Nuevas formulaciones de factor VIII libres de albúmina.

Composición de factor VIII formulada sin añadir albúmina a dicha composición,

que comprende los siguientes excipientes de formulación además del factor VIII:

del 2% al 6% en peso por volumen de hidroxietilalmidón como agente de carga;

del 1% al 4% en peso por volumen de sacarosa como agente estabilizante;

1 mM a 5 mM de sal de calcio;

150 mM a 300 mM de cloruro de sodio (NaCl); y

un agente tampón para mantener un pH de entre aproximadamente 6 y 8.

Nuevas formulaciones de factor VIII libres de albúmina.

El factor VIII es una proteína que se encuentra en el plasma sanguíneo y que actúa como cofactor en la cascada de reacciones que conduce a la coagulación de la sangre. Una deficiente cantidad de actividad de factor VIII en la sangre da como resultado el trastorno de coagulación conocido como hemofilia A, una condición heredada que afecta esencialmente a los varones. Actualmente la hemofilia A se trata con preparaciones terapéuticas de factor VIII procedentes de plasma humano o fabricadas por medio de la tecnología de ADN recombinante. Estas preparaciones se administran como respuesta a un episodio de hemorragia (terapia a demanda) o a intervalos frecuentes y regulares para impedir hemorragias incontroladas (profilaxis) .

El factor VIII es conocido por ser relativamente inestable en las preparaciones terapéuticas. En el plasma humano, el factor VIII forma normalmente un complejo con otra proteína plasmática, el factor von Willebrand (vWF) , que está presente en el plasma en un exceso molar importante con respecto al factor VIII y que se piensa protege a éste de una degradación prematura. Otra proteína plasmática circulante, la albúmina, también puede desempeñar un papel en la estabilización del factor VIII in vivo. Por tanto, las preparaciones de factor VIII que se comercializan actualmente implican primero la utilización de albúmina y/o de vWF para estabilizar el factor VIII durante el proceso de fabricación y el almacenamiento.

Sin embargo, la albúmina y el vWF utilizados en las preparaciones de factor VIII actualmente comercializadas proceden de plasma sanguíneo humano y la utilización de este material tiene algunos inconvenientes. Debido a que generalmente se añade un gran exceso molar de albúmina en comparación con el factor VIII para aumentar la estabilidad del factor VIII en estas preparaciones, es difícil caracterizar la proteína factor VIII en si misma en estas preparaciones. La adición de albúmina procedente de seres humanos al factor VIII también parece ser un inconveniente en relación con las preparaciones de factor VIII obtenidas de forma recombinante. Esto se debe a que las preparaciones de factor VIII derivadas de forma recombinante, en ausencia de esta albúmina añadida, no contendrían de otro modo proteínas derivadas del ser humano y se reduciría el riesgo teórico de transmisión viral.

Se han descrito varios intentos para formular el factor VIII sin albúmina o vWF (o con niveles relativamente bajos de estos excipientes) . Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.565.427 (EP 508 194) , de Freudenberg (cedida a Behringwerke) , describe preparaciones de factor VIII que contienen una combinación particular de tensioactivos y aminoácidos, de forma específica arginina y glicina, junto con excipientes tales como cloruro de sodio y sacarosa. Se describe el agente tensioactivo, polisorbato 20 o polisorbato 80, como estando presente en cantidades de entre el 0, 001 y el 0, 5% (volumen/volumen) , mientras que la arginina y la glicina están presentes en cantidades de entre 0, 01 y 1 mol/l. La sacarosa está presente en cantidades de entre el 0, 1 y el 10%. El Ejemplo 2 de esta patente afirma que soluciones de (1) un 0, 75% de sacarosa, glicina 0, 4M y NaCl 0, 15M y (2) citrato de sodio 0, 01M, glicina 0, 08M, lisina 0, 016M, cloruro cálcico 0, 0025M y cloruro sódico 0, 4M no eran estables en solución por encima de 16 horas, mientras que soluciones de (3) un 1% de sacarosa, arginina 0, 14M, cloruro sódico 0, 1M y (4) un 1% de sacarosa, glicina 0, 4M, arginina 0, 14M, cloruro sódico 0, 1M y un 0, 05% de Tween 80 mostraban estabilidad.

La Patente de Estados Unidos Nº 5.763.401 (EP 818 204) , de Nayer (cedida a Bayer) , también describe una formulación terapéutica de factor VIII sin albúmina que comprende sacarosa 15-60mM, NaCl hasta 50mM, cluro de calcio hasta 5mM, glicina 65-400mM e histidina hasta 50mM. Las siguientes formulaciones específicas se identificaron como estables: (1) NaCl 150mM, cloruro de calcio 2, 5mM y manitol 165mM; y (2) 1% de sacarosa, cloruro de sodio 30mM, cloruro de calcio 2, 5mM, histidina 20mM y glicina 290mM. Se descubrió que una formulación que contenía cantidades más elevadas de azúcares (10% de maltosa, NaCl 50mM, cloruro de calcio 2, 5mM e histidina 5mM) presentaba poca estabilidad en estado liofilizado en comparación con la formulación (2) .

La Patente de Estados Unidos Nº 5.733.873 (EP 627 924) , de Osterberg (cedida a Pharmacia & Upjohn) , describe formulaciones que incluyen entre 0, 01 y 1 mg/ml de un agente tensioactivo. Esta patente describe formulaciones que contienen los siguientes intervalos de excipientes: polisorbato 20 u 80 en una cantidad de al menos 0, 01 mg/ml, preferentemente de 0, 02 a 1, 0 mg/ml; al menos NaCl 0, 1M, al menos una sal de calcio 0, 5mM y al menos histidina 1mM. Más en particular, se describen las siguientes formulaciones específicas: (1) histidina 14, 7 - 50 - 65mM, NaCl 0, 31

- 0, 6M, cloruro de calcio 4mM, un 0, 001 - 0, 02 - 0, 025% de polisorbato 80, con o sin un 0, 1% de PEG 4000 o sacarosa 19, 9mM; y (2) 20 mg/ml de manitol, 2, 67 mg/ml de histidina, 18 mg/ml de NaCl, cloruro de calcio 3, 7mM y 0, 23 mg/ml de polisorbato 80.

