Vacuna de péptido p53.

Uso de una agrupación de péptidos que comprende los péptidos siguientes de entre 30 y 40 aminoácidos contiguos de p53,

que comprenden o que consisten en las siguientes secuencias: p53 142-171, p53 157-186, p53 174-203, para la producción de un medicamento, dicho medicamento comprende además un adyuvante, dicho medicamento está previsto para el tratamiento o la prevención del cáncer.

Vacuna de péptido p53

Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere al campo de la medicina y la inmunología. En particular se refiere a una vacuna de péptido p53 mejorada.

Antecedentes de la invención [0002] En esta solicitud, p53 se toma como un ejemplo representativo de un autoantígeno de expresión ubicua conocido por estar asociado al cáncer. La estrategia usada para diseñar una vacuna contra p53 podría aplicarse para diseñar una vacuna contra cualquier otro autoantígeno de expresión ubicua conocido por estar asociado al cáncer. La fosfoproteína nuclear p53 es una proteína supresora tumoral que se expresa de forma ubicua en niveles bajos en tejidos normales, incluyendo timo, bazo y células linfohematopoyéticas (Rogerl A et al., Milner J et al., Terada N et al.) . La vida media normal de la p53 de tipo salvaje es inferior a 30 minutos. Tras la ubiquitinación, la proteína p53 de tipo salvaje (WT) es degradada rápidamente por proteasomas (Honda R et aI., Momand J et al., Shkedy D et al.) . La digestión mediada por proteasomas de p53 puede llevar a la generación de péptidos que son presentados por moléculas MHC de clase I. El reconocimiento de estos péptidos derivados de p53 de tipo salvaje ligados a MHC de clase I en la superficie de las APC tímicas por células T tímicas inmaduras con alta avidez para el complejo MHC de clase I-péptido dará como resultado una selección negativa (Allen PM et al., Ashton-Rickardt PG et al., Kappler JW et al.) . Como consecuencia, el repertorio de células T periféricas no contendrá células T restringidas por MHC de clase I específicas de p53 funcionales. Theobald et al. mostraron elegantemente que los CTL específicos para el péptido procesado naturalmente p53187-197 se eliminaron del repertorio en ratones WTp53 pero no en ratones p53-/- (Theobald M et al., 1997) , demostrando que la selección negativa de CTL específicos de p53 de alta avidez puede ocurrir en el timo. Paradójicamente, los CTL restringidos por MHC de clase I capaces de reconocer endógenamente WTp53 procesada en la superficie de las células tumorales, se han detectado tanto en ratones como en humanos (Theobald M et al. 1997, Macagno A, et al., Mayordomo JI et al., Barfoed AM et al., Chikamatsu K et al., Eura M et al., Houbiers JG et al., Ropke M et al.) , lo que sugiere que los CTL restringidos por MHC de clase I específicos de p53 funcionales pueden evitar la inducción de tolerancia.

Ya se han desarrollado varias vacunas de p53. Por ejemplo, la WO 00/75336 divulga péptidos poliepitópicos derivados de p53 que tienen la capacidad de ser degradados por el proteasoma y de asociarse con alta afinidad a las moléculas MHC de clase I. Tales propiedades se cree que son esenciales para inducir una respuesta inmune contra p53. Más probablemente, las células T que responden a este tipo de péptidos bien han sido eliminadas en el timo, bien son toleradas en la periferia, bien son de baja afinidad receptora de células T para mediar una respuesta eficaz antitumoral (Theobald M & Offringa R. 2003, and Morgan et al.) . Así, se espera que tales péptidos derivados de un autoantígeno de expresión ubicua, tal como p53, no será capaz de desencadenar una respuesta inmune eficaz y fuerte in vivo.

Por lo tanto, sigue existiendo la necesidad de vacunas de p53 nuevas y mejoradas, que no tengan todos los inconvenientes de las vacunas de p53 existentes.

Descripción de la invención [0005] La presente invención se basa en el hallazgo sorprendente de que para inducir una respuesta eficaz anti p53, un péptido derivado de p53 debería ser ineficazmente procesado por el proteasoma y/o mostrar una capacidad de baja a intermedia para formar establemente complejos MHC de clase I-péptido en la superficie celular y/o un péptido muestra una afinidad de baja a media de unión a MHC. Preferiblemente, un péptido derivado de p53 debería ser ineficazmente procesado por el proteasoma y/o mostrar una capacidad de baja a intermedia para formar establemente complejos MHC de clase I -péptido en la superficie celular. Hemos descubierto que el escape de células T autoespecíficas de la selección negativa en el timo puede ocurrir a través de interacciones de baja avidez entre TCR y MHC. De hecho, los CTL específicos de WTp53 que reconocen su péptido cognado se han detectado en ratón WTp53 pero con una avidez 10 veces inferior que los CTL obtenidos a partir de ratones p53-/- (Theobald M et al., 1997 y Hernandez J et al.) . Además, una disparidad entre los llamados inmunoproteasomas y proteasomas domésticos en la generación de determinados epítopos peptídicos puede permitir una selección positiva por el epitelio tímico pero un fracaso para eliminar estas células por una falta de presentación de estos complejos MHC-péptido por las APC tímicas. Las células dendríticas expresan constitutivamente inmunoproteasomas (Kloetzel PM & Ossendorp 2004) y altos niveles de inmunoproteasomas se han detectado en el timo (Zanelli E et al., y Stohwasser R et al.) . Morel et al. demostraron que los CTL humanos que reconocieron el antígeno de melanoma Melan-A al igual que los CTL que reconocieron una proteína nueva de expresión ubicua no reconocieron APC que portan inmunoproteasomas, aunque fueron capaces de reconocer células que expresan proteasomas domésticos. La falta de presentación de suficientes moléculas MHC de clase I que presentan el mismo péptido también puede permitir a las células T sobrevivir a la selección tímica (Sebzda E et al.) . Una expresión de superficie modesta de ciertos péptidos restringidos por MHC de clase I se puede conseguir mediante diferentes

