Inmunoglobulina humanizada reactiva con integrina alpha4beta7.

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A INMUNOGLOBULINAS HUMANIZADAS QUE TIENEN ESPECIFICIDAD DE UNION CON LA INTEGRINA AL 4 BE 7,

Y QUE COMPRENDEN UNA REGION DE UNION CON UN ANTIGENO DE ORIGEN NO HUMANO (POR EJEMPLO, DE ROEDOR) Y AL MENOS UNA PORCION DE UNA INMUNOGLOBULINA DE ORIGEN HUMANO (POR EJ. UNA REGION ESTRUCTURAL HUMANA O UNA REGION CONSTANTE HUMANA). EN UNA REALIZACION DE LA INVENCION, LA INMUNOGLOBULINA HUMANIZADA PUEDE COMPETIR CON ACT -1 MURINO PARA UNIRSE A LA INTEGRINA AL 4 BE7 HUMANA. EN UNA REALIZACION PREFERIDA DE LA INVENCION, DICHA REGION DE UNION CON ANTIGENO DE LA INMUNOGLOBULINA HUMANA COMPRENDE CADA UNA DE LAS REGIONES QUE DETERMINAN LA COMPLEMENTARIEDAD DE LAS CADENAS PESADAS Y LIGERAS DEL ANTICUERPO ACT - 1 MURINO. LA PRESENTE INVENCION ADEMAS SE REFIERE A UNA CADENA PESADA O LIGERA DE INMUNOGLOBULINA HUMANIZADA, A ACIDOS NUCLEICOS AISLADOS QUE COMPRENDEN UNA SECUENCIA QUE CODIFICA PARA UNA INMUNOGLOBULINA HUMANIZADA O PARA UNA CADENA DE INMUNOGLOBULINA DE LA PRESENTE INVENCION (POR EJ. UN ANTICUERPO DE UNA SOLA CADENA), A ESTRUCTURAS QUE COMPRENDEN UN ACIDO NUCLEICO DE LA PRESENTE INVENCION, Y A CELULAS HUESPED QUE COMPRENDEN UN ACIDO NUCLEICO DE LA PRESENTE INVENCION, UTILES EN LA PREPARACION DE INMUNOGLOBULINA HUMANIZADA. DICHAS INMUNOGLOBULINAS PUEDEN USARSE EN APLICACIONES DIAGNOSTICAS Y TERAPEUTICAS EN LOS HUMANOS, POR EJEMPLO, PARA CONTROLAR LA INFILTRACION DE LINFOCITOS (INCLUYENDO RECLUTAMIENTO Y/O ACUMULACION) EN EL TEJIDO DE LAS MUCOSAS.

Inmunoglobulina humana reactiva con integrina α4β7.

Antecedentes Los receptores de integrina son importantes para regular tanto la recirculación de linfocitos como su reclutamiento en los sitios de inflamación (Carlos, T.M. y Harlan, J.M., Blood, 84:2068-2101 (1994) ) . La integrina α4β7 humana tiene varios ligandos, uno de los cuales es la adresina vascular de mucosas MAdCAM-1 (Berlin, C. et al., Cell 74:185-195 (1993) ; Erle, D.J. et al. J. Immunol. 153:517-528 (1994) ) , expresada en vénulas endoteliales superiores de los ganglios linfáticos mesentéricos y en las placas de Peyer (Streeter, P.R. et al., Nature 331:41-46 (1988) ) . Como tal, la integrina α4β7 actúa como receptor de guía que media en la migración de linfocitos al tejido linfoide de la mucosa intestinal (Schweighoffer, T. et al., J. Immunol. 151:717-729 (1993) ) . Además, la integrina α4β7 interacciona con la fibronectina y la molécula de adhesión celular vascular-1 (VCAM-1) .

La enfermedad inflamatoria del intestino (IBD, por sus siglas en inglés) , tal como la colitis ulcerosa y la enfermedad de Crohn, por ejemplo, puede ser una enfermedad debilitante y progresiva que implique inflamación del tracto gastrointestinal. Afectando a una cantidad estimada de dos millones de personas tan sólo en los Estados Unidos, los síntomas incluyen dolor abdominal, calambres, diarrea y hemorragia rectal. Los tratamientos para la IBD han incluido fármacos antiinflamatorios (tales como corticosteroides y sulfasalazina) , fármacos inmunosupresores (tales como 6-mercaptopurina, ciclosporina y azatioprina) y cirugía (tal como colectomía) . Podolsky, New Engl. J. Med., 325:928-937 (1991) y Podolsky, New Engl. J. Med., 325:1008-1016 (1991) .

