Formulaciones de factor VIII libres de albúmina.

Un procedimiento de liofilización de una formulación farmacéutica acuosa que contiene un agente espesante cristalizable y NaCl,

en el que dicho procedimiento comprende las etapas de:

(a) congelar la formulación farmacéutica acuosa a una temperatura de menos de -30 ºC;

(b) recocer la formulación farmacéutica a entre aproximadamente -30 ºC y -19 ºC;

(c) disminuir la temperatura de la formulación farmacéutica a menos de aproximadamente -50 ºC;

(d) recocer la formulación farmacéutica a entre aproximadamente -30 ºC y -39 ºC; y después

(e) liofilizar la formulación farmacéutica.

Formulaciones de factor VIII libres de albúmina Antecedentes de la invención El factor VIII es una proteína que se encuentra en el plasma sanguíneo y que actúa como cofactor en la cascada de reacciones que conduce a la coagulación de la sangre. Una deficiente cantidad de actividad de factor VIII en la sangre da como resultado el trastorno de coagulación conocido como hemofilia A, una afección heredada que afecta esencialmente a los varones. Actualmente, la hemofilia A se trata con preparaciones terapéuticas de factor VIII procedentes de plasma humano o fabricadas por medio de la tecnología de ADN recombinante. Estas preparaciones se administran como respuesta a un episodio de hemorragia (terapia a demanda) o a intervalos frecuentes y regulares para impedir hemorragias incontroladas (profilaxis) .

Se sabe que el factor VIII es relativamente inestable en las preparaciones terapéuticas. En el plasma humano, el factor VIII forma normalmente un complejo con otra proteína plasmática, el factor von Willebrand (vWF) , que está presente en el plasma en un exceso molar importante con respecto al factor VIII y que se piensa protege a éste de una degradación prematura. Otra proteína plasmática circulante, la albúmina, también puede desempeñar un papel en la estabilización del factor VIII in vivo. Por tanto, las preparaciones de factor VIII que se comercializan actualmente implican primero la utilización de albúmina y/o de vWF para estabilizar el factor VIII durante el procedimiento de fabricación y el almacenamiento.

Sin embargo, la albúmina y el vWF utilizados en las preparaciones de factor VIII actualmente comercializadas proceden de plasma sanguíneo humano y la utilización de este material tiene algunos inconvenientes. Debido a que generalmente se añade un gran exceso molar de albúmina en comparación con el factor VIII para aumentar la estabilidad del factor VIII en estas preparaciones, es difícil caracterizar la proteína factor VIII en si misma en estas preparaciones. La adición de albúmina procedente de seres humanos al factor VIII también parece ser un inconveniente en relación con las preparaciones de factor VIII obtenidas de forma recombinante. Esto se debe a que las preparaciones de factor VIII derivadas de forma recombinante, en ausencia de esta albúmina añadida, no contendrían de otro modo proteínas derivadas del ser humano y se reduciría el riesgo teórico de transmisión viral.

Se han descrito varios intentos para formular el factor VIII sin albúmina o vWF (o con niveles relativamente bajos de estos excipientes) . Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.565.427 (EP 508 194) , de Freudenberg (cedida a Behringwerke) , describe preparaciones de factor VIII que contienen una combinación particular de tensioactivos y aminoácidos, de forma específica arginina y glicina, junto con excipientes tales como cloruro de sodio y sacarosa. Se describe el agente tensioactivo, polisorbato 20 o polisorbato 80, como estando presente en cantidades de entre el 0, 001 y el 0, 5 % (volumen/volumen) , mientras que la arginina y la glicina están presentes en cantidades de entre 0, 01 y 1 mol/l. La sacarosa está presente en cantidades de entre el 0, 1 y el 10 %. El Ejemplo 2 de esta patente afirma que soluciones de (1) un 0, 75 % de sacarosa, glicina 0, 4 M y NaCl 0, 15 M y (2) citrato de sodio 0, 01 M, glicina 0, 08 M, lisina 0, 016 M, cloruro cálcico 0, 0025 M y cloruro sódico 0, 4 M no eran estables en solución por encima de 16 horas, mientras que soluciones de (3) un 1 % de sacarosa, arginina 0, 14 M, cloruro sódico 0, 1 M y (4) un 1 % de sacarosa, glicina 0, 4 M, arginina 0, 14 M, cloruro sódico 0, 1 M y un 0, 05 % de Tween 80 mostraban estabilidad.

