MÉTODO PRONÓSTICO DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES MEDIANTE EL GENOTIPADO DE VARIANTES GENÉTICAS DEL PÉPTIDO INTESTINAL VASOACTIVO.

Método pronóstico de enfermedades autoinmunes mediante el genotipado de variantes genéticas del péptido intestinal vasoactivo.

La presente invención se refiere a un método de pronóstico de determinación de la gravedad de enfermedades autoinmunes, por ejemplo, artritis reumatoide, espondiloartritis y lupus eritematosos sistémico, caracterizado por comprender la detección de ciertos polimorfismos genéticos del gen VIP, entre los que se encuentran rs35643203, rs71575932 y/o rs7755568. También el método de la invención es útil para establecer un tratamiento personalizado del paciente. También se refiere al uso de los polimorfismos genéticos del gen VIP descritos en la invención como biomarcadores de dichas enfermedades, así como a un kit que comprende primers o sondas para la detección de dichos polimorfismos y a su uso para el mismo fin.

La presente invención se refiere a un método pronóstico de enfermedades autoinmunes que comprende la detección de polimortismos genéticos del gen del péptido intestinal vasoactivo (VIP) . Por lo tanto, la presente invención se podria encuadrar en el campo de la biomedicina.

ESTADO DE LA TÉCNICA

Las enfermedades autoinmunes, como la artritis reumatoide (AR) , la psoriasis, la enfermedad inflamatoria intestinal, la espondiloartritis o el lupus eritematoso sistémico, comparten una serie de mecanismos etiopatogénicos que ha hecho que se las denomine globalmente como "enfermedades inflamatorias mediadas por mecanismos inmunes" (EIMMI) y también comparten su respuesta a tratamientos inmunomoduladores o inmunosupresores similares o iguales. La AR es la enfermedad reumática autoinmune más común.

La AR provoca inflamación crónica de la membrana sinovial de las articulaciones diartrodiales, lo cual causa su progresivo deterioro, y como consecuencia, provoca una discapacidad y deterioro de la calidad de vida del paciente. Además, con cierta frecuencia se acompaña de manifestaciones sistémicas y de un aumento en el número de comorbilidades e incluso de la mortalidad en comparación con la población general. Su etiologia se considera de origen multigénico con una importante interacción con factores ambientales. Su prevalencia oscila entre un 0, 3 y un 1%, siendo por ejemplo en España la prevalencia de un 0, 5%, lo que supone unos 200.000 pacientes con AR en dicho pais. Dada su capacidad para producir incapacidad funcional, la AR es una de las principales causas de incapacidad laboral permanente en España. Por tanto, se trata de una enfermedad con una gran relevancia económica y social.

Las espondiloartropatias son un grupo heterogéneo de enfermedades que comparten manifestaciones clínicas y radiológicas, de las cuales la espondilitis anquilosante es la más prevalente. Se caracterizan por la presencia de inflamación de las articulaciones de la columna y las sacroilíacas, así como su asociación a la presencia del HLA-B27, lo que condiciona su asociación familiar y una serie de mecanismos patogénicos comunes. Aunque la prevalencia de la espondilitis anquilosante es menor que la de la AR, también tiene una importante capacidad para deteriorar la capacidad funcional de los pacientes, lo que también conlleva altos costes sociales, especialmente derivados de la incapacidad laboral que provocan, ya que afecta a pacientes de menor edad.

Por otra parte, el lupus eritematosos sistémico es una enfermedad muy heterogénea que se caracteriza por una activación del sistema inmune en su vertiente humoral lo que condiciona la aparición de autoanticuerpos, comúnmente anticuerpos antinucleares, anti-DNA y otros. Su expresión clínica es muy variable desde formas clínicamente leves e incluso silentes hasta formas catastróficas con afectación de órganos vitales como el riñón, cerebro, corazón o pulmones. Su prevalencia es menor que la de las dos EIMMI descritas previamente y afecta mayoritariamente a mujeres jóvenes.

Durante los últimos años se ha ido acumulando evidencias que demuestran que el inicio de tratamiento precoz con fármacos modificadores de la enfermedad (FAME) permite un mejor control de las EIMMI. Aun así, muchos pacientes no alcanzan el estado ideal de remisión, probablemente porque no se establece un tratamiento lo suficientemente intenso desde el inicio, por no poderse determinar la gravedad con la que va a cursar la enfermedad.