También se han realizado otros intentos para utilizar concentraciones mayores o menores de cloruro de sodio. La Patente de Estados Unidos Nº 4.877.608 (EP 315 968) , de Lee (cedida a Rhone-Poulenc Rorer) , muestra formulaciones con concentraciones relativamente bajas de cloruro de sodio, a saber: formulaciones que comprenden NaCl 0, 5mM -15mM, cloruro de calcio 5mM, histidina 0, 2mM - 5mM, clorhidrato de lisina 0, 01 - 10mM y hasta un 10% de azúcares. Los "azúcares" pueden consistir en hasta un 10% de maltosa, un 10% de sacarosa o un 5% de manitol.

La US 5.605.884 (EP 0 314 095) , de Lee (cedida a Rhone-Poulenc Rorer) , muestra la utilización de formulaciones con concentraciones relativamente altas de cloruro de sodio. Estas formulaciones incluyen NaCl 0, 35M - 1, 2M, cloruro de calcio 1, 5 - 40mM, histidina 1mM - 50mM y hasta un 10% de un "azúcar" tal como manitol, sacarosa o maltosa. Se ilustra una formulación que comprende NaCl 0, 45M, cloruro de calcio 2, 3mM e histidina 1, 4mM.

La Solicitud de Patente Internacional WO 96/22107, de Roser (cedida a Quadrant Holdings Cambridge Limited) , describe formulaciones que incluyen el azúcar trehalosa. Estas formulaciones comprenden: (1) NaCl 0, 1M, cloruro de calcio 15mM, histidina 15mM y trehalosa 1, 27M (48%) ; o (2) un 0, 011% de cloruro de calcio, un 0, 12% de histidina, un 0, 002% de Tris, un 0, 002% de Tween 80, un 0, 004% de PEG 3350, un 7, 5% de trehalosa y un 0, 13% o un 1, 03% de NaCl.

Otras formulaciones terapéuticas de factor VIII de la técnica anterior suelen incluir albúmina y/o vWF con el propósito de estabilizar el factor VIII y, por tanto, no son relevantes para la presente invención. Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 5.328.694 (EP 511 234) , de Schwinn (cedida a Octapharma AG) , describe una formulación que incluye un disacárido 100 - 650mM y un aminoácido 100mM -1, 0M. De forma específica, se describen las siguientes formulaciones: (1) sacarosa 0, 9M, glicina 0, 25M, lisina 0, 25M y cloruro de calcio 3mM; y (2) sacarosa 0, 7M, glicina 0, 5M y cloruro de calcio 5mM.

Aunque se hayan realizado varios intentos para formular el factor VIII sin albúmina o vWF, sigue existiendo una necesidad en formulaciones terapéuticas de factor VIII que sean estables en ausencia de albúmina o de otras proteínas.

Sumario de la Invención La presente invención se refiere a composiciones terapéuticas de factor VIII que son estables en ausencia de albúmina.

En un primer aspecto de la invención, se proporciona una composición de factor VIII formulada sin la adición de albúmina a dicha composición, que comprende los siguientes excipientes de formulación además de factor VIII:

del 2 al 6% en peso por volumen de hidroxietilalmidón como componente de carga;

del 1 al 4% en peso por volumen de sacarosa como agente estabilizante;

sal de calcio de 1mM a 5mM;

cloruro sódico (NaCl) de 150mM a 300mM; y

un agente tampón para mantener un pH aproximadamente entre 6 y 8.

En un segundo aspecto de la invención, se proporciona una composición de factor VIII liofilizada que se obtiene mediante liofilización de la composición de factor VIII según el primer aspecto de la invención.

En un tercer aspecto de la invención, se proporciona una composición de factor VIII de acuerdo con el primer y el segundo aspecto de la invención para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de la hemofilia.

En un cuarto aspecto de la invención,... [Seguir leyendo]

1. Composición de factor VIII formulada sin añadir albúmina a dicha composición, que comprende los siguientes 5 excipientes de formulación además del factor VIII: del 2% al 6% en peso por volumen de hidroxietilalmidón como agente de carga; del 1% al 4% en peso por volumen de sacarosa como agente estabilizante; 1 mM a 5 mM de sal de calcio;

150 mM a 300 mM de cloruro de sodio (NaCl) ; y 10 un agente tampón para mantener un pH de entre aproximadamente 6 y 8.

2. Composición de factor VIII según la reivindicación 1, que comprende aproximadamente un 4% en peso por volumen de hidroxietilalmidón.

3. Composición de factor VIII según la reivindicación 1 o 2, que comprende aproximadamente 200mM de ClNa.

4. Composición de factor VIII según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizada porque dicho agente 15 estabilizante está presente en una cantidad de aproximadamente un 2% en peso por volumen.

5. Composición de factor VIII según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde la composición de factor VIII es adecuada para su liofilización.

6. Composición de factor VIII liofilizada que se obtiene mediante liofilización de la composición de factor VIII según la reivindicación 5.

7. Utilización de una composición de factor VIII según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la preparación de un medicamento para el tratamiento de la hemofilia.

8. Composición de factor VIII según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para su uso en el tratamiento de la hemofilia.