Epítopo de HPV al que se dirigen células T que infiltran tumores malignos cervicales para su uso en vacunas.

Uso de un péptido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de pacientes que sufren o están en riesgo de desarrollar una enfermedad relacionada con el HPV,

donde el péptido tiene una longitud que no supera los 100 aminoácidos y comprende al menos 22 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de una proteína E6 del HPV, donde la secuencia de aminoácidos contigua comprende un epítopo que es presentado por al menos una de una molécula de HLA-DQ y HLADP y donde el epítopo es SEC ID nº: 12, donde la enfermedad relacionada con el HPV se selecciona del grupo que consiste en: neoplasia intraepitelial cervical del cérvix (CIN), vulva (VIN), vagina (VaIN), ano (AIN) y pene (PIN) y cáncer del cérvix, vulva, vagina, ano, pene y cabeza y cuello.

Epítopo de HPV al que se dirigen células T que Infiltran tumores malignos cervicales para su uso en vacunas Campo de la invención

[0001] La presente invención se refiere a los campos de medicina y de la inmunología. En particular, se refiere a los epítopos de HPV nuevos que se pueden utilizar en la prevención, terapia y/o diagnóstico de enfermedades asociadas con el HPV.

Antecedentes de la invención

[0002] El cáncer cervical es el segundo cáncer más común en el mundo (Bosch et al. 2003). Los virus del papiloma humano (HPV) de alto riesgo tipo 16 y 18 son la causa del cáncer cervical en alrededor de dos tercios de los pacientes (Bosch et al. 1995, Muñoz et al. 2003). El genoma del HPV codifica dos oncoproteínas, E6 y E7, que son constitutivamente expresadas en las lesiones y cánceres cervicales de alto grado porque son necesarias para la aparición y el mantenimiento del fenotipo celular maligno (Zur Hausen, 1996).

[0003] La expresión específica del tumor de estas oncoproteínas, al igual que la presencia de bajos niveles de células T específicas de E6 y E7 circulantes detectadas en la sangre periférica de casi la mitad de los pacientes con cáncer cervical (de Jong et al. 2004, van der Berg et al. 2001, Welters et al. 2003, Welters et al. 2006, Ressing et al. 1996, Bontkes et al. 2000, Luxton et al. 1996) sugirió que podrían servir como antígenos de rechazo tumoral. No obstante, la existencia de células T específicas de HPV circulantes no implica que contribuyan a la respuesta antitumoral. Para controlar la enfermedad, estas células T deberían al menos ser capaces de alojarse en los sitios tumorales. De hecho, una proporción de carcinomas cervicales son infiltrados por linfocitos (Bethwaite et al. 1996, Chao et al. 1999, Piersma et al. 2007) pero aún falta conocimiento en profundidad sobre la especificidad y el tipo de células T que infiltran estos tumores cervicales, probablemente debido a las dificultades relativas para establecer cultivos de células T a partir de tejido tumoral. Sin embargo, algunos pioneros fueron capaces de aislar linfocitos infiltrantes del tumor (TIL) específicos de HPV a partir de tumores, dando como resultado la identificación de dos únicos epítopos de células T CD8+ de HPV16 (Evans et al. 1997, Oerke et al. 2005) y dos epítopos de células T CD4 específicos para los subtipos de alto riesgo menos predominantes HPV59 y HPV33 (Hohn et al. 1999, Hohn et al. 2000). No obstante, estudios más amplios sobre los linfocitos infiltrantes del tejido cervical son necesarios urgentemente para comprender la aportación y el papel de la respuesta inmune adaptativa específica de HPV en el cáncer cervical. Además, esto permitirá el diseño racional de estrategias acertadas de intervención inmune.

[0004] Estudios recientes han mostrado que dos citocinas, IL-7 e IL-15, tienen un papel principal en la expansión y la supervivencia de células T de memoria efectoras CD4+ y CD8+. IL-7 proporciona señales de supervivencia para células T efectoras (Li et al. 2003). IL-15 es un factor de crecimiento crítico en el inicio de las divisiones de células T y, a diferencia de IL-2 que generalmente se usa para expandir cultivos de TIL, no limita la expansión de células T continuada (Li et al. 2001). Además, IL-15 puede también hacer de activador independiente de antígeno de células T de memoria CD8(+) (Liu et al. 2002). Juntas, IL-7 e IL-15 pueden expandir células T de memoria efectoras con alta eficiencia, mientras que las células T de memoria centrales son menos sensibles y las células T vírgenes dejan de responder a la estimulación con estas citocinas (Geginat et al. 2001, McKinlay et al. 2007, Bacchetta et al. 2002).