Por todo ello, se hace necesaria la búsqueda de elementos que permitan determinar cuál va a ser el curso evolutivo de la enfermedad y que, por tanto, permitan determinar precozmente la intensidad del tratamiento adecuada para cada paciente, asumiendo los riesgos de los tratamientos más agresivos para pacientes que vayan a tener un peor pronóstico y evitando estos tratamientos agresivos en los pacientes que vayan a tener una forma leve de la enfermedad. En este sentido ya se han realizado algunos estudios sobre cuantificación de determinadas proteínas o péptidos en fluidos biológicos, entre los que se encuentra el VIP (por ejemplo, Martínez e et al. 2014 PLOS One 1 :e85248) sin embargo, los métodos de cuantificación utilizados hasta la fecha tienen una mala reproducibilidad interensayo, de modo que se hace necesario un método más fiable y reproducible. En lo que respecta a VIP, no se han observado variantes genéticas asociadas a un mayor riesgo para padecer enfermedades autoinmunes. De hecho, puede ocurrir que variantes genéticas de determinadas moléculas incidan en el riesgo de desarrollar las enfermedades autoinmunes, pero no influyan en el curso evolutivo de las mismas y, por el contrario, que moléculas cuya variabilidad genética no influye en el riesgo de desarrollar una enfermedad autoinmune, sí modulen su gravedad. En este sentido, se han realizado estudios de variantes genéticas de diversos genes con la asociación al pronóstico en la AR (por ejemplo W0200801 0085) , aunque no hay resultados definitivos y, en concreto, no se ha estudiado previamente el gen de VIP desde el punto de vista de la predicción pronóstica. Así pues, se hace necesaria la búsqueda de marcadores reproducibles que permitan una mejor determinación del pronóstico de las enfermedades autoinmunes, o que puedan suponer alternativas o complementen los biomarcadores ya disponibles para detectar a pacientes que respondan mejor o peor a un determinado tratamiento, lo cual permitiría ahorrar tiempo y costes en el manejo de las EI MMI.

DESCRIPCiÓN DE LA INVENCiÓN

En la presente invención se han determinado variantes genéticas del gen VfP que se asocian a un mayor riesgo de tener un mal curso evolutivo de enfermedades autoinmunes, ejemplificado por la artritis reumatoide, espondiloartritis y lupus eritematoso sistémico, y necesitan de un tratamiento más intenso a lo largo de su seguimiento. Dichas variantes génicas se asocian a un bajo nivel sérico del péptido VIP.

En la presente invención se demuestra la utilidad de varios polimorfismos ("single nucleotide prolymorphisms", SNP) del gen V/P, en concreto los SNPs rs35643203, rs71 575932 y/o rs7755568 en el pronóstico de artritis reumatoide. Los autores han demostrado que rs35643203, rs71575932 y rs7755568 están en desequilibrio de ligamiento, por lo que los tres resultan informativos para la presente invención. Además de estos SNPs, se ha demostrado que si se utilizan rs3823082 y/o rs688136 también se puede pronosticar la gravedad de la enfermedad. También los polimorfismos rs12213214, rs60946248, rs140023105, rs7764067, rs12201030, rs74760293, rs149081483 y rs12201140; o cualquiera de sus combinaciones; en combinación con los anteriores resulta de utilidad. Además, en la presente invención se muestran resultados para otras enfermedades inflamatorias mediadas por mecanismos inmunes (EIMMI) , como son la espondiloartritis y el lupus eritematoso sistémico, demostrándose que los resultados obtenidos para AR son extrapolables a otras EIMMI. Por lo tanto, la presente invención se refiere a un método de pronóstico de una enfermedad autoinmune, como por ejemplo, enfermedad inflamatoria intestinal, psoriasis, espondiloartritis (por ejemplo, la espondilitis anquilosante) o el lupus eritematoso sistémico. También se refiere a un método para establecer un tratamiento personalizado del paciente que presenta una EIMMI.

Por lo tanto, un primer aspecto de la invención se refiere a un método de obtención de datos útiles para el pronóstico de una enfermedad autoinmune que comprende la detección de los polimorfismos genéticos del gen "péptido intestinal vasoactivo" (VIP) rs35643203, rs71575932 y/o rs7755568 en una muestra biológica aislada de un sujeto que padece una enfermedad autoinmune. En adelante nos referiremos a éste como al "método primero de la invención".