Los anticuerpos frente a la integrina α4β7 humana, tales como el anticuerpo monoclonal murino (Acm Act-1) , interfieren con la integrina α4β7 que se une a la molécula de adhesión celular de adresina mucosal-1 (MAdCAM-1) presente en las vénulas endoteliales superiores situadas en los ganglios linfáticos de las mucosas. Act-1 fue originalmente aislada por Lazarovits, A.I. et al., J. Immunol. 133:1857-1862 (1984) , de ratones inmunizados con linfocitos T humanos específicos para el toxoide del tétanos y se dijo que era un anticuerpo IgG1/κ de ratón. Un análisis más reciente del anticuerpo por Schweighaffer, T. et al., J. Immunol. 151:717-729 (1993) , demostró que puede unirse a un subgrupo de linfocitos T CD4+ de memoria humanos, que expresan selectivamente la integrina α4β7. Sin embargo, un grave problema con la utilización de anticuerpos murinos para aplicaciones terapéuticas en humanos es que son altamente inmunogénicos en humanos e inducen rápidamente una respuesta de anticuerpos humanos anti-murinos (HAMA, por sus siglas en inglés) , que reduce la eficacia del anticuerpo de ratón en pacientes y puede impedir una administración continuada. La respuesta HAMA da lugar a un rápido aclaramiento del anticuerpo murino, limitando gravemente cualquier beneficio terapéutico. Por lo tanto, se necesitan mejores aproximaciones terapéuticas a las enfermedades inflamatorias del intestino.

Compendio de la invención

La presente invención se refiere a una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por la integrina α4β7, inmunoglobulina que comprende una región de unión a antígeno, de origen no humano, (por ejemplo, de roedor) , y al menos una porción de una inmunoglobulina de origen humano (por ejemplo, una región de marco humana, una región constante humana del tipo gamma) . En una realización, la inmunoglobulina humanizada aquí descrita puede competir con Act-1 murina o LDP-02 (véase, por ejemplo, el Ejemplo 4) por la unión a la integrina α4β7. En una realización preferida, la región de unión al antígeno de la inmunoglobulina humanizada deriva de anticuerpo monoclonal Act-1 (por ejemplo, LDP-02, una inmunoglobulina que comprende las regiones variables de las cadenas ligeras y pesadas mostradas en la Figura 11 (SEC ID No: 19) y en la Figura 12 (SEC ID No: 21) , respectivamente) .

Por ejemplo, la inmunoglobulina humanizada puede consistir en una región de unión a antígeno que comprende una región determinante de complementariedad (RDC) , de origen no humano, y una región de marco (RM) derivada de una región de marco humana. En un aspecto, la inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por la integrina α4β7 comprende una cadena ligera, que comprende una RDC derivada de un anticuerpo, de origen no humano, que se une a α4β7 y una RM derivada de una cadena ligera de origen humano (por ejemplo, GM607'CL) , y una cadena pesada, que comprende una RDC derivada de un anticuerpo, de origen no humano, que se une a α4β7 y una RM derivada de una cadena pesada de origen humano (por ejemplo, 21/28'CL) . En otro aspecto, la cadena ligera comprende tres RDC derivadas de la cadena ligera del anticuerpo Act-1 y la cadena pesada comprende tres RDC derivadas de la cadena pesada del anticuerpo Act-1.

La presente invención se refiere también a cadenas ligeras de inmunoglobulinas humanizadas (por ejemplo, que comprenden RDC1, RDC2 y RDC3 de la cadena ligera del anticuerpo Act-1 y una RM de cadena ligera humana) y a cadenas pesadas de inmunoglobulinas humanizadas (por ejemplo, que comprenden RDC1, RDC2 y RDC3 de la cadena pesada del anticuerpo Act-1 y una RM de cadena pesada humana) . En una realización preferida, la invención se refiere a cadenas pesadas y ligeras humanizadas aquí descritas (por ejemplo, una cadena ligera humanizada que comprende la región variable de la cadena ligera mostrada en la Figura 7 (SEC ID No: 12) , una cadena pesada humanizada que comprende la región variable de la cadena pesada mostrada en la Figura 9 (SEC ID No: 15) , una cadena ligera humanizada que comprende la región variable de la cadena ligera mostrada en la Figura 12 (SEC ID No: 21) , una cadena pesada humanizada que comprende la región variable de la cadena pesada mostrada en la Figura 11 (SEC ID No: 19) ) . También se incluyen inmunoglobulinas humanizadas que comprenden una o más cadenas ligeras y/o pesadas humanizadas.

