Modulación mediada por microARN de factores estimulantes de colonias.

Un inhibidor de microARN-155 para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o autoinmunitaria mediante la inhibición de la expresión de uno o más factores estimulantes de colonias (CSF) en una célula,

en el que dicho inhibidor comprende un oligómero de LNA antimiR monocatenario de 7-23 nucleótidos de longitud, en el que dicho oligómero comprende una secuencia nucleotídica contigua que comprende una o más unidades de LNA, en el que dicha secuencia nucleotídica contigua es totalmente complementaria de al menos 6 nucleótidos contiguos presentes en microARN-155.

Modulación mediada por microARN de factores estimulantes de colonias CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a la modulación de proteínas inmunorreguladoras, incluyendo citocinas tales como factores estimulantes de colonias (CSF), mediante el uso de inhibidores de microARN-155 o miméticos. La presente invención se refiere a compuestos de LNA novedosos que median la regulación negativa simultánea de la proteína quimioatrayente de monocitos 1 (MCP-1 o CCL2) e interleucina 6, así como de M-CSF y G-CSF. Dichos compuestos de LNA son altamente útiles en la prevención o el tratamiento de enfermedades inflamatorias o autoinmunitarias crónicas o agudas, especialmente aquellas asociadas a una acumulación aberrante de linfocitos o monocitos tales como enfermedades inflamatorias o autoinmunitarias crónicas y agudas, acumulación aberrante de linfocitos o monocitos, artritis, artritis idiopática juvenil, artritis reumatoide, artritis aguda y crónica, asma, aterosclerosis, nefropatía diabética, enfermedad inflamatoria intestinal, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, nefritis, glomerulonefritis, pancreatitis, fibrosis pulmonar, psoriasis, reestenosis, rechazo de trasplante, etapas tempranas de respuestas alérgicas, inhibición de LTC4 para prevenir la AHR (hipersensibilidad de las vías respiratorias), infección por tuberculosis y malignidad, apoplejía, enfermedad de Castleman, neoplasia, mieloma múltiple de grado alto, mesoteliomas malignos, síndrome paraneoplásico de mesoteliomas, inmunosupresión, caquexia, trombocitosis, amiloidosis, osteogénesis imperfecta, homocistinuria, osteoporosis, osteopetrosis, inflamación ósea asociada a artritis y artritis reumatoide, enfermedad periodontal, displasia fibrosa, enfermedad de Paget, insuficiencia renal crónica, endocrinopatías, hipercalcemia, estados de deficiencia, síndromes de malabsorción, enfermedad hepática crónica, metástasis de cáncer y progresión de tumor mamario hasta metástasis.

Más específicamente, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden dichos compuestos de LNA y al uso de estos compuestos y composiciones en la prevención o el tratamiento de dichas enfermedades.

CASOS RELACIONADOS

Las siguientes solicitudes relacionadas dan a conocer inhibidores de microARN-155 (antimiR): W27/112754, W27/112753, solicitud EP número 81478 y solicitudes provisionales de EE.UU. US 6/979217 y US 61/2862.

ANTECEDENTES

Los factores estimulantes de colonias (CSF) son glicoproteínas secretadas que se unen a proteínas receptoras sobre las superficies de citoblastos hematopoyéticos y activan así rutas de señalización intracelular que pueden causar que las células proliferen y se diferencien en una clase específica de células sanguíneas (habitualmente leucocitos). En seres humanos, existen tres genes de CSF, CSF1 que codifica el CSF de macrófagos (M-CSF), CSF2 que codifica el CSF de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) y CSF3 que codifica el CSF de granulocitos (G- CSF).

Hamilton, Nature Reviews 8 (28), pág. 533-544 reseña que el agotamiento de los CSF tiene un beneficio terapéutico en muchas enfermedades inflamatorias y/o autoinmunitarias y que existen numerosas terapias de anticuerpos en desarrollo clínico orientadas a CSF para la terapia de la inflamación. El documento WO 23/28752 describe igualmente que pueden modularse las respuestas inmunitarias reduciendo la actividad de CSF1.