En la presente invención se entiende por gpronóstico" la capacidad de determinar en pacientes de una enfermedad autoinmune cómo va a evolucionar dicha enfermedad en cuanto a su gravedad. El término "pronóstico" también se refiere a la capacidad de detectar sujetos ya diagnosticados de una enfermedad autoinmune con alta probabilidad de sufrir un empeoramiento de la enfermedad. Esta mala evolución o "mal pronóstico" puede definirse como una menor posibilidad de alcanzar la remisión de la enfermedad, teniendo en cuenta que el experto en la materia conoce que existen múltiples formas de definir este estado ideal de remisión en cada enfermedad. Por ejemplo en la artritis reumatoide existen diferentes formas de definir el estado ideal de remisión, como por ejemplo aunque sin limitarse los descritos en Felson et al. Arthritis Rheum 2011 ;63:573-586. Otras situaciones que también pueden considerarse mala evolución o mal pronóstico... [Seguir leyendo]

1. Método de obtención de dalos útiles para el pronóstico de una enfermedad auloinmune que comprende la detección de los polimorfismos genéticos del gen "péptido intestinal vasoaetivo" (V/P) rs35643203, rs71575932 y/o rs7755568 en una muestra biológica aislada de un sujeto que padece una enfermedad autoinmune.

2. Método según la reivindicación 1 que además comprende la detección del polimorfismo genético rs3823082 y/o rs688136 del gen VIP.

3. Método según la reivindicación 2 que además comprende la detección de al menos uno de los polimorfismos genéticos del gen VIP que se selecciona de la lisia que comprende: rs12213214, rs60946248, rs140023105, rs7764067, rs12201030, rs74760293, rs149081483 y rs12201140; o cualquiera de sus combinaciones.

4. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 donde la enfermedad autoinmune se selecciona de la lista que comprende: artritis autoinmune, espondiloartritis, lupus eritematoso sistémico, psoriasis y enfermedad inflamatoria intestinal.

5. Método según la reivindicación 4 donde la artritis autoinmune es artritis reumatoide.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 donde la muestra biológica es sangre, suero, plasma, saliva, orina, líquido sinovial o linfa.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde el sujeto es un humano.

8. Método in vitro para el pronóstico de una enfermedad autoinmune en un sujeto que padece una enfermedad autoinmune, que comprende:

a. la detección de los polimorfismos genéticos del gen VIP rs35643203, rs71575932 y/o rs7755568 en una muestra biológica ; y

b. la asociación del alelo T del polimorfismo genético rs35643203, la asociación del alelo G del polimorfismo genético rs71575932 y/o la asociación del alelo A del polimorfismo rs7755568, a un mal pronóstico.

9. Método según la reivindicación 8 que además comprende en el paso (a) la delección del polimorfismo '53823082 y/o '5688136 del gen VIP yen el paso (b) la asociación del genotipo TI del polimortismo rs3823082 con un mal pronóstico y/o la asociación del genotipo ce del polimortismo rs688136 con un buen pronóstico.

10. Método según la reivindicación 9 que además comprende la detección en el paso

(a) de al menos uno de los polimortismos genéticos del gen VIP que se selecciona de la lista que comprende rs12213214, rs60946248, rs140023105, rs7764067, rs12201030, '574760293, '5149081483 Y rs12201140; o cualquie, a de sus combinaciones, y la asociación en el paso (b) del alelo A del polimorfismo '512213214, del alelo T del polimorfismo '560946248, del alelo G del polimorfismo '5140023105, del alelo T del polimorfismo '57764067, del alelo G del polimorfismo '512201030, del alelo e del polimorfismo '574760293, del alelo G del polimorfismo rs149081483 y del alelo T del polimorfismo rs12201140, o cualquiera de sus combinaciones, a un mal pronóstico.

11. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 donde además en un paso

(c) se detectan anticuerpos antiproteínas citrulinadas.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 donde la enfermedad autoinmune se selecciona de la lista que comprende: artritis autoinmune, espondiloartritis, lupus eritematoso sistémico, psoriasis y enfermedad inflamatoria intestinal.

13. Método según la reivindicación 12 donde la artritis autoinmune es artritis reumatoide.

14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13 donde la muestra biológica es sangre, plasma, suero, saliva, orina, líquido sinovial o linfa.

15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 14 donde el sujeto es un humano.

16. Método in vitro para diseñar un tratamiento individualizado para un sujeto que padece una enfermedad autoinmune que comprende detectar los polimorfismos genétic05 del gen VIP r535643203, r571575932 y/o r57755568 en la mue5tra biológica; en el que la presencia del alelo T del polimorfismo genético rs35643203, la presencia del alelo G del polimortismo genético rs71575932 y/o la presencia del alelo A del polimorfismo rs7755568 es indicativa de que el tratamiento a administrar es una terapia combinada de fármacos modificadores de la enfermedad (FAME) sintético y biológico.