mecanismos, no excluyentes entre sí: 1) disminuir la expresión o disminuir la renovación de proteínas en la célula resultante de la generación de un número insuficiente de epítopos que permiten el reconocimiento por CTL (Vierboom MP et al.) , 2) péptidos con sólo una afinidad de unión débil para MHC pueden perder la competición con péptidos con mejores propiedades de unión a MHC y como tales se expresan difícilmente en la superficie celular, 3) péptidos con sólo una capacidad débil para enlazarse de manera estable con MHC de clase I pueden formar complejos MHC de clase I péptido en la superficie celular que rápidamente se desintegran y como tales ya no son estimuladores para las células T (van der Burg SH et al. 1996) y 4) la generación proteasómica de epítopos de CTL puede ser insuficiente para generar una cantidad eficaz de complejos MHC-péptido.

Péptido [0006] En un primer aspecto se proporciona una agrupación de péptidos según la reivindicación 3. Se ha descrito un péptido derivado de una proteína que expresa de forma ubicua autoantígenos y se conoce por estar asociado al cáncer, dicho péptido comprende un epítopo que exhibe una capacidad de baja a intermedia para formar complejos estables MHC de clase I-péptido en la superficie celular y/o es ineficazmente procesado por un proteasoma y/o exhibe una afinidad de baja a intermedia de unión a MHC. Preferiblemente, un péptido comprende un epítopo que exhibe una capacidad de baja a intermedia para formar complejos estables MHC de clase I-péptido en la superficie celular y/o es ineficazmente procesado por un proteasoma. En el contexto de la invención, "exhibir una afinidad de unión a MHC de baja a intermedia" preferiblemente significa que la afinidad de unión relativa de un epítopo contenido en un péptido está comprendida entre 5 y 50 μM. Más preferiblemente, la afinidad de unión relativa está comprendida entre 10 y 50 μM, incluso más preferiblemente entre 15 y 50 μM. La afinidad de unión relativa se evalúa preferiblemente por un ensayo de unión celular basado en la competencia, tal y como se ha descrito anteriormente (van der Burg SH 1995) (véase también el ejemplo 1) . La afinidad de un epítopo dado presente dentro de un péptido se expresa como la concentración del epítopo para inhibir 50% (IC50) de la unión de un epítopo de referencia. La longitud del epítopo está generalmente comprendida entre 8 y 12 aminoácidos de longitud y se selecciona típicamente basada en los residuos de anclaje típicos para HLA-A*0101, A*0301, A*1101 y A*2401 (Rammensee HG et al.) . Los péptidos preferidos son los que se describen en el ejemplo 1. En el contexto de la invención, "exhibir una afinidad de unión a MHC de baja a intermedia" se mide preferiblemente midiendo la estabilidad para unión a MHC como se describe en (van der Burg SH et al. 1996) . La estabilidad de otros complejos péptido-HLA se determinó preferiblemente de la siguiente manera. La unión peptídica se llevó a cabo a 4°C y 20°C y se determinó IC50. Los péptidos de >50% de los complejos iniciales que se perdieron en 2 horas se consideraron inestables. Los péptidos... [Seguir leyendo]

1. Uso de una agrupación de péptidos que comprende los péptidos siguientes de entre 30 y 40 aminoácidos contiguos de p53, que comprenden o que consisten en las siguientes secuencias: p5.

14. 171, p5.

15. 186, p5.

17. 203, para la producción de un medicamento, dicho medicamento comprende además un adyuvante, dicho medicamento está previsto para el tratamiento o la prevención del cáncer.

2. Uso según la reivindicación 1, donde el medicamento comprende además un portador inerte farmacéuticamente aceptable. 10

3. Agrupación de péptidos que comprende los péptidos siguientes de entre 30 y 40 aminoácidos contiguos de p53, que comprenden o que consisten en las siguientes secuencias: p5.

14. 171, p5.

15. 186, p5.

17. 203.

4. Composición que comprende una agrupación de péptidos tal y como se define en la reivindicación 3, donde la 15 composición comprende además un excipiente farmacéutico y/o un modulador inmunológico.

5. Agrupación de péptidos según la reivindicación 3 o composición según la reivindicación 4 para su uso como un medicamento, dicho medicamento comprende además un adyuvante.

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