Anticuerpos antiproteína carbamilada y el riesgo de padecer artritis.

Un método para la clasificación de un individuo que padece de o que está en riesgo de padecer una forma de artritis dicho método comprendiendo determinar si una muestra que comprende un fluido corporal de dicho individuo comprende un anticuerpo antiproteína carbamilada (anti-CarP),

preferiblemente un anticuerpo anti-fibrinógeno carbamilado (anti-Ca-Fib), en donde dicha muestra es negativa para anticuerpo antiproteína citrulinada (ACPA) y en donde la detección de dicho anticuerpo anti-CarP clasifica la muestra como una muestra de un individuo que está en alto riesgo de padecer actualmente de o de estar en riesgo de desarrollar artritis.

Anticuerpos antiproteína carbamilada y el riesgo de padecer artritis Campo técnico de la invención La invención se refiere a los campos de la modificación postraduccional y la artritis. La invención en particular se refiere a métodos de clasificación de muestras de individuos con base en la detección de proteínas o péptidos modificados en forma posterior a la traducción o anticuerpos específicos para las proteínas o péptidos modificados después de la traducción en una muestra que contiene un fluido corporal del individuo.

Existen más de 100 formas diferentes de artritis. La forma más común es la osteoartritis (enfermedad degenerativa de las articulaciones) . La osteoartritis es más comúnmente el resultado de un trauma o de una infección de la articulación, aunque también existen causas que no son fácilmente identificables. Estas últimas se suelen denominar en conjunto como osteoartritis relacionadas con la edad. Otras formas de artritis son, por ejemplo, la artritis reumatoide, la artritis psoriática y enfermedades autoinmunes relacionadas.

La principal dolencia de las personas que tienen artritis es el dolor articular. El dolor es a menudo una constante y puede estar localizado en la articulación afectada. El dolor de la artritis es a menudo el resultado de los daños que se inducen a la articulación o el resultado de la inflamación que se produce alrededor de la articulación. Otras dolencias son el dolor como consecuencia de las distensiones musculares causadas por los movimientos forzados contra la rigidez, el dolor en las articulaciones y la fatiga.

El diagnóstico de los pacientes con dolor asociado a las articulaciones no es fácil ya que las dolencias son habitualmente vagas y pueden ser atribuidas a una variedad de causas diferentes algunas de las cuales no son por artritis. De hecho, muchos pacientes que primero ven a un médico con dolor en las articulaciones, las dolencias asociadas van en remisión y no desarrollan una forma crónica de artritis, mientras que una minoría significativa progresa para desarrollar artritis reumatoide (AR) . Está claro que las personas que entran en remisión espontánea no necesitan recibir tratamiento, mientras que los individuos en los que progresa se beneficiarán considerablemente de un tratamiento temprano. Para discriminar entre los grupos respectivos se han desarrollado una serie de pruebas con las que puede hacerse el diagnóstico de la artritis con más certeza. Tales pruebas actualmente implican el cribado de muestras de tejido y/o de muestras de fluidos corporales para detectar la presencia de indicadores de artritis en los mismos. Tales indicadores son, entre otros, la determinación de indicadores de inflamación "crónica" tales como, por ejemplo, ciertas quimoquinas, citoquinas y otros factores de señalización de células inmunes; la determinación de la "acumulación de" células inmunes activas en las articulaciones, y/o la presencia de ciertos factores en la sangre, el más notable de los cuales es el factor reumatoide. Recientemente, las pruebas dirigidas a la detección de la proteína citrulinada o de péptidos o anticuerpos específicos para tal proteína o péptido citrulinados se han convertido en una herramienta útil para tales pruebas. La disponibilidad de estas pruebas ha mejorado en gran medida el diagnóstico de las personas sospechosas de tener una forma de artritis. Estas pruebas también ayudan al médico a dar un pronóstico más preciso del futuro desarrollo de la enfermedad a las personas que sufren de artritis. Sin embargo, a pesar de estos avances, el diagnóstico de la artritis o de las personas de riesgo de padecerla aún deja mucho que desear.

