Procedimiento para preparar una 5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepina.

Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (1):**Fórmula**

comprendiendo dicho procedimiento hacer reaccionar un compuesto de fórmula (iv) con un compuesto de fórmula (v):

**Fórmula**

para dar un compuesto de fórmula (1).

Procedimiento para preparar una 5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepina ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención

Esta invención se refiere a un procedimiento para preparar ácido 4-{[9-cloro-7-(2-fluoro-6-metoxifenil)-5H- p¡rim¡do[5,4-d][2]benzazep¡n-2-¡l]amino}-2-metox¡benzoico y una sal sódica del mismo. Este es un compuesto que inhibe enzimas Aurora cinasas, y es útil para el tratamiento de cáncer.

Antecedentes de la invención

Según la American Cáncer Society, se estima que en 2004 se diagnosticó por primera vez cáncer a 1,4 millones de norteamericanos, y aproximadamente 560,000 víctimas murieron de esta enfermedad. Aunque los avances médicos han mejorado las tasas de supervivencia de cáncer, sigue existiendo una necesidad de tratamiento nuevo y más eficaz.

El cáncer se caracteriza por reproducción celular descontrolada. La mitosis es una etapa en el ciclo celular durante la cual una serie de acontecimientos complejos aseguran la fidelidad de la separación de los cromosomas en dos células hija. Varias terapias de cáncer actuales, incluyendo los taxanos y alcaloides de la vinca, actúan para inhibirla maquinaria mitótica. La progresión mitótica se regula en gran medida por proteolisis y por acontecimientos de fosforilación que están mediados por cinasas mitóticas. Los miembros de la familia de Aurora cinasas (por ejemplo, Aurora A, Aurora B, Aurora C) regulan la progresión mitótica a través de modulación de la separación del centrosoma, dinámica del huso, punto de control de ensamblaje del huso, alineamiento cromosómico y citocinesis (Dutertre et al., Oncogene, 21: 6175 (2002); Berdnik et al., Curr. Biol., 12: 640 (2002)). La sobreexpresión y/o amplificación de Aurora cinasas se ha ligado a oncogénesis en varios tipos tumorales, incluyendo los de colon y mama (Warner et al., Mol. Cáncer Ther., 2: 589 (2003); Bischoff et al., EMBO, 17: 3062 (1998); Sen et al., Cáncer Res., 94: 1320 (2002)). Además, la inhibición de Aurora cinasas en células tumorales da como resultado detención mitótica y apoptosis, lo que sugiere que estas cinasas son dianas importantes para la terapia de cáncer (Ditchfield, J. Cell Biol., 161: 267 (2003); Harrington et al., Nature Med., 1 (2004)). Dado el papel central de la mitosis en la progresión de prácticamente todos los tumores malignos, se espera que los inhibidores de las Aurora cinasas tengan aplicación a lo largo de una amplia serie de tumores humanos. Existe de este modo una necesidad de nuevos inhibidores de Aurora cinasas.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Claiborne et al., Publicación de Patente Internacional WO 05/111039, describen compuestos de pirimidobenzazepina con actividad inhibidora de Aurora cinasas. Se han descubierto ahora compuestos de pirimidobenzazepina con potencia inesperadamente superior frente a Aurora A cinasa. Los compuestos son útiles para inhibir la actividad de Aurora A cinasa in vitro e in vivo, y son especialmente útiles para el tratamiento de diversas enfermedades proliferativas celulares.

Por lo tanto, en un aspecto, la invención proporciona un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (1):

comprendiendo dicho procedimiento hacer reaccionar un compuesto de fórmula (iv) con un compuesto de fórmula (v):

para dar un compuesto de fórmula (1).

En algunas realizaciones, la reacción del compuesto de fórmula (iv) con el compuesto de fórmula (v) se lleva a cabo en presencia de metanol y carbonato potásico.

En algunas realizaciones, el procedimiento comprende además la etapa de preparar la sal sódica del compuesto de fórmula (1). En ciertas realizaciones, la sal sódica se prepara haciendo reaccionar el compuesto de fórmula (1) con hidróxido sódico.

En un segundo aspecto, la invención proporciona un procedimiento para preparar 4-{[9-cloro-7-(2-fluoro-6- metoxifenil)-5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-il]amino}-2-metoxibenzoato de sodio que comprende hacer reaccionar ácido 4-{[9-cloro-7-(2-fluoro-6-metoxifenil)-5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-il]amino}-2-metoxibenzoico con hidróxido sódico.