La patente de Estados Unidos Nº 5.763.401 (EP 818 204) , de Nayer (cedida a Bayer) , también describe una formulación terapéutica de factor VIII sin albúmina que comprende sacarosa 15-60 mM, NaCl hasta 50 mM, cloruro de calcio hasta 5 mM, glicina 65-400 mM e histidina hasta 50 mM. Las siguientes formulaciones específicas se identificaron como estables: (1) NaCl 150 mM, cloruro de calcio 2, 5 mM y manitol 165 mM; y (2) 1 % de sacarosa, cloruro de sodio 30 mM, cloruro de calcio 2, 5 mM, histidina 20 mM y glicina 290 mM. Se descubrió que una formulación que contenía cantidades más elevadas de azúcares (10 % de maltosa, NaCl 50 mM, cloruro de calcio 2, 5 mM e histidina 5 mM) presentaba poca estabilidad en estado liofilizado en comparación con la formulación (2) .

La patente de Estados Unidos Nº 5.733.873 (EP 627 924) , de Osterberg (cedida a Pharmacia & Upjohn) , describe formulaciones que incluyen entre 0, 01 y 1 mg/ml de un agente tensioactivo. Esta patente describe formulaciones que contienen los siguientes intervalos de excipientes: polisorbato 20 u 80 en una cantidad de al menos 0, 01 mg/ml, preferentemente de 0, 02 a 1, 0 mg/ml; al menos NaCl 0, 1 M, al menos una sal de calcio 0, 5 mM y al menos histidina 1 mM. Más en particular, se describen las siguientes formulaciones específicas: (1) histidina 14, 7 -50 -65 mM, NaCl 0, 31 -0, 6 M, cloruro de calcio 4 mM, un 0, 001 -0, 02 -0, 025 % de polisorbato 80, con o sin un 0, 1 % de PEG 4000 o sacarosa 19, 9 mM; y (2) 20 mg/ml de manitol, 2, 67 mg/ml de histidina, 18 mg/ml de NaCl, cloruro de calcio 3, 7 mM y 0, 23 mg/ml de polisorbato 80.

También se han realizado otros intentos para utilizar concentraciones mayores o menores de cloruro de sodio. La Patente de Estados Unidos Nº 4.877.608 (EP 315 968) , de Lee (cedida a Rhone-Poulenc Rorer) , muestra formulaciones con concentraciones relativamente bajas de cloruro de sodio, a saber: formulaciones que comprenden NaCl 0, 5 mM -15 mM, cloruro de calcio 5 mM, histidina 0, 2 mM -5 mM, clorhidrato de lisina 0, 01 -10 mM y hasta un 10 % de azúcares. Los "azúcares" pueden consistir en hasta un 10 % de maltosa, un 10 % de sacarosa o un 5 % de manitol.

El documento US 5.605.884 (EP 0 314 095) , de Lee (cedida a Rhone-Poulenc Rorer) , muestra la utilización de formulaciones con concentraciones relativamente altas de cloruro de sodio. Estas formulaciones incluyen NaCl 0, 35 M -1, 2 M, cloruro de calcio 1, 5 -40 mM, histidina 1 mM -50 mM y hasta un 10 % de un "azúcar" tal como manitol, sacarosa o maltosa. Se ilustra una formulación que comprende NaCl 0, 45 M, cloruro de calcio 2, 3 mM e histidina 1, 4 mM.

La solicitud de patente internacional WO 96/22107, de Roser (cedida a Quadrant Holdings Cambridge Limited) , describe formulaciones que incluyen el azúcar trehalosa. Estas formulaciones comprenden: (1) NaCl 0, 1 M, cloruro de calcio 15 mM, histidina 15 mM y trehalosa 1, 27 M (48 %) ; o (2) un 0, 011 % de cloruro de calcio, un 0, 12 % de histidina, un 0, 002 % de Tris, un 0, 002 % de Tween 80, un 0, 004 % de PEG 3350, un 7, 5 % de trehalosa y un 0, 13 % o un 1, 03 % de NaCl.

Otras formulaciones terapéuticas de factor VIII de la técnica anterior suelen incluir albúmina y/o vWF con el propósito de estabilizar el factor VIII y, por tanto, no son relevantes para la presente invención. Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.328.694 (EP 511 234) , de Schwinn (cedida a Octapharma AG) , describe una formulación que incluye un disacárido 100 - 650 mM y un aminoácido 100 mM -1, 0 M. De forma específica, se describen las siguientes formulaciones: (1) sacarosa 0, 9 M, glicina 0, 25 M, lisina 0, 25 M y cloruro de calcio 3 mM; y (2) sacarosa 0, 7 M, glicina 0, 5 M y cloruro de calcio 5 mM.