La invención se refiere además a ácidos nucleicos aislados que comprenden una secuencia que codifica una inmunoglobulina humanizada de la presente invención (por ejemplo, un anticuerpo de una sola cadena) , así como a ácidos nucleicos aislados que comprenden una secuencia que codifica una cadena ligera (por ejemplo, SEC ID No: 20) a una cadena pesada (por ejemplo, SEC ID No: 18) de una inmunoglobulina humanizada de la presente invención. Por ejemplo, la presente invención proporciona un gen fusionado codificante de una cadena ligera o pesada de una inmunoglobulina humanizada, que comprende una primera secuencia de ácido nucleico, codificante de una región de unión a antígeno derivada del anticuerpo monoclonal murino Act-1; y una segunda secuencia de ácido nucleico, codificante de al menos una porción de una región constante de una inmunoglobulina de origen humano.

La presente invención se refiere también a un constructo, que comprende un ácido nucleico que codifica una inmunoglobulina humanizada que tiene especificidad de unión por la integrina α4β7 o por una cadena de dicha inmunoglobulina. Por ejemplo, se proporciona un vector de expresión que comprende un gen fusionado codificante de una cadena ligera de una inmunoglobulina humanizada, que comprende una secuencia nucleotídica codificante de una RDC derivada de una cadena ligera de un anticuerpo no humano, que tiene especificidad de unión por la integrina α4β7, y una región de marco derivada de una cadena ligera de origen humano. Un vector de expresión que comprende un gen fusionado codificante de una cadena pesada de una inmunoglobulina humanizada, que comprende una secuencia nucleotídica codificante de una RDC derivada de una cadena pesada de un anticuerpo no humano, que tiene especificidad de unión por la integrina α4β7, y una región de marco derivada de una cadena pesada de origen humano, es otro ejemplo de dicho constructo.

La presente invención se refiere también a una célula hospedante que comprende un ácido nucleico de la presente invención, que incluye uno, o más constructos que comprenden un ácido nucleico de la presente invención. En una realización, la invención se refiere a una célula hospedante que tiene un primer ácido nucleico, recombinante, codificante de una cadena ligera de una inmunoglobulina humanizada, y un segundo ácido nucleico, recombinante, codificante de una cadena pesada de una... [Seguir leyendo]

1. Una inmunoglobulina humanizada o fragmento de la misma de unión a antígeno, que se une selectivamente a integrina α4β7, comprendiendo dicha inmunoglobulina o fragmento una región de unión a antígeno de origen no humano y al menos una porción de una inmunoglobulina de origen humano.

2. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la reivindicación 1, donde la porción de una inmunoglobulina de origen humano se deriva de una región constante humana.

3. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la reivindicación 2, donde la región constante humana es de tipo gamma.

4. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la región de unión a antígeno es de origen de roedor.

5. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la reivindicación 4, donde la región de unión a antígeno se deriva de anticuerpo monoclonal Act-1 murino.

6. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la reivindicación 1, donde la región de unión a antígeno comprende una región determinante de complementariedad de origen de roedor, y la porción de una inmunoglobulina de origen humano se deriva de una región de marco humana.

7. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la reivindicación 6, donde la región determinante de complementariedad se deriva de anticuerpo monoclonal Act-1 murino.

8. La inmunoglobulina humanizada o fragmento de unión a antígeno de la reivindicación 1, donde dicha región de unión a antígeno de origen no humano comprende al menos una de tres regiones determinantes de complementariedad (RDC1, RDC2 y RDC3) de una región variable de la cadena ligera y al menos una de tres regiones determinantes de complementariedad (RDC1, RDC2 y RDC3) de una región variable de la cadena pesada, donde dichas regiones determinantes de complementariedad tienen las secuencias de aminoácidos que se expresan a conti- nuación:

cadena ligera: