Anticuerpo anti-IL-3Ralfa para su utilización en el tratamiento de un tumor de la sangre.

Anticuerpo contra una cadena de IL-3Rα humana, que no inhibe la señalización de IL-3,

y que se une al dominio B de la cadena de IL-3Rα humana pero no se une al dominio C de la cadena de IL-3Rα humana.

Anticuerpo anti-IL-3Ra para su utilización en el tratamiento de un tumor de la sangre.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un anticuerpo contra la proteína IL-3Ra humana (por otro nombre: CD123 humana) . También se describen en la presente memoria un agente terapéutico y un agente de diagnóstico para tumores malignos mielociticos, particularmente leucemia mieloide aguda (AML) , que comprende como principio activo un anticuerpo anti-IL-3Ra humana.

Antecedentes de la invención Con respecto a tumor ma ligno:

Un tumor maligno (cáncer) es la primera causa principal de muerte en Japón, y el número de pacientes crece cada año, y se desea vivamente el desarrollo de un fármaco y un método terapéutico que tenga eficacia y seguridad elevadas. Como la causa que forma un tumor maligno, están una mutación del ADN por radiación, rayos ultravioletas y diversas sustancias carcinogénicas. Los estudios sobre tumores malignos se han centrado en la identificación biológica molecular de estos cambios genéticos. Como resultado, se considera que la transformación tumOfigénica es inducida por la acumulación de un gran número de mutaciooes, y similares. Se ha demostrado mediante un modelo de estirpe celular y similar que algunas mutaciones decisivas están conectadas directamente con la transformación tumorigénica. Con respecto a la leucemia como una de las enfermedades diana de la invención, se han identificado y clasificado muchas anormalidades cromosómicas. En muchos de los casos, se encuentra translocación del cromosoma, y en las principales translocaciones cromosómicas ya se han identificado algunos genes asociados con la translocación cromosómica. Analizando las funciones de los genes relacionados con la translocación, se ha encontrado que estos genes están implicados en el inicio de la leucemia.

Con respecto a las células troncales cancerosas:

Por otro lado, desde hace tiempo, desde el punto de vista de la biología celular, se ha propuesto la denominada hipótesis de células troncales cancerosas, que señala que la célula troncal es el origen de un tumor maligno similar al tejido normal. La célula troncal se define como una célula que tiene capacidad de replicación autónoma y pluripotencia, y generalmente se divide aproximadamente en célula troncal totipotente y célula troncal tisular. Las células troncales tisulares se originan a partir de tejidos y órganos específicos tales como el sistema sanguíneo, hígado, sistema nervioso, y similar, y presentan una frecuencia extremadamente baja. Entre ellas, se ha estudiado muy frecuentemente la célula troncal hematopoyética. Se ha dado a conocer que un sistema hematopoyético se puede reconstruir durante un período de tiempo prolongado transplantando una célula troncal hematopoyética en un ratón en el que se destruyó el sistema hematopoyético mediante una dosis letal de irradiación (documento 1 no de patente) . A diferencia de la célula troncal normal, los estudios sobre células troncales cancerosas se han retrasado durante un período de tiempo prolongado puesto que no se pudo encontrar su naturaleza exacta. Sin embargo, se ha identificado por primera vez una célula troncal cancerosa en leucemia mieloide aguda, en 1997 por Dick el al. Después, se ha dado a conocer la presencia de células troncales cancerosas en diversos tumores malignos Resumiendo, las células troncales cancerosas están presentes a una frecuencia de varios % o menos de todas las células troncales tanto tumorales y raras como normales. Se considera que las células restantes que forman el tumor SOfl células precursoras tumorales en las que la capacidad de proliferación está limitada, o células tumorales Mediante estos informes, se mostró que existe una jerarquía incluso en el tumor similar al tejido normal, y la célula troncal cancerosa que reside en este pico (origen) tiene una fuerte capacidad formadora de tumores Características y problemas terapéuticos de célu las tronca les cancerosas:

Resumiendo muchos informes, se considera que las células troncales cancerosas mantienen diversas características que poseen las células troncales normales. Los ejemplos de similitudes incluyen la rareza de las células, un microentorno (nicho) en el que existe la célula, la expresión de un gen de multirresistencia, la detención del ciclo celular, y similares.

