Anticuerpos frente al receptor del factor de crecimiento similar a la insulina I y la utilización de los mismos.

Un anticuerpo que se une a IGF-IR humano que se caracteriza porque comprende

a) una región variable de la cadena pesada del anticuerpo de Id.

de Sec. Nº:1 y una región variable de la cadena ligera del anticuerpo de Id. de Sec. Nº:2; o

b) una región variable de la cadena pesada del anticuerpo de Id. de Sec. Nº:3 y una región variable de la cadena ligera del anticuerpo de Id. de Sec. Nº:4.

Anticuerpos frente al receptor del factor de crecimiento similar a la insulina I y la utilización de los mismos

La presente Invención está relacionada con anticuerpos dirigidos frente al receptor del factor de crecimiento sl-mllar a la Insulina I (IGF-IR), métodos para su producción, composiciones farmacéuticas que contienen dichos anticuerpos, y la utilización de los mismos.

El receptor del factor de crecimiento similar a la insulina I (IGF-IR, EC 2.7.112, antígeno CD 221) pertenece a la familia de las proteínas tirosina quinasas transmembra-nales (LeRoith, D., et al., Endocrin. Rev. 16 (1995) 143-163; y Adams, T.E., et al., Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1063). El IGF-IR se une al IGF-I con alta afinidad e inicia la respuesta fisiológica a este ligando in vivo. El IGF-IR también se une al IGF-II, sin embargo con una afini-dad ligeramente Inferior. La sobreexpresión del IGF-IR pro-mueve la transformación neopláslca de las células y existen evidencias de que el IGF-IR está involucrado en la trans-formación maligna de las células y es por lo tanto una diana útil para el desarrollo de agentes terapéuticos para el tratamiento del cáncer (Adams, T.E., et al., Cell. Mol. Li-fe Sci. 57 (2000) 1050-1063).

Los anticuerpos frente a IGF-IR son bien conocidos en el estado de la técnica y son investigados por sus efectos antitumorales in vitro e in vivo (Benini, S., et al., Clin. Cáncer Res. 7 (2001) 1790-1797; Scotlandl, K., et al., Cáncer Gene Ther. 9 (2002) 296-307; Scotlandi, K., et al., Int. J. Cáncer 101 (2002) 11-16; Brunettl, A., et al., Blochem. Biophys. Res. Commun. 165 (1989) 212-218; Prigent, S.A., et al., J. Biol. Chem. 265 (1990) 9970-9977; Li, S.L., et al., Cáncer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252; Pessino, A., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 162

(1989) 1236-1243; Surinya, K.H., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 16718-16725; Soos, M.A., et al., J. Biol. Chem., 267 (1992) 12955-12963; Soos, M.A, et al, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 86 (1989) 5217-5221; OBrlen, R.M, et al, EMBO J. 6 (1987) 4003-4010; Taylor, R, et al, Biochem. J. 242 (1987) 123-129; Soos, M.A, et al, Blochem. J. 235 (1986) 199-208; Li, S.L, et al, Biochem. Biophys. Res. Commun. 196 (1993) 92-98; Delafontaine, P, et al, J. Mol. Cell. Cardiol. 26 (1994) 1659-1673; Kull, F.C. Jr, et al. J. Biol. Chem. 258 (1983) 6561-6566; Morgan, D.O, y Roth, R.A, Biochemistry 25 (1986) 1364-1371; Forsayeth, J.R, et al, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 84 (1987) 3448-3451; Schaefer, E.M, et al, J. Biol. Chem. 265 (1990) 13248-13253; Gustafson, T.A, y Rutter, W.J, J. Biol. Chem. 265

(1990) 18663-18667; Hoyne, P.A, et al, FEBS Lett. 469 (2000) 57-60; Tulloch, P.A, et al, J. Struct. Biol. 125 (1999) 11-18; Rohlik, Q.T, et al, Biochem. Biophys. Res. Comm. 149 (1987) 276-281; y Kalebic, T, et al. Cáncer Res. 54 (1994) 5531-5534; Adams, T. E, et al, Cell. Mol. Life Sci. 57 (2000) 1050-1063; Drlcu, A, et al, Glycoblology 9

(1999) 571-579; Kanter-Lewensohn, L, et al, Melanoma Res. 8 (1998) 389-397; LI, S.L, et al. Cáncer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252). Los anticuerpos frente a IGF-IR también se describen en gran cantidad de publicaciones adicionales, por ejemplo, Arteaga, C.L, et al, Breast Cáncer Res. Treatment 22 (1992) 101-106; y Hailey, J, et al., Mol. Cáncer Ther. 1 (2002) 1349-1353.

