Estrategia de inmunización para prevenir una infección por H1N1.

Vector de expresión adenoviral quimérico para la protección contra el virus de la gripe H1N1 pandémico,

donde dicho vector comprende un casete de expresión que comprende:

(a) un primer promotor enlazado funcionalmente a un ácido nucleico que codifica un agonista del receptor de tipo toll 3 (TLR-3), en donde el agonista del TLR-3 es un ARN de doble cadena (dsRNA); y

(b) un segundo promotor enlazado funcionalmente a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de hemaglutinina a partir del virus A/CA/04/2009 H1N1 de la gripe.

Estrategia de inmunización para prevenir una infección por H1N1 Antecedentes de la invención

Diversos métodos diferentes han sido propuestos para prevenir una infección por el virus de la gripe, pero la mayoría de estos métodos utilizan tecnologías antiguas administradas mediante inyección. Este método puede ser difícil de realizar durante una pandemia en la que se ha interrumpido la atención sanitaria habitual. Una vacuna de administración oral que pueda ser distribuida sin personal médico cualificado supondría una ventaja significativa.

Los virus H1N1 pandémicos de 29 fijan como diana poblaciones celulares diferentes a las de la gripe normal. Estos virus infectan las células epiteliales intestinales, además de las células epiteliales del pulmón. Los pacientes infectados con H1N1 presentaron diarrea y enfermedad estomacal junto con los síntomas usuales de la gripe.

La presente invención proporciona una inmunización oral con beneficios sustanciales en la protección contra la infección por H1N1. Se genera una fuerte respuesta inmune de la mucosa, incluyendo en el intestino, según se demuestra por las fuertes respuestas de anticuerpos IgA contra HA en pellets o gránulos fecales. También se muestra que la vacuna oral contra H1N1 protege contra el H1N1 en una prueba de provocación directa in vivo.

El arte previo incluye la patente W27198. El Ejemplo 4 de la misma revela la administración de un vector adenovlral que codifica una proteína A/PR/8/34 HA de la gripe en combinación con un antagonista de poli(l:C) TLR- 3. El Ejemplo 11 de la misma revela un vector adenoviral con un promotor que controla la expresión de HA de la cepa del virus de la gripe A/lndo/5/25 con una secuencia aguas abajo ("downstream") que codifica un agonista del TLR-3 de ARN de doble cadena. Este ejemplo también recela un vector adenovlral con un primer promotor que controla la expresión de un agonista del TLR-3 de ARN de doble cadena, y un segundo promotor que controla la expresión de HA de la cepa A/lndo/5/25 del virus de la gripe.

Breve resumen de la invención

La invención proporciona composiciones de respuesta rápida y fácilmente escalables para la vacuna contra cepas pandémicas de la gripe H1N1. Tras el aislamiento de la cepa, puede prepararse una vacuna viral basada en genes de acuerdo a la invención y someterla a ensayo por seguridad y eficacia en cuestión de semanas.

La invención proporciona vectores de expresión adenovirales quiméricos para la protección contra el virus H1N1 de la gripe, donde dicho vector comprende un casete de expresión que comprende (a) un primer promotor enlazado de forma funcional a un ácido nucleico que codifica un agonista del receptor de tipo toll 3 (TLR-3, por sus siglas en inglés), en donde el agonista de TLR-3 es un ARN de doble cadena (dsRNA); y (b) un segundo promotor enlazado de forma funcional a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de hemaglutinina a partir del virus de la gripe A/CA/4/29 H1N1. En algunos modos de realización, el dsRNA se selecciona de ARN de horquilla corto (ARNhc), dsRNA viral, y ARNip. En algunos modos de realización, la secuencia que codifica el dsRNA comprende una secuencia que tiene una identidad sustancial con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, y SEQ ID NO:6 (SEQ ID NOs:1-6). En algunas realizaciones, la secuencia que codifica el dsRNA comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs:1-6.

En algunos aspectos de la revelación descrita en la presente patente, el polipéptido de H1N1 es un antígeno de superficie del H1N1 o un fragmento antigénico del mismo. En algunos aspectos de la revelación descritos en la presente patente, el polipéptido se selecciona del grupo que consiste en HA, NA, MP, y NP, y fragmentos antigénicos del mismo. El virus de la gripe H1N1 es de la cepa A/CA/4/29.

En algunos modos de realización, el primer promotor y el segundo promotores el mismo. En algunas realizaciones, el primer promotor y el segundo promotor son diferentes. El promotor puede ser constitutivo o inducible, y puede ser un promotor génico mamífero o viral, por ejemplo, CMV o SV4.

En algunos modos de realización descritos en la presente patente, el vector de expresión viral es sustancialmente idéntico a la SEQ ID NO:7, por ejemplo, con al menos un 9,92, 95, 96, 98, o 99% de identidad con la SEQ ID NO:7, o con el casete de expresión de la SEQ ID NO:7 (posiciones de nucleótidos 63 a 4194). En algunos modos de realización descritos en la presente patente, el vector de expresión viral comprende la SEQ ID NO:7 o el casete de expresión de la SEQ ID NO:7. En algunos aspectos de la revelación descrita en la presente patente, el vector de expresión viral es sustancialmente idéntico a la SEQ ID NO:7, pero codifica un polipéptido antigénico del H1N1 diferente.

En algunas realizaciones, la invención proporciona composiciones farmacéuticas para la protección contra el virus de la gripe H1N1, donde dichas composiciones comprenden el vector viral quimérico de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. En algunas realizaciones, la composición farmacéutica se formula para una entrega no parenteral (administración), por ejemplo, administración por vía oral, mucosa, o intranasal. En algunas 5 realizaciones, la composición farmacéutica se formula para la administración por vía oral.