[0005] Varios estudios precedentes han reportado reconocimiento restringido de MHC de clase II de péptidos sintéticos que consisten en secuencias de proteínas E6 y/o E7 del HPV16 por células T de células mononucleares de sangre

periférica (PBMC).

[0006] La WO 02/070006 divulga una respuesta restringida por DR1 contra un péptido que consiste en los aminoácidos 127-142 de la proteína E6 de HPV16, una respuesta restringida por DQ2 contra un péptido que consiste en los aminoácidos 35-50 de la proteína E7 de HPV16, una respuesta restringida por DR3 contra un péptido que consiste en los aminoácidos 43-77 de la proteína E7 de HPV16 y una respuesta restringida por DR15 contra un péptido que consiste en los aminoácidos 50-62 de la proteína E7 de HPV16.

[0007] Strang et al. revelan una respuesta restringida por DR7 en las PBMC de individuos asintomáticos contra un péptido sintético que consiste en los aminoácidos 42-57 de la proteína E6 de HPV16.

[0008] Altmann et al. divulgan una respuesta en las PBMC de individuos asintomáticos que son del tipo DR1/DR1 contra un péptido sintético que consiste en los aminoácidos 5-18 de la proteína E7 de HPV16, una respuesta en las PBMC de individuos asintomáticos que son del tipo DR4/DR13 contra un péptido sintético que consiste en los aminoácidos 17-34 de la proteína E7 de HPV16 y una respuesta en las PBMC de individuos asintomáticos que son del tipo DR4/DR13 contra un péptido sintético que consiste en los aminoácidos 69-82 de la proteína E7 de HPV16.

[0009] La WO 02/090382 divulga las afinidades de enlace para una serie de péptidos solapantes de las proteínas E6 y E7 de HPV16 para las moléculas de HLA-DR que son más predominantes en la población caucásica. La WO 02/090382 además informa de respuestas contra un número de péptidos de E6 y E7 de HPV16 en las PBMC empobrecidas en

O

CD8 de pacientes con papulosis bowenoide. La WO 2005/060993 describe péptidos de HPV16 sintéticos y su uso para el tratamiento y la prevención de una enfermedad asociada con el HPV.

[0010] No obstante, todavía existe una necesidad de conocimiento acerca de la presencia, tipo y especificidad de los linfocitos infiltrantes de los tumores en neoplasias asociadas al HPV, preferiblemente para los subtipos de alto riesgo más predominantes, tales como HPV 16, 18, 31, 33 y 45. Es un objeto de la presente invención proporcionar epítopos de HPV que sean objetivos para los linfocitos infiltrantes de los tumores y que se puedan utilizar en la prevención, terapia y/o diagnóstico de enfermedades asociadas con el HPV.

Descripción de la invención

[0011] La presente invención proporciona epítopos de células T nuevos que se identifican basándose en nuestro análisis de la presencia y especificidad de HPV16 o HPV18 de células T infiltrantes del cérvix en un grupo grande de 70 pacientes con neoplasias cervicales. Descubrimos que estos linfocitos infiltrantes comprenden células T específicas de HPV. En análisis más detallados, identificamos 17 epítopos nuevos de células T CD4+ y CD8+ y sus elementos de restricción de HLA, pero también revelamos que la respuesta inmune específica de HPV se dirigía hacia todas partes de las oncoproteínas E6 y E7. De forma imprevista, la gran mayoría de los epítopos de células T CD4+ fueron presentados en el contexto de las moléculas de HLA-DP y HLA-DQ menos abundantemente expresadas. Debido a que los epítopos de células T identificados constituyen objetivos fisiológicos en la respuesta inmune para tumores positivos de HPV16 y de HPV18, son objetivos valiosos para la optimización de la prevención contra las enfermedades relacionadas con el HPV y la inmunoterapia en pacientes con enfermedades relacionadas con el HPV.

[0012] En un aspecto, la presente invención se refiere, de este modo, a secuencias de aminoácidos de epítopos de célula de CTL CD8+ y Th CD4+ de HPV de reciente identificación, al igual que péptidos sintéticos derivados de HPV y composiciones inmunogénicas que comprenden los mismos son también parte de la presente invención. Tales péptidos dan como resultado una respuesta de memoria y efectora de CTL CD8+ mejorada, aumentada y prolongada tras la administración a un amplio abanico de pacientes que tienen una enfermedad asociada al HPV, incluyendo neoplasias relacionadas con el HPV. Tales péptidos pueden también inducir un microentorno proinflamatorio muy mejorado que es más posible que sea infiltrado por células efectoras, como resultado de esta respuesta de Th CD4+.