17. Método según la reivindicación 16 que además comprende la detección del polimorfi5mo del gen VIP r53823082 y/o r5688136 y donde la pre5encia del genotipo TI del polimortismo rs3823082 es indicativa de que el tratamiento a administrar es dicha terapia combinada y/o la presencia del genotipo ce del polimorfismo rs6881 36 es indicativa de que el tratamiento a administrar es monoterapia de FAME no biológico.

18. Método según la reivindicación 17 que además comprende la detección del polimorfismo del gen VIP que se selecciona de la lista que comprende r512213214, r560946248, r5140023105, r57764067, r512201030, r574760293, rs149081483 y rs12201140; o cualquiera de sus combinaciones; y donde la presencia del alelo A del polimorfismo rs1221 3214, del alelo T del polimorfismo rs60946248, del alelo G del polimorfismo rs140023105, del alelo T del polimorfi5mo r57764067, del alelo A del polimorfi5mo r57755568, del alelo e del polimorfi5mo r574760293, del alelo G del polimorfi5mo r5149081483 y del alelo T del polimorfismo rs12201140, o cualquiera de sus combinaciones, es indicativa de que el tratamiento a administrar es dicha terapia combinada y/o la presencia del alelo G del polimortismo rs12201030 es indicativa de que el tratamiento a administrar es monoterapia de FAME no biológico.

19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 donde la enfermedad autoinmune se selecciona de la lista que comprende: artritis autoinmune,

espondiloartritis, lupus eritematoso sistémico, psoriasis y enfermedad inflamatoria intestinal.

20. Método según la reivindicación 19 donde la artritis autoinmune es artritis reumatoide.

. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20 donde la muestra biológica es sangre, plasma, suero, saliva, orina, líquido sinovial o linfa.

22. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21 donde el FAME biológico es un agente bloqueante del factor de necrosis tumoral.

23. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 22 donde el sujeto es un humano.

24. Uso de los polimorfismos genéticos del gen V/P '535643203, '571575932 y/o rs7755568 como marcador pronóstico de enfermedad autoinmune en un sujeto que padece una enfermedad autoinmune.

25. Uso según la reivindicación 24 que además comprende el uso del polimorfismo genético del gen VfP rs3823082 y/o rs688136.

26. Uso según la reivindicación 25 que además comprende el uso de los polimorfismos genéticos del gen VIP seleccionados de la lista que comprende: rs1221 3214, '560946248, '5140023105, '57764067, '512201030, '574760293, rs149081483 y rs12201140, o cualquiera de sus combinaciones.

27. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 26 donde la enfermedad autoinmune se selecciona de la lista que comprende: artritis autoinmune, espondiloartritis, lupus eritematoso sistémico, psoriasis y enfermedad inflamatoria intestinal.

28. Uso según la reivindicación 27 donde la artritis autoinmune es artritis reumatoide.

29. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 24 a 28 donde el sujeto es un humano.

30. Kit que comprende primers y/o sondas para detectar los polimorfismos genéticos del gen V/P '535643203, '571575932 y/o rs7755568.

. Kit según la reivindicación 30 que además comprende primers y/o sondas para detecta, el polimorfismo genético del gen V/P '53823082 y/o '5688136.

32. Kit según la reivindicación 31 que además comprende primers y/o sondas que detectan los polimorfismos genéticos del gen VIP rs12213214, rs60946248,

'5140023105, '57764067, '512201030, '574760293, '5149081483 Y '512201140, o cualquiera de sus combinaciones.

33. Kit según cualquiera de las reivindicaciones 30 a 32 que además comprende anticuerpos, sondas o primers específicos para detectar anticuerpos antiproteínas citrulinadas o péptidos citrulinados o proteínas citrulinadas .

34. Uso del kit según cualquiera de las reivindicaciones 30 a 33 para el pronóstico de una enfermedad autoinmune en un sujeto que padece dicha enfermedad.

35. Uso según la reivindicación 34 donde la enfermedad autoinmune se selecciona de la lista que comprende: artritis autoinmune, espondiloartritis, lupus eritematoso sistémico, psoriasis y enfermedad inflamatoria intestinal.

36. Uso según la reivindicación 35 donde la artritis autoinmune es artritis reumatoide.

37. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 34 a 36 donde el sujeto es un humano.