Particularmente, las características de que expresan un grupo de genes de multirresistencia y de que están en la interfase del ciclo celular similar a células troncales normales podría convertirse en un problema terapéuticamente enorme. Un gen de multirresistencia BCRP es una bomba que afecta a la eficacia del fármaco al eliminar diversos agentes antitumorales fuera de las células, y se ha dado a conocer un método para recoger células troncales haciendo uso de la actividad (documento 2 no de patente) . Además, su presencia en la interfase del ciclo celular

bajo el estado de ~detención" (documento 3 no de patente) provoca una reducción de la sensibilidad a muchos agentes antitumorales y radiaciooes que atacan el crecimiento celular rápido del cáncer (documentos 4 y 5 no de patente) .

Basándose en las características anteriores, se considera que la célula troncal cancerosa que presenta resistencia a la terapia es una causa de regeneración tumoral

Con respecto al fármaco diana molecular

Las tres vías principales de tratamiento de un tumor maligno incluyen la terapia con agentes antitumorales, la terapia de radiación y la extirpación quirúrgica. El tumor de la sangre está limitado a la terapia con agentes antitumorales y a la terapia de radiación, y como se describe en lo anterior, la célula troncal cancerosa puede tener una resistencia a estos tratamientos. Otro problema es que los efectos secundarios son grandes, puesto que estos dos tratamientos afectan a todo el cuerpo. Como medio para resolver este problema, es de esperar un fármaco diana molecular Tienen la posibilidad de reducir los efectos secundarios al presentar su eficacia farmacéutica solamente en la célula que expresa la molécula diana.

Los ejemplos de fármacos típicos del fármaco diana molecular en el campo de enfermedades sanguíneas incluyen imatinib y rituximab. Imatinib se dirige contra un factor que provoca la leucemia, denominado Bcr-Abl, producido por una anormalidad cromosómica (cromosoma de Filadelfia) , que se obselVa en el 95% de los pacientes con CML Este es un fármaco de bajo peso molecular que induce el suicidio de células leucémicas al inhibir la función de BcrAbL Rituximab es un anticuerpo terapéutico que reconoce CD20 como una molécula de la superficie en una célula B, y tiene un efecto antitumoral sobre un tumor maligno de célula B (Iinfoma no de Hodgkin y similar) . Por otro lado, los fármacos diana moleculares para AML son pocos, y solamente hay un agente gemtuzumabozogamicina (Mylotarg) en el que un antibiótico, calicheamicina, está enlazado a un anticuerpo monoclonal para CD33, conocido como un antígeno de la superficie celular de AML. Sin embargo, actualmente el uso de Mylotarg está limitado debido a su fuerte toxicidad, que se considera derivada de la calicheamicina, además del problema de que el intelValo terapéutico es estrecho. Basándose en lo expuesto anteriormente, se puede afirmar que el descubrimiento de un nuevo gen diana y el desarrollo de un agente terapéutico para éste soo invenciones importantes que conducen directamente a la posibilidad de terapia y expansión de las elecciones de la terapia Como la realización de fármacos diana moleculares, se han estudiado y desarrollado diversas sustancias tales como un anticuerpo terapéutico y un fármaco de bajo peso molecular, así como un fármaco peptídico, una preparación proteica biológica tal como citocina, un ARNpi, aptámero, y similar. Cuando se usa un anticuerpo como agente terapéutico, debido a su especificidad, es útil en el tratamiento de patologías en las que la célula trastornada expresa un antígeno específico. El anticuerpo se une a una proteína que se expresa sobre la superficie celular como su antígeno, y actúa eficazmente al unirse a la célula. El anticuerpo tiene una característica de una semivida prolongada en la sangre y una elevada especificidad por su antígeno, y también es notablemente útil como agente antitumoraL Por ejemplo, cuando un anticuerpo se dirige a un antígeno específico de tumor, se puede esperar que el anticuerpo administrado se acumule en el tumor y ataque de ese modo a la célula tumoral vía la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) . Además, al unir una sustancia radioactiva, una sustancia citotóxica y similar a un anticuerpo, es posible transferir eficientemente un... [Seguir leyendo]

1. Anticuerpo contra una cadena de IL-3Ra humana, que no inhibe la seña lización de IL-3, y que se une al dominio B de la cadena de IL-3Ra humana pero no se une al dominio C de la cadena de IL-3Ra humana

2. Anticuerpo según la reivindicación 1, que presenta además una cilotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) elevada.

