Planta de maíz MON88017 y composiciones y procedimientos de detección de la misma.

Una planta de maíz, progenie, semilla o parte de la misma, tolerante a glifosato y resistente al gusano de la raíz del maíz,

el genoma de dicha planta, progenie, semilla o parte que comprende el inserto transgénico mostrado en la Figura 2 y las secuencias de unión transgénica/genómica de SEC ID Nos: 1 y 2, el inserto transgénico mostrado en la Figura 2 que está presente en el evento de maíz MON88017 depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) con número de acceso PTA-5582.

Planta de maíz MON8817 y composiciones y procedimientos de detección de la misma Campo de la invención

La presente invención se refiere al campo de la biología molecular de las plantas. Más específicamente, la invención se refiere a una planta de maíz MON8817 tolerante a glifosato y resistente a insectos y al análisis y los procedimientos para detectar la presencia del ADN de la planta de maíz MON8817 en una muestra de planta y composiciones de la misma.

Descripción de la técnica relacionada

El maíz es un cultivo importante y es una fuente principal de alimento en muchas regiones del mundo. Los procedimientos de biotecnología se han aplicado al maíz para la mejora de los rasgos agronómicos y de la calidad del producto. Uno de tales rasgos agronómicos es la tolerancia a los herbicidas, en particular, la tolerancia al herbicida glifosato. Este rasgo en el maíz se ha conferido mediante la expresión de un transgén en la planta de maíz que expresa una 5-enolpiruvil siquimato-3-fosfato sintasa (CP4 EPSPS, Patente de Estados Unidos 5.633.435) resistente a glifosato. Otro rasgo agronómico es la resistencia a Insectos, por ejemplo, la resistencia de la planta del maíz genéticamente modificada al taladro del maíz y al gusano de la raíz del maíz (Patente de Estados Unidos 6.489.542 y Patente de Estados Unidos 6.62.988). Sería ventajoso ser capaz de detectar la presencia de ADN transgénico/genómico de una planta en particular con el fin de determinar si la progenie de un cruce sexual contiene el ADN transgénico/genómico de interés. Además, un procedimiento para detectar una planta en particular sería útil cuando cumple con las regulaciones que requieren la aprobación previa a la comercialización y el etiquetado de alimentos derivados de las plantas de cultivo recombinantes.

Se sabe que la expresión de genes exógenos en las plantas está influenciada por su posición cromosómica, posiblemente debido a la estructura de la cromatina (por ejemplo, la heterocromatina) o a la proximidad de elementos reguladores transcrlpclonales (por ejemplo, potenciadores) cerca del sitio de integración (Weising et ál., Ann. Rev. Genet 22:421-477, 1988). Por esta razón, a menudo es necesario explorar un gran número de plantas con el fin de Identificar una planta que se caracterice por la expresión óptima de un gen de interés introducido. Por ejemplo, en las plantas y en otros organismos se ha observado que puede haber una amplia variación entre plantas en los niveles de expresión de un transgén introducido. También puede haber diferencias entre los patrones de expresión espacial o temporal, por ejemplo, diferencias en la expresión relativa de un transgén en diversos tejidos de la planta, que puede no corresponder a los patrones esperados a partir de elementos reguladores transcripcionales presentes en la construcción génica introducida. Por esta razón, es común producir de cientos a miles de diferentes plantas transgénicas y explorar aquellas plantas en busca de una sola planta que tenga los niveles de expresión y fenotipo del transgén que se desea con fines comerciales. Una planta que tiene niveles o patrones de expresión del transgén deseado es útil para la introgresión del transgén en otros fondos genéticos mediante cruzamiento sexual usando procedimientos de reproducción convencionales. La progenie de tales cruces mantiene las características de expresión del transgén del transformante original. Esta estrategia se usa para garantizar una expresión génica fiable en diversas variedades que están bien adaptadas a las condiciones de cultivo locales y a las demandas del mercado.

Es posible detectar la presencia de un transgén mediante cualquiera de los procedimientos de detección de ácidos nucleicos bien conocidos tales como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o la hibridación de ADN usando sondas de ácido polinucleico. Estos procedimientos de detección generalmente cebadores de ADN o moléculas sonda que son específicos para los elementos genéticos, tales como promotores, líderes, intrones, regiones codificantes, terminadores de transcripción 3, genes marcadores, etc., que son los componentes de los transgenes de una construcción de ADN. Como resultado, tales procedimientos no pueden ser útiles para discriminar entre diferentes eventos transgénicos, en particular los producidos usando la misma construcción de ADN transgénico a menos que se conozca la secuencia de ADN genómico adyacente al ADN del transgén insertado. Se han desarrollado procedimientos de detección de ADN específicos de evento para muchas introducciones de plantas de cultivo transgénicas, por ejemplo, la remolacha azucarera (Patente de Estados Unidos 6.531.649), el trigo (Patente de Estados Unidos publicada 226253), el maíz resistente a insectos (Patente de Estados Unidos publicada 2212582), y un evento nk63 de maíz tolerante a glifosato (Patente de Estados Unidos publicada 221396).

