno que se une específicamente a digoxigenina comprende como dominio variable de la cadena pesada SEQ ID NO. 3 con las mutaciones S49A, I57A y A60P, y como dominio variable de la cadena ligera SEQ ID NO. 5.

2. El complejo según la reivindicación 1, en el que dicho sitio de unión al antígeno que se une específicamente a digoxigenina comprende como fragmento Fd de la cadena pesada (VH y CH1) SEQ ID NO. 36 y como cadena L SEQ ID NO. 37.

3. El complejo según la reivindicación 1 o 2, en el que el anticuerpo biespecífico comprende a) un anticuerpo bivalente monoespecífico que consiste en dos cadenas pesadas del anticuerpo de longitud completa y dos cadenas ligeras del anticuerpo de longitud completa, por lo que cada cadena comprende solo un dominio variable, b) dos conectores de péptido, c) dos anticuerpos monocatenarios monovalentes monoespecíficos que consisten cada uno en un dominio variable de la cadena pesada del anticuerpo, un dominio variable de la cadena ligera del anticuerpo y un conector monocatenario entre dicho dominio variable de la cadena pesada del anticuerpo y dicho dominio variable de la cadena ligera del anticuerpo.

4. El complejo según la reivindicación 1 a 3, en el que la proteína diana es un antígeno de la superficie celular.

5. El complejo según la reivindicación 4, en el que el antígeno de la superficie celular es un antígeno de tumor.

6. El complejo según la reivindicación 4, en el que la proteína diana es Her2.

7. El complejo según la reivindicación 4, en el que la proteína diana es IGF1R.

8. El complejo según la reivindicación 4, en el que la proteína diana es CD22.

9. El complejo según la reivindicación 1 a 8, en el que el agente terapéutico o de diagnóstico es un péptido.

10. El complejo según la reivindicación 1 a 8, en el que el agente terapéutico o de diagnóstico es un compuesto pequeño.

11. El complejo según la reivindicación 10, en el que el compuesto pequeño está radiactivamente marcado.

12. El complejo según la reivindicación 1 a 8, en el que el agente terapéutico o de diagnóstico es un reactivo de obtención de imágenes.

13. El complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para su uso en la administración de un agente terapéutico o de diagnóstico a una célula diana o tejido.

14. El complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para su uso en terapia contra el cáncer dirigida.

15. El complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para su uso en radioterapia dirigida.

16. Uso del complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para la fabricación de un medicamento para terapia contra el cáncer dirigida.

17. Uso del complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para la fabricación de un medicamento para radioterapia dirigida.

18. El complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12 para su uso en obtención de imágenes de células o tejidos.

19. Una composición que comprende el complejo de cualquiera de las reivindicaciones 1-12.

20. La composición de la reivindicación 19, en la que la composición es una composición de diagnóstico.

21. La composición de la reivindicación 19, en la que la composición es una composición farmacéutica.