Vacunación intradérmica del péptido de HPV.

Uso de un péptido derivado de la proteína E2, E6, y/o E7 de HPV para la producción de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad relacionada con el HPV,

donde el medicamento es de administración intradérmica, y donde la enfermedad relacionada con el HPV es seleccionada de una infección por HPV, una malignidad asociada al HPV, una Neoplasia Intraepitelial Cervical (CIN), una Neoplasia Intraepitelial de Vulva (VIN), una Neoplasia Intraepitelial Anal (AIN), una Neoplasia Vaginal Intraepitelial (VAIN), una Neoplasia Intraepitelial de Pene (PIN), un cáncer cervical, un cáncer de vulva, un cáncer anal, un cáncer de cuello y de cabeza o un cáncer de pene.

DESCRIPCIÓN

Vacunación intradérmica del péptido de HPV.

Campo de la invención 5

La presente invención se refiere al campo de la medicina y la inmunología. En particular se refiere a la vacunación intradérmica del péptido de HPV.

Antecedentes de la invención 10

La infección por HPV es altamente predominante entre individuos masculinos y femeninos jóvenes y sexualmente activos. Grandes estudios prospectivos mostraron que es común esa contracción del HPV de parejas masculinas, se dio en 40-60 % de los sujetos durante un período de seguimiento de 3 años (Koutsky et al., 1997, Ho et al., 1998, Marrazzo et al., 2000) . Por lo tanto, el HPV es probablemente la enfermedad de transmisión sexual más 15 común.

Los virus del papiloma de los tipos de alto riesgo (por ejemplo HPV16, 18, 31, 33, y 45) son responsables del cáncer cervical (Bosch et al., 1995, Zur Hausen, 1996) . Tras la infección de las células epiteliales basales, se expresan los genes tempranos inmediatos del HPV E1, E2, E5, E6 y E7. Los genes E1 y E2 regulan la replicación 20 vírica. Además, la proteína E2 controla la expresión de las oncoproteínas E6 y E7. La proteína E6 de los tipos de HPV de alto riesgo se enlaza específicamente con P53 y dirige su degradación rápida a través de la vía ubiquitina. P53 está implicado en la iniciación de apoptosis y la pérdida de esta proteína tiene como resultado la prevención de apoptosis (Scheffner et al., 1990) . La proteína E7 de los tipos de alto riesgo se enlaza con pRB, que normalmente impide que las células entren en el ciclo celular a través de la desactivación de E2F, una proteína que es necesaria 25 para la entrada al ciclo celular (Dyson et al. 1989) . La expresión de E7 provoca que las células infectadas no se retiren del ciclo celular y se diferencien.

La expresión elevada y prolongada de las oncoproteínas E6 y E7 está firmemente asociada a la displasia inducida por el HPV y la transformación en el carcinoma cervical. 30

El papel de protección del sistema inmunológico en la defensa contra las enfermedades relacionadas con el HPV y contra el cáncer inducido por el HPV en seres humanos se sugiere por el hecho de que, en comparación con los controles normales, los pacientes de trasplante renal inmunosuprimidos y los pacientes infectados con VIH muestran una incidencia superior de 17 pliegues de infección genital por HPV (Ho et al., 1994, Matorras et al. 1991, 35 Halpert et al. 1986) . La menor capacidad de los individuos inmunosuprimidos para resolver la infección por HPV indirectamente indica un papel de protección del sistema inmunológico al principio de la infección. La evidencia de protección contra el HPV a través de la inmunidad contra los antígenos tempranos E2, E6 y E7 viene del modelo de virus del papiloma del conejo de cola de algodón, que es el principal modelo de animal para los virus del papiloma asociados al cáncer. La vacunación con las proteínas no estructurales E1 y E2 causa la regresión de los papilomas 40 inducidos por el virus mientras que se suprime el crecimiento del tumor vírico.

Además, los conejos vacunados con la combinación de los genes E1, E2, E6, y E7 estaban protegidos completamente contra la inoculación vírica (Han et al. 1999, Selvakumar et al. 1995) . De manera importante, los conejos con verrugas con crecimiento progresivo inducidas por el virus del papiloma pudieron erradicar sus lesiones 45 y limpiar las infecciones víricas latentes con dos inyecciones con una vacuna que incluía los péptidos E6 y E7 largamente superpuestos (Vambutas, Vaccine 2005) . Estos datos indican que la inmunidad contra E2, E6, y E7 puede ser eficaz como inmunoprofilaxis de infección del virus del papiloma al igual que terapéuticamente para lesiones inducidas por el HPV y el cáncer.