En particular, el anticuerpo monoclonal frente a IGF-IR denominado alR3 se utiliza ampliamente en la investigación para el estudio de los procesos mediados por IGF-IR y las enfermedades mediadas por IGF-I como el cáncer. El alfa-IR-3 se describe en Kull, F.C, J. Biol. Chem. 258 (1983) 6561-6566. Mientras tanto, se han publicado alrededor de cien publicaciones relacionadas con la investigación y uso terapéutico de alR3 en relación a su efecto antitumoral, sólo y junto con agentes citostáticos como la doxorubicina y la vincristina. El alR3 es un anticuerpo monoclonal murino que se conoce porque inhibe la unión de IGF-I al receptor de IGF pero no inhibe la unión de IGF- II al IGF-IR. El cxlR3 estimula a altas concentraciones la proliferación de células tumorales y la fosforilación de IGF-IR (Bergmann, U, et al. Cáncer Res. 55 (1995) 2007-2011; Kato, H, et al, J. Biol. Chem. 268 (1993) 2655-2661). Existen otros anticuerpos (por ejemplo, el 1H7, Li, S.L, et al. Cáncer Immunol. Immunother. 49 (2000) 243-252) que inhibe la unión de IGF-II a IGF-IR de forma más potente que la unión al IGF-I. Un resumen del estado de la técnica de los anticuerpos y sus propiedades y características se describe en Adams, T.E, et al, Cell. Mol. Life Sci. 57

(2000) 1050-1063.

La mayoría de los anticuerpos descritos en el estado de la técnica son de origen murino. Tales anticuerpos no son, tal como se conoce en el estado de la técnica, útiles para la terapia de pacientes humanos sin alteraciones adicionales como la quimerización o la humanización. En base a estas desventajas, los anticuerpos humanos son claramente preferibles como agentes terapéuticos en el tratamiento de pacientes humanos. Los anticuerpos humanos son bien conocidos en el estado de la técnica (van Dijk, M.A, y van de Wlnkel, J.G, Curr. Opin. Pharmacol. 5 (2001) 368-374). En base a esta tecnología, pueden producirse anticuerpos humanos frente a una gran variedad de dianas. Ejemplos de anticuerpos humanos frente a IGF-IR se describen en WO 02/053596.

No obstante, existe todavía una necesidad de anticuerpos frente a IGF-IR con beneficios concluyentes para pacientes que necesitan una terapia antitumoral. El beneficio relevante para el paciente es, en términos sencillos, una reducción en el crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo de progresión provocado por el trata-miento con el agente antitumorogénico.

Resumen de la Invención

La invención comprende un anticuerpo como el que se define en las reivindicaciones. Un anticuerpo de acuerdo con la invención es un anticuerpo que se une a IGF-IR e inhibe la unión de IGF-I e IGF-II al IGF-IR, que se caracteriza en que dicho anticuerpo

a) es del isotipo lgG1,

b) muestra una proporción de valores CI50 de inhibición de la unión de IGF-I al IGF-IR respecto a la inhibición de la unión de IGF-II al IGF-IR, de 1:3 a 3:1,

c) inhibe en al menos un 80%, preferiblemente en al menos un 90%, a una concentración de 5 nM, la fosforilación de IGF-IR en un ensayo de fosforilación celular utilizando células HT29 en un medio que contiene suero fetal bovino (FCS) al 0,5% inactivado por calor, cuando se compara con un ensayo sin dicho anticuerpo, y

d) no muestra actividad estimuladora de IGF-IR medida como fosforilación de PKB a una concentración de 10 mM en un ensayo de fosforilación celular utilizando células 3T3 que proporcionan de 400.000 a 600.000 moléculas de IGF-IR por células en un medio que contiene suero fetal bovino (FCS) al 0,5% inactivado por calor, cuando se compara con un ensayo sin dicho anticuerpo.