Por ejemplo, en los Países Bajos la recomendación para diagnosticar AR se basa en una puntuación de probabilidad generada por los criterios de ACR/EULAR 2010. Estos criterios combinan características clínicas tales como la participación del tipo y número de articulaciones, la presencia o ausencia de los factores serológicos del factor reumatoide y anticuerpos anti-CCP, la presencia o ausencia de las proteínas de la fase aguda tales como la CRP y la duración de las dolencias. Los pacientes que son diagnosticados con AR de acuerdo con este protocolo, deben tener más de 6 puntos. El hecho de que sólo la implicación clínica y la duración de las dolencias sean suficientes para un diagnóstico positivo indica que la población con artritis es muy heterogénea y a menudo se hace un diagnóstico equivocado.

En los Países Bajos y en otros países, las pruebas para la tipificación de la artritis o el diagnóstico de un individuo en riesgo de desarrollar artritis actualmente incluyen pruebas para la detección de anticuerpos específicos para la proteína o péptido citrulinados en muestras de fluidos corporales de tales pacientes. Estos ensayos han dado lugar a la percepción de que los pacientes con artritis se pueden clasificar con base en la positividad para anticuerpos dirigidos hacia las proteínas citrulinadas (ACPA) . La identificación de las ACPA ha tenido un impacto importante en la comprensión de la AR [1]. Se han observado grandes diferencias al comparar pacientes con AR positivos para ACPA vs. los negativos para ACPA con respecto a los factores de riesgo ambientales y genéticos [2], la progresión [3] la remisión [4] y la respuesta al tratamiento [5]. Durante los últimos años se ha logrado una mejor percepción en cuanto a la ocurrencia y etiopatogenia de la AR positiva para ACPA. Sin embargo, mucha menos información está disponible con respecto a la AR negativa para ACPA. En parte, esto se debe a que es relativamente difícil de identificar o incluso formar un subgrupo de estos individuos ya que actualmente no hay buenos ensayos disponibles. Curiosamente, se ha descrito que el tratamiento con rituximab también puede ser beneficioso en pacientes negativos para RF y ACPA [6, 7].

La modificación postraduccional de los residuos de arginina en residuos de citrulina por las enzimas PAD es el paso esencial para generar antígenos para ACPA [1]. En circunstancias fisiológicas este citrulinación es importante en tejidos como el pelo y la piel para generar capas de tejido que no están bien conectadas [8]. También en el núcleo, la citrulinación desempeña un papel en la regulación epigenética [9] y la condensación de la cromatina, que es importante tanto en la traducción [8], como en la defensa del huésped contra patógenos [10]. En condiciones patológicas en las que la muerte celular puede abrumar la capacidad de fagocitosis, la muerte de células necróticas puede liberar PAD en el espacio extracelular, donde las mayores concentraciones de calcio ahora permiten también que otras moléculas huésped sean citrulinadas [8]. Dado que muchas de estas moléculas serán presentadas al sistema inmunológico como no propias, pueden inducir una respuesta de anticuerpos en algunos individuos. La citrulina se parece mucho (Fig. 1) a otro aminoácido modificado en forma postraduccional llamado homocitrulina [11]. La homocitrulina es sólo un átomo de carbono más largo, pero similar en estructura [11]. La homocitrulina se genera a partir de un residuo de lisina tras un ataque de cianato, que existe en el cuerpo en equilibrio con urea. En condiciones fisiológicas la concentración de urea puede ser demasiado baja para permitir una extensa carbamilación (el proceso de cambio de lisina por homocitrulina) . En condiciones de insuficiencia renal, se incrementa la concentración de urea y se puede detectar fácilmente la carbamilación. Sin embargo, la mayoría de la carbamilación se lleva a cabo durante la inflamación cuando se libera mieloperoxidasa (MPO) a partir de los neutrófilos [12]. Esta enzima desplaza fuertemente el equilibrio de urea hacia cianato, permitiendo ahora que se produzca más carbamilación [13]. Se ha demostrado recientemente que las proteínas que contienen homocitrulina están presentes en la articulación con AR y que esto puede afectar la activación de las células T y la formación de autoanticuerpos en modelos animales [11, 14]. Aunque muy similar, la carbamilación se diferencia de la citrulinación ya que, además de su diferencia estructural, se modifica la lisina y no la arginina. Por lo tanto, la homocitrulina se localizará, por definición, en otras posiciones en las proteínas que la citrulina. En la presente invención, se encontró que estaban presentes autoanticuerpos contra las proteínas carbamiladas en la artritis y se determinó que la medición de estos anticuerpos es útil en el diagnóstico, el pronóstico y el tratamiento de la artritis temprana y la AR.