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Existe un interés considerable en la identificación de epítopos implicados en la respuesta inmune a HPV16, dada la posibilidad de incorporar estos como subunidades en una vacuna o usar estos epítopos para controlar la inmunidad inducida por vacuna in vivo. Puesto que las células más epiteliales expresan las MHC clase I pero no las clase II, la atención hasta el momento ha estado centrada en la inducción de linfocitos T citotóxicos tumoricidos específicos de HPV CD8+ (Melief et al., 2000; Ressing et al., 1995; Ressing et al., 2000; Ressing et al., 1996) . La 55 reactividad de las células T específicas de HPV CD8+ ha sido descubierta en la sangre periférica de pacientes diagnosticados con lesiones de neoplasia cervical intraepitelial de grado III (CIN III) o carcinoma cervical (Nimako et al., 1997; Ressing et al., 1996) y en las poblaciones de células T de infiltración tumoral aisladas de pacientes con cáncer cervical (Evans et al., 1997) . La inmunidad de auxiliar de T ("Th") CD4+ específica de tumor se considera también ahora crucial para la erradicación eficaz de tumores sólidos, a pesar del hecho de que la mayor parte de 60 estos tumores no expresen MHC clase II (reseñado en Melief et al., 2000; Pardoll y Topalian, 1998; dedos et al., 1999) . Pruebas reciente indican que se requieren células T CD4+ específicas de tumor no solo para la inducción óptima de CTL CD8+ específicas de tumor sino también para la ejercitación óptima de la función celular del efector local a través de estas CTL (Ossendorp et al., 1998, Toes et al., 1999) . Para la inducción de la inmunidad específica de tumor restringido por MHC clase I, la presentación cruzada de antígenos que han sido capturados por células que 65

presentan antígenos profesionales parece desempeñar un papel dominante. Se requiere ayuda para la inducción apropiada de una CTL específica de tumor a través del cebado cruzado de células T específicas de tumor CD4+ (Toes et al., 1999, Schoenberger et al., 1998) .

Sólidos indicios de un papel protector de la inmunidad de Th específica del HPV fueron sugeridos por la 5 predominación de células T CD4+ en las verrugas genitales en regresión (Coleman et al., 1994) , al igual que por la detección de respuestas de hipersensibilidad de tipo retardado para E7 de HPV16 en la mayoría de los sujetos con lesiones de regresión espontánea de CIN (Hopfl et al., 2000) . Además, en la mayoría de las personas sanas, el sistema inmunológico logra eliminar el virus antes del desarrollo de neoplasias (Koutsky, 1997; Evander, 1995) . De acuerdo con esto, más de la mitad de todas las mujeres sanas mostraron respuestas de memoria de células 10 Th1/Th2 específicas de E2 y E6 de HPV16 (de Jong, 2002; Welterss, 2003; de Jong, 2004) . Además, se descubrió que la reactividad de Th contra E2 ocurrió al mismo tiempo que el aclaramiento vírico (Bontkes, 1999) . Los sujetos sanos muestran inmunidad específica de E7 de HPV16 también (Welters, 2003; van der Burg, 2001) . En cambio, la incidencia de cáncer inducido por HPV está fuertemente asociada al fallo inmunológico. El análisis de células T CD4+ específicas de E2, E6 y E7 de HPV16 en la sangre periférica de pacientes con neoplasia inducida por HPV16+ 15 reveló que la mitad de los pacientes con alto grado de neoplasia vulvar (van Poelgeest, 2005) y la mayoría de los pacientes con CIN III no aumentaron una respuesta inmune apropiada (de Jong, 2004) . De los pacientes evaluados con carcinoma cervical, aproximadamente la mitad careció de cualquier respuesta de células T proliferativa detectable. La otra mitad mostró respuestas poco proliferativas de células T específicas de E2 y E6 de HPV16 no asociadas a la producción de citocinas de Th1/Th2 pero con IL-10 (de Jong, 2004) . Esto corrobora las observaciones 20 previas que señalaban que las respuestas proliferativas específicas de E6 y E7 pueden estar presentes (Luxton; 2003) , pero que la respuesta de Th1 periférica en los pacientes con carcinoma cervical es baja (de Gruijl, 1996; de Gruijl, 1998) o insuficiente (Tsukui, 1996) . Puesto que la respuesta de células T CD4+ es de crucial importancia para la inducción y el mantenimiento de la inmunidad de CTL CD8+ (Melief; 2002) , estos datos ofrecen una explicación plausible de por qué los CTL específicos de HPV16 son raramente detectados en pacientes con displasia de alto 25 nivel o cáncer (Ressing, 1996; Bontkes, 2000; Nimako, 1997; Youde, 2000) , mientras que tales CTL son más comúnmente detectables en mujeres sin neoplasia por HPV16+ (Nakagawa, 1997; Nakagawa, 1999) .