La presente invención se refiere a una planta de maíz MON8817 tolerante a glifosato y resistente al gusano de la raíz del maíz, a composiciones contenidas en el presente documento, al procedimiento para la detección de la reglón de Inserción transgénlca/genómlca en la planta de maíz MON8817 y a la progenie de la misma que contiene estas composiciones.

Sumario

La presente invención se refiere a una planta de maíz, a su progenie, semilla o parte de la misma, tolerante a glifosato y resistente al gusano de la raíz del maíz, al genoma de dicha planta, a la progenie, semilla o parte que comprende el Inserto del transgén mostrado en la Fig. 2 y a las secuencias de unión transgénica/genómica de las

SEC ID Nos: 1 y 2, estando presente el inserto del transgén mostrado en la Fig. 2 en el evento de maíz MON8817 depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) con el número de registro PTA-5582.

La invención proporciona adicionalmente una molécula de ADN aislada, la cual

(i) es una región transgénica/genómica SEC ID N°: 5 que comprende el ADN de unión transgénico/genómico de la SEC ID N°: 1 y SEC ID N°: 2, o el complemento completo de la misma;

(¡i) es una región transgénica/región genómica SEC ID N°: 3 que comprende el ADN de unión

transgénico/genómico de la SEC ID N°: 1, o el complemento completo de la misma; o

(i¡¡) es una región transgénica/región genómica SEC ID N°: 4 que comprende el ADN de unión

transgénico/genómico de la SEC ID N°: 2, o el complemento completo de la misma.

Se proporciona una molécula de ADN aislada que es una región transgénica/genómica SEC ID N°: 3 o el complemento de la misma, en la que esta molécula de ADN está en el genoma de la planta de maíz MON8817. También se desvela una planta y una semilla de maíz que comprenden en su genoma la SEC ID N°: 3.

Además, se proporciona una molécula de ADN aislada que es una región transgénica/genómica SEC ID N°: 4, o el complemento de la misma, en la que esta molécula de ADN está en el genoma de la planta de maíz MON8817. También se desvela una planta de maíz y una semilla que comprenden en su genoma la SEC ID N°: 4.

Se proporciona una molécula de ADN aislada que es una región transgénica/genómica SEC ID N°: 5 de MON 8817 o el complemento de la misma, en la que esta molécula de ADN está en el genoma de la planta de maíz MON8817. También se desvela una planta de maíz y una semilla que comprenden en su genoma la SEC ID N°: 5.

Adlclonalmente, se proporcionan dos moléculas de ADN que comprenden un par de cebadores para su uso en un procedimiento de detección de ADN, en el que la primera molécula de ADN comprende al menos 11o más

pollnucleótldos contiguos de cualquier parte de la región del ADN del transgén de la molécula de ADN de SEC ID N°.

3 o el complemento de la misma, y una segunda molécula de ADN que comprende al menos 11 o más pollnucleótldos contiguos de cualquier parte de una región de ADN genómica del maíz de SEC ID N°. 3 o el complemento de la misma, en la que cuando estas moléculas de ADN se usan juntas comprenden un conjunto de cebadores de ADN en un procedimiento de amplificación de ADN que produce un amplicón. El amplicón producido usando el par de cebadores de ADN en el procedimiento de amplificación de ADN es diagnóstico para la planta de maíz MON8817 cuando el amplicón contiene la SEC ID N°: 1. El experto en la técnica reconocerá que la primera y segunda moléculas de ADN no están obligadas a consistir solamente en ADN, sino que también pueden estar compuestas exclusivamente de ARN, una mezcla de ADN y ARN, o una combinación de ADN, ARN, u otros nucleótidos o análogos de los mismos que no actúan como moldes para una o más polimerasas. Además, el... [Seguir leyendo]

1. Una planta de maíz, progenie, semilla o parte de la misma, tolerante a gllfosato y resistente al gusano de la raíz del maíz, el genoma de dicha planta, progenie, semilla o parte que comprende el inserto transgénico mostrado en la Figura 2 y las secuencias de unión transgénica/genómica de SEC ID Nos: 1 y 2, el inserto transgénico mostrado en la Figura 2 que está presente en el evento de maíz MON8817 depositado en la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC) con número de acceso PTA-5582.