El compuesto de fórmula (1) también se puede identificar mediante el siguiente nombre químico:

Los compuestos de fórmula (1) son inhibidores de Aurora cinasa. Los compuestos pueden evaluarse in vitro o in vivo en busca de su capacidad para unirse a y/o inhibir una Aurora cinasa. Los ensayos in vitro incluyen ensayos para determinar la inhibición de la capacidad de una Aurora cinasa para fosfolirar una proteína o péptido sustrato. Los ensayos in vitro alternativos cuantifican la capacidad del compuesto para unirse a una Aurora cinasa. La unión del inhibidor puede medirse radiomarcando el inhibidor antes de unión, aislando el complejo inhibidor/Aurora cinasa y determinado la cantidad de radiomarcador unido. Como alternativa, la unión del inhibidor puede determinarse realizando un experimento de competición en el que se incuban nuevos inhibidores con Aurora cinasa unida a un radioligando conocido. Los compuestos de la invención también pueden ensayarse en busca de su capacidad para afectar a las funciones celulares o fisiológicas mediadas por la actividad de Aurora cinasa. Se describen en los Ejemplos y/o se conocen en la técnica ensayos para cada una de estas actividades.

El compuesto de fórmula (1) se puede usar en un método para inhibir la actividad de Aurora cinasas en una célula, que comprende poner en contacto una célula en la que se desea inhibición de Aurora cinasa con el inhibidor de Aurora cinasa de fórmula (1) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Preferiblemente, el método provoca una inhibición de la proliferación celular de las células con las que se pone en contacto. La frase "inhibición de la proliferación celular" se usa para indicar una capacidad de un inhibidor de Aurora cinasa para inhibir el número de células o el crecimiento celular en células que entran en contacto en comparación con células que no entran en contacto con el inhibidor. Puede realizarse una evaluación de la proliferación celular contando células usando un contador celular o mediante un ensayo de viabilidad celular, por ejemplo un ensayo BrdU, MTT, XTT o WST. Cuando las células están en un crecimiento sólido (por ejemplo, un tumor sólido u órgano), puede realizarse tal evaluación de la proliferación celular midiendo el crecimiento, por ejemplo con calibres, y comparando el tamaño del crecimiento de células puestas en contacto con células no puestas en contacto.

Preferiblemente, el crecimiento de células puestas en contacto con el inhibidor se retrasa al menos alrededor de 50% en comparación con el crecimiento de células no puestas en contacto. En diversas realizaciones, la proliferación celular de células puestas en contacto se inhibe en al menos alrededor de 75%, al menos alrededor de 90% o al menos alrededor de 95% en comparación con células no puestas en contacto. En algunas realizaciones, la frase "inhibición de la proliferación celular" incluye una reducción del número de células puestas en contacto, en comparación con células no puestas en contacto. De este modo, un inhibidor de Aurora cinasa que inhibe la proliferación celular en una célula puesta en contacto puede inducir que la célula puesta en contacto experimente retraso del crecimiento, experimente detención del crecimiento, experimente muerte celular programada (es decir, apoptosis), o experimente muerte celular necrótica

Se ha descubierto que los compuestos de fórmula (1), que se caracterizan por un sustituyente metoxi en la posición orto con respecto al sustituyente de ácido carboxílico en el Anillo C y un sustituyente no de hidrógeno Rb en el Anillo

B, muestran potencia sorprendente en ensayos basados en células cuando se comparan con compuestos estructuralmente similares.

Por ejemplo, la Tabla 1 muestra una comparación del compuesto 1 con los compuestos i, ii y iii descritos en Claiborne et al., Publicación de Patente Internacional WO 05/111039. Los compuestos 1 y ¡-¡¡i se ensayaron en tres 5 ensayos celulares: (1) ensayo de autofosforilación de Aurora A pT288; (2) ensayo de proliferación celular de BrdU en

células HCT116; y (3) ensayo de proliferación celular de BrdU en células SW480. Los protocolos para estos ensayos se conocen en la técnica y se describen en el Ejemplo 6. Los compuestos i y ii mostraron potencia muy similar en los tres ensayos, lo que sugiere que la adición de un sustituyente metoxi en la posición orto con respecto al sustituyente... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para preparar un compuesto de fórmula (1):

comprendiendo dicho procedimiento hacer reaccionar un compuesto de fórmula (iv) con un compuesto de fórmula

(v):

para dar un compuesto de fórmula (1).

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la reacción del compuesto de fórmula (iv) con el compuesto de fórmula (v) se lleva a cabo en presencia de metanol y carbonato potásico.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 ó 2, que comprende además la etapa de preparar una sal sódica del

compuesto de fórmula (1).

4. El procedimiento de la reivindicación 3, en el que la etapa de preparar una sal sódica comprende hacer reaccionar el compuesto de fórmula (1) con hidróxido sódico.

5. Un procedimiento para preparar 4-{[9-cloro-7-(2-fluoro-6-metoxifenil)-5H-pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-il]amino}- 15 2-metoxibenzoato de sodio, que comprende hacer reaccionar ácido 4-{[9-cloro-7-(2-fluoro-6-metoxifenil)-5H-

pirimido[5,4-d][2]benzazepin-2-il]amino}-2-metoxibenzoico con hidróxido sódico.