Neupogen® (filgrastim) es un G-CSF humano producido heterólogamente por Amgen para potenciar la concentración de leucocitos en pacientes de cáncer que se están tratado con quimioterapia.

Se ha indicado G-CSF en enfermedades inflamatorias autoinmunitarias crónicas, tales como respuestas de hipersensibilidad de tipo II, incluyendo artritis reumatoide.

El microARN-155 se induce durante la respuesta inflamatoria de macrófagos (OConnell et al., PNAS 14(5), pág.164-9), y la sobreexpresión de miR-155 aumenta el número de células granulocíticas/monocíticas (GM) en la médula ósea (OConnell et al., 28, J. Experimental Med. 25(3), pág. 585-594).

El documento WO 27/16548 describe que mir-155 está regulado positivamente en cáncer de mama. Esto se confirma en un resumen de póster de Obad et al. 28, European Journal of Cancer-Supplements 28, 6(9), pág.142.

El documento W28/17126 hace referencia a compuestos anticodificantes orientados al factor estimulante de granulocitos (G-CSF) y al uso de dichos compuestos para el tratamiento de enfermedad pulmonar. La proteína G- CSF se ha desarrollado como agente terapéutico para aumentar los recuentos de leucocitos y puede potenciar la capacidad del sistema inmunitario de generar una respuesta tipo Th-2 que puede reducir las respuestas inflamatorias mediadas porTh-1, por ejemplo en enfermedad de Crohn.

G-CSF

El factor estimulante de colonias de granulocltos (G-CSF) es una hormona factor estimulante de colonias. Es una glicoproteína, factor de crecimiento o citocina producido por una serie de tejidos diferentes para estimular la médula ósea a producir granulocitos y citoblastos. El G-CSF estimula entonces la médula ósea a liberarlos en la sangre. Estimula también la supervivencia, proliferación, diferenciación y función de precursores de neutrófilos y neutrófilos maduros.

Desempeña un papel importante en enfermedades inflamatorias de articulaciones, ya que los ratones deficientes en G-CSF están protegidos de artritis aguda y crónica. Se asociaba la gravedad reducida a una movilización debilitada de células granulocíticas de la médula ósea y menos infiltrado celular y activación celular en las articulaciones inflamadas. Se ha demostrado también que el bloqueo de G-CSF en artritis inducida por colágeno establecida en ratones WT reduce notablemente las manifestaciones patológicas y es tan eficaz como el bloqueo del factor de necrosis tumoral. El G-CSF desempeña un papel crítico en el avance de la inflamación de articulaciones y el G-CSF es una diana terapéutica potencial en enfermedades inflamatorias de articulaciones tales como artritis reumatoide (Lawloref a/., PNAS, 24).

Se ha reseñado el empeoramiento de la psoriasis después del tratamiento con G-CSF (Feliu et al., JNCI, 1997) indicando un papel para G-CSF en la patogénesis de la psoriasis.

M-CSF

El factor estimulante de colonias de macrófagos, o M-CSF, es una citocina secretada que influye a citoblastos hematopoyéticos a diferenciarse en macrófagos u otros tipos celulares relacionados. También el factor estimulante de colonias de macrófagos, M-CSF, apoya la formación de osteoclastos (Yoshida et al. Nature 345: 442-444,199). Los osteoclastos median la readsorción ósea. Los osteoclastos son células multinucleadas que se diferencian a partir de las células hematopoyéticas (Walker, Science 19: 784-785, 1975) y comparten un citoblasto común con las células del linaje de monocitos-macrófagos (Ash et al., Nature 283: 669-67, 198). La diferenciación de precursores de osteoclastos en osteoclastos multinucleados maduros requiere diferentes factores, incluyendo estímulos hormonales y locales (Walker, Science 19: 784-785,1975) y se ha mostrado que el hueso vivo y las células óseas desempeñan un papel crítico en el desarrollo de osteoclastos (Flagenaars et al., Bone Miner. 6: 179- 189, 1989). Se requieren también células osteoblásticas o de estroma de médula ósea para la diferenciación de osteoclastos, y uno de los factores producidos por estas células que apoya la formación de osteoclastos es el factor estimulante de colonias de macrófagos, M-CSF (Yoshida et al., Nature 345: 442-444, 199).