Para un método clínicamente relevante de inmunización de sujetos contra el HPV en particular, se prefiere que tanto las células T auxiliares específicas como los CTL sean inducidos. Ya hemos mostrado que la inmunización 30 con epítopos de CTL mínimos conlleva la protección contra tumores en algunos modelos (Kast et al. 1991) , mientras que en otros modelos,... [Seguir leyendo]

1. Uso de un péptido derivado de la proteína E2, E6, y/o E7 de HPV para la producción de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad relacionada con el HPV, donde el medicamento es de administración intradérmica, y donde la enfermedad relacionada con el HPV es seleccionada de una infección por HPV, una 5 malignidad asociada al HPV, una Neoplasia Intraepitelial Cervical (CIN) , una Neoplasia Intraepitelial de Vulva (VIN) , una Neoplasia Intraepitelial Anal (AIN) , una Neoplasia Vaginal Intraepitelial (VAIN) , una Neoplasia Intraepitelial de Pene (PIN) , un cáncer cervical, un cáncer de vulva, un cáncer anal, un cáncer de cuello y de cabeza o un cáncer de pene.

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2. Uso según la reivindicación 1, donde al menos un epítopo de HLA de clase II y/o al menos un epítopo de HLA de clase I están presentes dentro de una secuencia de aminoácidos contigua de la secuencia de aminoácidos de al menos una de las proteínas E2, E6, y/o E7 de HPV.

3. Uso según la reivindicación 1 o 2, donde la longitud de la secuencia de aminoácidos contigua es de 19-45 15 residuos de aminoácidos contiguos de la proteína E2, E6, y/o E7 de HPV, preferiblemente d.

2. 45, más preferiblemente d.

2. 40, más preferiblemente d.

2. 35, incluso más preferiblemente de 22, 25, 28, 32 o 35 aminoácidos contiguos.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde el medicamento contiene al menos dos péptidos 20 diferentes derivados de las proteínas E2, E6, y/o E7 de HPV.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, donde las secuencias de aminoácidos contiguas son de las secuencias de aminoácidos de al menos dos de las proteínas E2, E6 y E7 de HPV, preferiblemente de las tres proteínas E2, -E6 y E7 de HPV. 25

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde el medicamento no comprende un adyuvante.

7. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-6, donde el medicamento consiste en uno o varios péptidos tal y como se define en las reivindicaciones 1-6 y un portador farmacéuticamente aceptable inerte. 30

8. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, donde el medicamento contiene un péptido tal y como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y al menos un adyuvante, no siendo dicho adyuvante formulado en una emulsión a base de aceite en agua y/o no siendo de un tipo de emulsión de aceite en agua.

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9. Uso según la reivindicación 8, donde el medicamento contiene un ligando Receptor Tipo Peaje (TLR) (3, 4, 7, 8, 9) como el lípido monofosforil A y/o ácido nucleico CpG, y/o una molécula coestimuladora de Célula Presentadora de Antígeno (APC) como un ligando CD40, anticuerpos agonísticos o fragmentos funcionales y derivados de los mismos, y/o GM-CSF.

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10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, donde el medicamento es administrado intradérmicamente directamente en el sitio de la lesión.

11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-10, donde además un péptido derivado de las proteínas E2, E6, y/o E7 de HPV se usa para la producción de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad 45 relacionada con el HPV, seleccionado de una infección por HPV, una malignidad asociada al HPV, una Neoplasia Intraepitelial Cervical (CIN) , una Neoplasia Intraepitelial de Vulva (VIN) , una Neoplasia Intraepitelial Anal (AIN) , una Neoplasia Intraepitelial Vaginal (VAIN) , una Neoplasia Intraepitelial de Pene (PIN) , un cáncer cervical, un cáncer de vulva, un cáncer anal, un cáncer de cuello y de cabeza o un cáncer de pene, donde el medicamento es de administración subcutánea. 50