La invención proporciona ahora un método para clasificar a un individuo que sufre de o que está en riesgo de padecer una forma de artritis, comprendiendo dicho método la determinación... [Seguir leyendo]

1. Un método para la clasificación de un individuo que padece de o que está en riesgo de padecer una forma de artritis dicho método comprendiendo determinar si una muestra que comprende un fluido corporal de dicho individuo comprende un anticuerpo antiproteína carbamilada (anti-CarP) , preferiblemente un anticuerpo anti-fibrinógeno carbamilado (anti-Ca-Fib) , en donde dicha muestra es negativa para anticuerpo antiproteína citrulinada (ACPA) y en donde la detección de dicho anticuerpo anti-CarP clasifica la muestra como una muestra de un individuo que está en alto riesgo de padecer actualmente de o de estar en riesgo de desarrollar artritis.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 para determinar si dicho individuo está en riesgo de padecer la artritis, y en donde dicho individuo no sufría de artritis en el momento que se obtuvo la muestra de fluido.

3. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde dicha artritis comprende artritis reumatoide, artritis juvenil, artritis psoriásica, osteoartritis, polimialgia reumática, espondilitis anquilosante, artritis reactiva, gota, seudogota, artritis autoinmune, lupus eritematoso sistémico, polimiositis, fibromialgia, enfermedad de Lyme, artritis indiferenciada, artritis no reumatoide o espondiloartropatía.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 3, en donde dicha artritis es artritis reumatoide, artritis juvenil o artritis indiferenciada.

5. Un kit para la detección de anticuerpos anti-Ca-Fib en un fluido corporal de un individuo, comprendiendo dicho kit un péptido fibrinógeno carbamilado como se muestra en la Tabla I, Tabla II o Tabla III.

6. Un kit de acuerdo con la reivindicación 5, que comprende además un anticuerpo anti-IgG humano y/o un anticuerpo anti25 IgA humano.

7. Un kit de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho anticuerpo anti-Ig humano comprende un anticuerpo anti-IgA humano.

8. Un kit de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho anticuerpo anti-Ig humano comprende un anticuerpo anti-IgG humano.

9. Un kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5-8, que comprende además una proteína o péptido citrulinado.

10. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, o un kit de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5-9, en donde dicho anticuerpo anti-CarP y/o anti-Ca-Fib es específico para una proteína o péptidos carbamilados derivados de suero de ternera fetal (FCS) y/o sus equivalentes mejorados.

11. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que comprende además la determinación de un factor adicional como un clasificador de artritis para dicho individuo.

12. Un método de acuerdo con la reivindicación 11, en donde dicho factor adicional comprende la determinación de ACPA, factor reumatoide, proteína reactiva C, y/o la velocidad de sedimentación de eritrocitos.

13. Un kit para la detección de anticuerpos anti-CarP en un fluido corporal de un individuo, comprendiendo dicho kit una proteína o péptido carbamilado, un anticuerpo anti-IgG humano, y un anticuerpo anti-IgA humano.

14. El uso de un kit para la detección de anticuerpos anti-CarP, preferiblemente anticuerpos anti-Ca-Fib, en un fluido

corporal de un individuo en un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, comprendiendo dicho kit una proteína o péptido carbamilado, preferiblemente fibrinógeno carbamilado o un péptido derivado del mismo.