Los anticuerpos de acuerdo con la Invención muestran beneficios para pacientes que necesitan de una terapia antitumoral y proporcionan una reducción en el crecimiento tumoral y una prolongación significativa del tiempo de progresión. Los anticuerpos de acuerdo con la Invención poseen propiedades nuevas e innovadoras que provocan un beneficio para un paciente que padece una enfermedad asociada con una desregulación de IGF, especialmente una enfermedad tumoral. Los anticuerpos de acuerdo con la invención se caracterizan por las propiedades mencionadas anteriormente. Las propiedades son por lo tanto específicas de la unión a IGF-IR, de la inhibición de la unión de IGF-I e IGF-II a IGF-IR en la proporción anteriormente mencionada, siendo del ¡sotipo lgG1, y que no active la señalización de IGF-IR aún en células que sobreexpresen IGF-IR a una concentración 200 veces superior a la de su valor de CI50. Los anticuerpos que no poseen "actividad mimética de IGF-I " proporcionan una gran ventaja cuando se utilizan como agentes terapéuticos.

Preferiblemente, un anticuerpo de acuerdo con la invención induce de forma adicional la muerte celular del 20% de las células o más, en una preparación de células que expresan IGF-IR tras 24 horas a una concentración de dicho anticuerpo de 100 nM mediante ADCC.

Preferiblemente, y de forma adicional, los anticuerpos de acuerdo con la invención inducen la muerte celular del 20% de las células o más, en una preparación de células que expresan IGF-IR tras 4 h a una concentración de dicho anticuerpo de 100 nM mediante CDC.

Preferiblemente, a una concentración de 5 nM, los anticuerpos de acuerdo con la invención inhiben completamente la transducción de señales del IGF-IR mediadas por IGF-I en las células tumorales.

La invención también comprende ácidos nucleicos tal como se define en las... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une a IGF-IR humano que se caracteriza porque comprende

a) una región variable de la cadena pesada del anticuerpo de Id. de Sec. N°:1 y una región variable de la cadena ligera del anticuerpo de Id. de Sec. N°:2; o

b) una región variable de la cadena pesada del anticuerpo de Id. de Sec. N°:3 y una región variable de la cadena ligera del anticuerpo de Id. de Sec. N°:4.

2. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, que se caracteriza por ser un anticuerpo humano o humanizado.

3. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, que se caracteriza por una afinidad de alrededor de 10'13 * * a 10'19M(Kd).

4. Un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 1, obtenible a partir de una línea celular de hibridoma <IGF-1 R> HUMAB clon 18 con el n° de depósito DSM ACC 2587 o <IGF-1 R> HUMAB clon 22 con el n° de depósito DSM ACC 2594.

5. El uso de un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 para la fabricación de una composición farmacéutica.

6. Una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4.

7. El uso de un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 para la fabricación de una composición farmacéutica.

8. Un ácido nucleico que codifica un polipéptido capaz de ensamblar junto con la otra cadena de anticuerpo correspondiente definida más adelante, mientras que dicho anticuerpo es

a) una región variable de la cadena pesada del anticuerpo de Id. de Sec. N°:1 o 3;

b) una región variable de la cadena ligera del anticuerpo de Id. de Sec. N°:2 o 4.

y cuando los Id. de Sec. N°: 1 y 2 son capaces de ensamblarse juntos y los Id. de Sec. N°: 3 y 4 son capaces de ensamblarse juntos.

9. Un vector de expresión que comprende un ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 8, capaz de expresar dicho ácido nucleico en una célula huésped procariota o CFIO, NSO, SP2/0, FIEK293, COS o una célula huésped de levadura.

10. Una célula huésped procariota o CHO, NSO, SP2/0, HEK293, COS o una célula huésped de levadura que comprende el vector de acuerdo con la reivindicación 9.

11. Un método para la producción de un polipéptido que se une a IGF-IR humano, que se caracteriza por expresar un ácido nucleico que codifica una cadena pesada de anticuerpo y un ácido nucleico que codifica una cadena ligera de anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 8 en una célula huésped procariota o CHO, NSO, SP2/0, HEK293, COS o una célula huésped de levadura y recuperar dicho polipéptido de dicha célula.

12. Un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 para utilizar en un método para el tratamiento de un paciente que necesita de una terapia antitumoral.

13. Un anticuerpo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4 para utilizar de acuerdo con la reivindicación 12, en el

que dicho anticuerpo se administra en combinación con un agente citotóxico, un profármaco del mismo o una

radioterapia citotóxica.