[0013] Debido a que los péptidos descritos son preferiblemente usados como vacuna solos o en combinación o como parte de una composición inmunogénica, los péptidos se denominan preferiblemente péptidos de vacuna y la composición composiciones de vacuna.

[0014] El uso de péptidos relativamente cortos es altamente preferido para usos médicos ya que se pueden sintetizar in vitro eficazmente, los que no es posible o poco rentable para proteínas nativas mayores de aproximadamente 100 aminoácidos. La síntesis química... [Seguir leyendo]

1. Uso de un péptido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de pacientes que sufren o están en riesgo de desarrollar una enfermedad relacionada con el HPV, donde el péptido tiene una longitud que no supera los 100 aminoácidos y comprende al menos 22 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de una proteína E6 del HPV, donde la secuencia de aminoácidos contigua comprende un epítopo que es presentado por al menos una de una molécula de HLA-DQ y HLADP y donde el epítopo es SEC ID n°: 12, donde la enfermedad relacionada con el HPV se selecciona del grupo que consiste en: neoplasia intraepitelial cervical del cérvix (CIN), vulva (VIN), vagina (VaIN), ano (AIN) y pene (PIN) y cáncer del cérvix, vulva, vagina, ano, pene y cabeza y cuello.

2. Uso según la reivindicación 1, y donde la secuencia de aminoácidos contigua comprende un epítopo que es reconocido por una célula T que infiltra una lesión neoplásica cervical o por una célula T de un ganglio linfático de drenaje y preferiblemente donde el epítopo es un epítopo de una proteína E6 de HPV.

3. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, donde la longitud de la secuencia de aminoácidos contigua es de 22 a 45 aminoácidos, preferiblemente de 22 a 35 aminoácidos y más preferiblemente de 33 a 35 aminoácidos.

4. Uso de un péptido para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de pacientes que sufren o tienen riesgo de desarrollar una enfermedad relacionada con el HPV, donde el péptido tiene una longitud que no supera los 100 aminoácidos y comprende al menos 22 aminoácidos contiguos de la secuencia de aminoácidos de una proteína E6 de HPV, donde la secuencia de aminoácidos contigua comprende un epítopo que es reconocido por una célula T que infiltra una lesión neoplásica cervical o por una célula T de un ganglio linfático de drenaje y donde el epítopo consiste en SEC ID n°: 12, y donde la enfermedad relacionada con el HPV se selecciona del grupo que consiste en: neoplasia intraepitelial cervical del cérvix (CIN), vulva (VIN), vagina (VaIN), ano (AIN) y pene (PIN) y cáncer del cérvix, vulva, vagina, ano, pene y cabeza y cuello.

5. Uso según la reivindicación 4, donde la secuencia de aminoácidos contigua comprende un epítopo que es presentado por una molécula de HLA-B, preferiblemente donde la molécula de HLA-B es una molécula de HLA-B7, HLA-B14, HLA- B27 o HLA-B57.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el medicamento comprende al menos dos péptidos diferentes, tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, preferiblemente donde el medicamento comprende además al menos un adyuvante, y más preferiblemente donde los adyuvantes actúan a través de un

receptor de tipo peaje.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el medicamento es para administración intravenosa, subcutánea, intramuscular, mucosa, intradérmica y/o intracutánea.

8. Péptido que consiste en SEC ID n°: 12, preferiblemente para su uso como un medicamento.

9. Composición que comprende un péptido tal y como se define en la reivindicación 8 y un portador farmacéuticamente aceptable.

10. Composición según la reivindicación 9, que comprende además al menos un adyuvante, donde el adyuvante preferiblemente actúa a través de un receptor de tipo peaje.

11. Molécula de ácido nucleico que codifica al menos un péptido, tal y como se define en la reivindicación 8.

12. Molécula de ácido nucleico que codifica un receptor de célula T que reconoce un epítopo seleccionado del grupo que consiste en SEC ID n°: 12.

13. Célula T aislada que comprende la molécula de ácido nucleico según la reivindicación 12.

14. Célula T aislada que comprende un receptor de célula T que reconoce un epítopo seleccionado del grupo que consiste en SEC ID n°: 12.