Aunque se hayan realizado varios intentos para formular el factor VIII sin albúmina o vWF, sigue existiendo una necesidad en formulaciones terapéuticas de factor VIII que sean estables en ausencia de albúmina o de otras proteínas.

Sumario de la Invención La invención proporciona un procedimiento de liofilización de una formulación farmacéutica acuosa que contiene un agente espesante cristalizable y NaCl, en el que dicho procedimiento comprende las etapas de:

(a) congelar la formulación farmacéutica acuosa a una temperatura de menos de -30 ºC;

(b) recocer la formulación farmacéutica a entre aproximadamente -30 ºC y -19 ºC;

(c) disminuir la temperatura de la formulación farmacéutica a menos de aproximadamente -50 ºC;

(d) recocer la formulación farmacéutica a entre aproximadamente -30 ºC y -39 ºC; y después

(e) liofilizar la formulación farmacéutica.

También se divulgan composiciones terapéuticas de factor VIII que son estables en ausencia de albúmina. En particular, en el presente documento se divulga una composición de Factor VIII que comprende, además de Factor VIII: 4 % a 10 % de un agente espesante seleccionado del grupo que consiste en manitol, glicina y alanina; de 1 % a 4 % de un agente estabilizante seleccionado del grupo que consiste en sacarosa, trehalosa, rafinosa, arginina;... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de liofilización de una formulación farmacéutica acuosa que contiene un agente espesante cristalizable y NaCl, en el que dicho procedimiento comprende las etapas de:

(a) congelar la formulación farmacéutica acuosa a una temperatura de menos de -30 ºC; 5 (b) recocer la formulación farmacéutica a entre aproximadamente -30 ºC y -19 ºC;

(c) disminuir la temperatura de la formulación farmacéutica a menos de aproximadamente -50 ºC;

(d) recocer la formulación farmacéutica a entre aproximadamente -30 ºC y -39 ºC; y después

(e) liofilizar la formulación farmacéutica.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa (a) se realiza a una temperatura de menos de -35 ºC, 10 preferentemente menos de o aproximadamente -40 ºC.

3. El procedimiento de la reivindicación 1 o 2, en el que la etapa (b) se realiza durante aproximadamente 3 horas.

4. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente en el que la etapa (c) se realiza a una temperatura de menos de -55 ºC.

5. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la etapa (c) se realiza durante 15 aproximadamente 1 hora.

6. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la etapa (d) se realiza durante aproximadamente 4 horas.

7. El procedimiento cualquier reivindicación precedente en el que el agente espesante cristalizable es manitol.

8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que la etapa (b) se realiza a una temperatura de entre -21 ºC y 20 24 ºC.

9. El procedimiento de la reivindicación 7 u 8, en el que la etapa (d) se realiza a una temperatura de aproximadamente -33 ºC.

10. El procedimiento cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el agente espesante cristalizable es glicina.

11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que la etapa (b) se realiza a una temperatura de entre -25 ºC y 25 28 ºC.

12. El procedimiento de la reivindicación 10 u 11, en el que la etapa (d) se realiza a una temperatura de aproximadamente -36 ºC.

13. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que después de la etapa (d) y antes de la etapa

(e) , la temperatura de la formulación farmacéutica se disminuye a aproximadamente -50 ºC, opcionalmente durante 30 aproximadamente 1 hora.

14. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la etapa (e) comprende:

(i) reducir la presión a aproximadamente 8, 6 kPa;

(ii) elevar la temperatura a entre aproximadamente -32 ºC y -35 ºC durante hasta 100 horas;

(iii) elevar la temperatura a +40 ºC durante aproximadamente 3 horas; 35 (iv) elevar la temperatura a aproximadamente +45 ºC durante aproximadamente 3 horas; y (v) elevar la temperatura a aproximadamente +50 ºC durante aproximadamente 3 horas.

15. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la formulación farmacéutica comprende Factor VIII.

16. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la formulación farmacéutica comprende trehalosa como un

agente estabilizante, preferentemente a una concentración de 1 a 4 % en peso/volumen de la formulación farmacéutica acuosa.