En algunos modos de realización, la invención proporciona una composición farmacéutica para su administración por vía oral que comprende el vector viral quimérico de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La invención además proporciona una cantidad ¡nmunológicamente efectiva de un vector de expresión adenoviral de la invención, o una composición de la Invención, para su uso en un método para provocar una respuesta inmune 1 ante el virus pandémico de la gripe H1N1 en un mamífero, en donde la respuesta inmune se dirige contra el polipéptido de hemaglutinina, y en donde la vía de administración se selecciona del grupo que consiste en: oral, Intranasal y mucosa. En algunas realizaciones, la administración es oral. En algunas realizaciones, el mamífero es un humano. En algunas realizaciones, la respuesta Inmune se selecciona del grupo que consiste en una respuesta Inmune de la mucosa, una respuesta Inmune slstémlca, una respuesta inmune humoral, y una respuesta inmune 15 celular. En algunas realizaciones la respuesta Inmune es una respuesta inmune de la mucosa. En algunas realizaciones, la respuesta inmune puede detectarse en la mucosa intestinal.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1A. Los títulos de anticuerpos slstémlcos para anticuerpos HA anti-gripe se pueden comparar a las 8 semanas para vacunación oral (p.o.) y vacunación Intramuscular (i.m.) de DX1. Se administró Ad-CA/4/9-Adj por 2 vía oral en dos dosis diferentes (17 IU o 18 IU) o i.m. en 18 IU. Se muestran también los resultados de un vector de expresión adenoviral similar que codifica HA a partir de un H1N1 no similar (Ad-PR8-Adj).

Figura 1B. Los resultados de la inhibición de la Hemaglutlnación (HAI) a las 3, 5 y 8 semanas después de la vacunación confirman una respuesta slstémlca similar del anticuerpo a A/CA/4/29 de la administración por vía oral e i.m.

Figura 1C, 1D, y 1F. La administración oral de la vacuna vectorial DX1 proporciona una respuesta del anticuerpo superior de las mucosas en comparación con la inyección i.m. Se midieron títulos de anticuerpos específicos a HA en tejidos de la mucosa Intestinal (fecal), vaginal, y del pulmón, a las 8, 1, y 12 semanas después de la administración, respectivamente. Los resultados se muestran en los paneles C, D, y E de la Figura 1. Hay que señalar que la administración oral del vector DX1 proporciona títulos de IgA específicos más elevados que una dosis 3 alta de una inyección I.m. La dosis oral 1 veces más baja también Induce una respuesta igual o mayor. Un * indica P<,5 calculado utilizando una prueba T de Student basada en lecturas OD45.

Figura 2A y 2B. La administración oral en dosis bajas del vector DX1 proporciona datos de mantenimiento de peso y de supervivencia comparables con las dosis altas con administración oral e i.m. La Figura 2A muestra que el 1% de los ratones vacunados con DX1 que reciben una prueba de provocación de H1N1 letal sobrevivieron. De forma 35 similar, la Figura 2B muestra una pérdida de peso mínima en todos los tres grupos. Los ratones no tratados, o los vacunados sólo con adyuvante sucumbieron al virus poco después de la prueba de provocación. "Oral" indica 18 IU DX1, "IM" indica 18 IU DX1, dosis oral lo indica 17 IU DX1, control Ady indica un vector que expresa únicamente... [Seguir leyendo]

1. Vector de expresión adenoviral quimérico para la protección contra el virus de la gripe H1N1 pandémico, donde dicho vector comprende un casete de expresión que comprende:

(a) un primer promotor enlazado funcionalmente a un ácido nucleico que codifica un agonista del receptor de tipo toll 3 (TLR-3), en donde el agonista del TLR-3 es un ARN de doble cadena (dsRNA); y

(b) un segundo promotor enlazado funcionalmente a un ácido nucleico que codifica un polipéptido de hemaglutinina a partir del virus A/CA/4/29 H1N1 de la gripe.

2. Vector de expresión adenoviral quimérico según la reivindicación 1, en donde el ácido nucleico que codifica el agonista del TLR-3 comprende un ARN de horquilla corto.

3. Vector de expresión adenoviral quimérico según la reivindicación 1, en donde el ácido nucleico que codifica el agonista del TLR-3 comprende una secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs: 1-6.

4. Vector de expresión adenoviral quimérico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el primer promotor y el segundo promotor son iguales.

5. Vector de expresión adenoviral quimérico según la reivindicación 4, en donde el primer promotor y el segundo promotor son cada uno un promotor de CMV.

6. Composición farmacéutica que comprende el vector de expresión adenoviral quimérico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en donde dicha composición farmacéutica se formula para su administración por vía oral, mucosa, o intranasal.

7. Composición farmacéutica de liberación oral que comprende el vector de expresión adenoviral quimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Cantidad inmunogénicamente efectiva de un vector de expresión adenoviral quimérico según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, o una composición según las reivindicaciones 6 o 7, para su uso en un método para provocar una respuesta inmune ante un virus pandémico de la gripe H1N1 en un mamífero,

en donde la respuesta inmune está dirigida contra el polipéptido de hemaglutinina, y en donde la vía de administración se selecciona del grupo que consiste en: oral, intranasal, y mucosa.

9. Vector de expresión o composición para su uso en el método de la reivindicación 8, en donde la vía de administración es oral.

1. Vector de expresión o composición para su uso en el método de la reivindicación 8 o 9, en donde la respuesta inmune es una respuesta inmune de la mucosa.

11. Vector de expresión o composición para su uso en el método de cualquiera de las reivindicaciones 8-1, en donde dicho mamífero es un humano.