3. Anticuerpo según la reivindicación 1 o 2, en el que la citoloxicidad celular dependiente de anticuerpos (AOCC)

elevada muestra un porcentaje de lisis específica de 10% a una concentración de anticuerpo de 0, 01 , Ig/ml, medianle un mélodo de ensayo de AOCC de Colon-26fhC0123 que utiliza PBMC cultivadas con IL-2

4. Anlicuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende unas secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada y CDR de cadena ligera seleccionadas de entre el grupo que consiste en los (a) a (e) siguientes:

(a) CDR 1 a 3 de la cadena pesada son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 113 a 115, respectivamente, y COR 1 a 3 de la cadena ligera son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO. 131 a 133, respectivamente ,

(b) CDR 1 a 3 de la cadena pesada son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 116 a 118, respectivamente, y COR 1 a 3 de la cadena ligera son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO. 134 a 136, respectivamente ,

(c) CDR 1 a 3 de la cadena pesada son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 119 a 121 , respectivamente, y COR 1 a 3 de la cadena ligera son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 137 a 139, respectivamente ,

(d) CDR 1 a 3 de la cadena pesada son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 122 a 124, respectivamente, y CDR 1 a 3 de la cadena ligera son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 140 a 142, respectivamente , y

(e) CDR 1 a 3 de la cadena pesada son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO: 125 a 127, respectivamente, y COR 1 a 3 de la cadena ligera son las secuencias de aminoácidos de SEC ID nO. 143 a 145, respectivamente

5. Anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciooes 1 a 4, que comprende una región variable de cadena pesada y una región variable de cadena ligera selecciooadas de entre el grupo que consiste en los (a) a (e) siguientes:

(a) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de glutamina (Q) en la posición 20 a serina (S) en la posición 139 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO: 53 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de valina (V) en la posición 23 a lisina (K) en la posición 129 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO. 55;

(b) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de glutamina (O) en la

posición 20 a serina (S) en la posición 139 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO. 57 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de valina (V) en la posiciórJ 23 a lisina (K) en la posición 129 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO: 59;

(c) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de glutamina (Q) en la posición 20 a serina (S) en la posición 139 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO: 61 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de ácido aspártico (O) en la posición 23 a lisina (K) en la posición 129 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO: 63;

(d) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de glutamina (O) en la posición 20 a serina (S) en la posición 139 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO: 65, y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de ácido aspártico (O) en la posición 23 a lisina (K) en la posición 129 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO. 67; y

(e) una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos de glutamina (O) en la posición 20 a serina (S) en la posición 138 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO: 69 y una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos de ácido aspártico (O) en la posición 23 a lisina (K) en la posición 129 en la secuencia de aminoácidos de SEC ID nO. 71

Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo de IL-3Ra según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su utilización en un método para prevenir o tratar un tumor de la sangre en el que una célula que expresa IL3Ru se encuentra en la médula ósea o la sangre periférica de un sujeto.

7. Anticuerpo de IL-3Ru según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para su utilización en un método para tratar

un tumor de la sangre en el que una célula que expresa IL-3Ru se encuentra en la médula ósea o la sangre 5 periférica 8. Utilización del anticuerpo de IL-3Ru según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para detectar en una muestra biológica de un sujeto un tumor de la sangre en el que una célula que expresa IL-3Ru se encuentra en la médula ósea o la sangre periférica.

9. Composición farmacéutica para su utilización según la reivindicación 6, anticuerpo de IL-3Ru para su utilización según la reivindicación 7, o utilización del anticuerpo de IL-3Ru según la reivindicación 8, en la/el que el tumor de la sangre es la leucemia mieloide aguda (AML) .