Por tanto, sigue habiendo la necesidad en la técnica de identificar nuevos agentes y procedimientos para prevenir o tratar la osteólisis o metástasis del cáncer, incluyendo metástasis ósea osteolítica. Las enfermedades óseas metabólicas asociadas a una actividad osteoclástica relativamente aumentada incluyen endocrinopatías (incluyendo hipercortisolismo, hipogonadismo, hiperparatiroidismo primario o secundario, hipertiroidismo), hipercalcemia, estados de deficiencia (incluyendo raquitismo/osteomalacia, escorbuto, malnutrición), enfermedades crónicas (incluyendo síndromes de malabsorción, insuficiencia renal crónica (incluyendo osteodistrofia renal), enfermedad hepática crónica (incluyendo osteodistrofia hepática)), fármacos (incluyendo glucocorticoides (osteoporosis inducida por glucocorticoides), heparina y alcohol) y enfermedades hereditarias (incluyendo osteogénesis imperfecta, homocistinuria), cáncer, osteoporosis, osteopetrosis, inflamación ósea asociada a artritis y artritis reumatoide, enfermedad periodontal, displasia fibrosa y/o enfermedad de Paget.

El M-CSF desempeña un papel más general en la formación... [Seguir leyendo]

1. Un inhibidor de microARN-155 para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria o autoinmunitaria mediante la inhibición de la expresión de uno o más factores estimulantes de colonias (CSF) en una célula, en el que dicho inhibidor comprende un oligómero de LNA antimiR monocatenario de 7-23 nucleótidos de longitud, en el que dicho oligómero comprende una secuencia nucleotídlca contigua que comprende una o más unidades de LNA, en el que dicha secuencia nucleotídica contigua es totalmente complementarla de al menos 6 nucleótidos contiguos presentes en microARN-155.

2. El Inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 1, en el que dicho Inhibidor es para la Inhibición simultánea de la expresión de G-CSF, M-CSF, CCL-2 e IL-6 en una célula.

3. El inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 1 o 2, en el que dicha célula se selecciona del grupo consistente en monocltos/macrófagos, granulocltos, neutrófilos, eosinófilos, citoblastos hematopoyéticos pluripotentes y unidades formadoras de colonias (UFC).

4. El inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 3, en el que dicha célula es una célula precursora de leucocito.

5. El inhibidor de microARN-155 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que dicha célula sobreexpresa dicho CSF.

6. El inhibidor de microARN-155 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que dicho oligómero consiste en o comprende una secuencia nucleotídica contigua que es totalmente complementaria de la región de semilla de microARN-155.

7. El inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 6, en el que la secuencia nucleotídica contigua del oligómero es complementaria de la correspondiente región de una SEQ ID NO 2.

8. El inhibidor de microARN-155 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 6-7, en el que la secuencia nucleotídica del oligómero consiste en 7, 8, 9 o 1 nucleótidos contiguos que son complementarios de la correspondiente reglón de microARN-155.

9. El Inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 8, en el que la secuencia nucleotídica contigua es totalmente complementarla de una secuencia encontrada en la SEQ ID NO 2.

1. El Inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 7, en el que la secuencia nucleotídica contigua consiste en 7-16 nucleótidos.

11. El inhibidor de microARN-155 para su uso según la reivindicación 1, en el que la secuencia nucleotídica contigua del oligómero consiste en 8-11 nucleótidos.

12. El inhibidor de microARN-155 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 6-11, en el que dicho oligómero comprende al menos un 5% de nucleótidos de LNA.

13. El inhibidor de microARN-155 para su uso según las reivindicaciones 6-12, en el que la secuencia nucleotídica contigua del oligómero consiste en 7, 8, 9 o 1 nucleótidos de LNA contiguos.

14. El inhibidor de microARN-155 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el que los ligamientos internucleosídicos entre las unidades nucleobásicas de la secuencia nucleotídica contigua son ligamientos internucleosídicos de fosforotloato.

15. El inhibidor de microARN-155 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que el oligómero se selecciona del grupo consistente en las SEQ ID NO: 5-25.