2. La planta de maíz, progenie, semilla o parte de la misma de la reivindicación 1, en la que el inserto transgénico tiene la secuencia mostrada en la SEC ID N°:5.

3. La planta de maíz, progenie, semilla o parte de la misma de la reivindicación 1 o 2, que son polen, óvulo, semilla, raíces u hojas.

4. La semilla de la planta de maíz de la reivindicación 1, que es una semilla de maíz híbrido en la que al menos un parental es una planta de maíz como se define en las reivindicaciones 1-3.

5. Una molécula de ADN aislada, que

(i) es una región transgénica/genómica SEC ID N°: 5 que comprende el ADN de unión transgénlco/genómico de SEC ID N°: 1 y SEC ID N°: 2, o el complemento completo de la misma;

(ii) es una región transgénica/genómica SEC ID N°: 3 que comprende el ADN de unión transgénlco/genómico de SEC ID N°: 1, o el complemento completo de la misma; o

(i¡¡) es una región del transgénica/genómica SEC ID N°: 4 que comprende el ADN de unión transgénico/genómico de SEC ID N°: 2, o el complemento completo de la misma.

6. Una molécula de ADN para su uso como una sonda de ADN útil para detectar en una muestra el evento del ADN de maíz MON8817, en la que dicha sonda comprende

(i) al menos 16 nucleótidos contiguos de SEC ID N°: 1, o el complemento completo de los mismos, o

(ii) al menos 16 nucleótidos contiguos de SEC ID N°: 2, o el complemento completo de los mismos

e híbrida en condiciones de hibridación rigurosas con ADN MON8817 y no híbrida en condiciones de hibridación rigurosas con ADN genómico de la planta de maíz que no es ADN MON8817

7. Un procedimiento para detectar la presencia de una secuencia de nucleótidos del evento de maíz MON8817 en una muestra biológica, comprendiendo el procedimiento:

(a) poner en contacto la muestra con un par de cebadores de ADN que comprende una primera molécula de ADN que tiene 11 o más nucleótidos contiguos de la región de ADN transgénica de SEC ID N°: 3 y una segunda molécula de ADN que tiene 11o más nucleótidos contiguos de la región de ADN genómico del maíz de SEC ID N°: 3, o que comprende una primera molécula de ADN que tiene 11o más nucleótidos contiguos de la región de ADN transgénica de SEC ID N°: 4 y una segunda molécula de ADN que tiene 11o más nucleótidos contiguos de la región de ADN genómico del maíz de SEC ID N°: 4, en la que cuando el primer par se usa en una reacción de amplificación de ADN con ADN genómico del evento de maíz MON8817, produce un amplicón que comprende la SEC ID N°: 1 o SEC ID N°: 2, respectivamente;

(b) realizar una reacción de amplificación de un ácido nucleico, produciendo de este modo un amplicón, y

(c) detectar dicho amplicón,

en el que dicho amplicón comprende la SEC ID N°: 1 o SEC ID N°: 2.

8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que dicho par de cebadores de ADN comprende la secuencia de nucleótidos como se expone en la SEC ID N°: 6 y SEC ID N°: 7

9. Un procedimiento para detectar la presencia del ADN del evento de maíz MON8817 en una muestra biológica,

(I) comprendiendo el procedimiento:

(a) poner en contacto la muestra con una sonda que híbrida en condiciones de hibridación rigurosas con el ADN MON8817 y no híbrida en condiciones de hibridación rigurosas con el ADN genómico de la planta de maíz que no es ADN MON8817, en la que dicha sonda es, o es completamente complementaria, a una secuencia seleccionada de entre el grupo que consiste en la SEC ID N°: 1 y SEC ID N°: 2;

(b) someter la muestra y la sonda a condiciones de hibridación rigurosas; y

(c) detectar la hibridación de la sonda con el ADN de MON8817, o

(II) comprendiendo el procedimiento:

(a) poner en contacto la muestra con una sonda en condiciones de hibridación rigurosas, en la que dicha sonda comprende una secuencia de nucleótidos contiguos que es, o es completamente complementaria, a

una secuencia seleccionada del grupo que consiste en la SEC ID N°: 1 y SEC ID N°: 2; y (b) detectar la hibridación de dicha sonda con dicha muestra, en la que la hibridación de dicha sonda con dicha muestra es diagnósticada por la presencia de dicho polinucleótido del evento de maíz MON8817 en dicha muestra.