Uso del pentapéptido PHSRN en formulaciones oftálmicas.

Uso del péptido PHSRN o de una sal del mismo en la preparación de una formulación oftálmica para la estimulación de la cicatrización de las heridas producidas en el epitelio de la córnea.

Uso del pentapïptido PHSRN en formulaciones oftïlmicas CAMPO DE LA INVENCIïN

La presente invenciïn se refiere a un uso especïfico del pïptido PHSRN.

ANTECEDENTES DE LA TïCNICA

La presente invenciïn se refiere a la secuencia de aminoïcidos prolina-histidina-serina-arginina-asparagina, que es un sitio de expresiïn de la actividad de la fibronectina, y a una sustancia quïmica, con la que se modifican ambos terminales de la anterior secuencia de aminoïcidos (denominïndose estos de aquï en adelante PHSRN y Ac-Pro-His-Ser-Arg-Asn-NH2) .

La cïrnea es un tejido fino de 0, 52 mm a 1, 0 mm de espesor. La cïrnea estï situada en la parte mïs destacada del globo ocular y es un tejido altamente diferenciado, que tiene una propiedad de transmisiïn y una potencia de refracciïn apropiada para guiar la luz desde el exterior hacia los receptores de la retina. La cïrnea tiene funciones fisiolïgicas muy importantes. La estructura de la cïrnea es comparativamente simple. Es decir, la cïrnea tiene una estructura de cinco capas microscïpica muy ordenada que comprende la capa epitelial, la membrana de Bowman, el estroma corneal, la membrana de Descemet y la capa de cïlulas endoteliales.

La fibronectina es una glucoproteïna con un peso molecular de aproximadamente 440.000 que participa en la adhesiïn y propagaciïn celular, y desempeïa un papel importante en las acciones de cicatrizaciïn de heridas, asï como en la morfogïnesis, el desarrollo y otros fenïmenos biolïgicos. Dicha fibronectina es un dïmero en el que estïn unidas dos subunidades de un peso molecular de 220 a 250.000 cada una. La fibronectina tiene una estructura de dominio. La fibronectina participa en la adhesiïn celular y se une especïficamente con diversas matrices extracelulares y puentes con los receptores de fibronectina (integrinas) en las superficies celulares.

El trastorno de la cïrnea es inducido por la ïlcera corneal, la erosiïn epitelial corneal, la queratitis, la sequedad ocular y otras diversas enfermedades. Dicho trastorno se repara de forma natural si no hay infecciïn mixta concurrente. Los principios de la reparaciïn son: (1) la apariciïn de la fibronectina en partes del estroma corneal expuesto en zonas epiteliales defectuosas resultantes del trastorno de la cïrnea; (2) la uniïn de dicha fibronectina sobre una matriz; y (3) la difusiïn y el movimiento de las cïlulas epiteliales sobre dicha matriz. Como se cura la cïrnea, la fibronectina desaparece de las partes daïadas de la cïrnea.

Por alguna razïn, el proceso de reparaciïn se puede retrasar o el defecto epitelial puede persistir sin repararse. En dicho caso, la estructuraciïn normal del epitelio se ve afectada negativamente, pudiïndose deteriorar incluso las estructuras y funciones del estroma y del endotelio. Los mïtodos de tratamiento convencionales son mïtodos pasivos en los que se protege la superficie de la cïrnea de la irritaciïn externa con el fin de permitir que el epitelio se extienda de forma natural y vuelva a cubrir las partes defectuosas. Con los desarrollos recientes realizados en el campo de la biologïa celular, se han aclarado los factores implicados en la divisiïn, el movimiento, la adhesiïn, la propagaciïn, etc., de las cïlulas. En lo que se refiere a la reparaciïn de los defectos epiteliales corneales, se ha hecho hincapiï en los compuestos que estimulan la difusiïn del epitelio de la cïrnea.

Los componentes tales como la fibronectina, el EGF (factor de crecimiento epidïrmico) y el ïcido hialurïnico son conocidos como agentes terapïuticos de las heridas epiteliales de la cïrnea. La fibronectina, que se encuentra en el plasma humano, se puede purificar y usar como producto sanguïneo para su instilaciïn. Se sabe que dicha formulaciïn oftïlmica potencia el recubrimiento de los defectos epiteliales de la cïrnea y la cicatrizaciïn de las heridas epiteliales.

Sin embargo, en la actualidad, la fibronectina se debe purificar a partir de un plasma autïlogo del paciente, usando un kit especial de purificaciïn. Por lo tanto, la obtenciïn de la fibronectina es muy complicada y supone muchas molestias para el paciente. Por esta razïn, a pesar de ser clïnicamente eficaz, la fibronectina no recibe un uso adecuado.

El EGF (factor de crecimiento epidïrmico) es un polipïptido con un peso molecular de 6.000 conocido por sus acciones como factor de crecimiento promotor de la mitosis para el epitelio de la cïrnea. Se sabe que cuando estïn presentes los factores que inhiben la mitosis del epitelio, los efectos del EGF no se pueden presentar fïcilmente. Ademïs, en los casos en que acompaïan a la inflamaciïn y en los casos de queratopatïa diabïtica, se produce angiogïnesis como efecto secundario del EGF.

El ïcido hialurïnico es un glucosaminoglicano con un peso molecular de varios millones que tiene N-acetil-D

glucosamina y ïcido D-glucurïnico como azïcares constituyentes. Se sabe que el ïcido hialurïnico presenta efectos terapïuticos significativos como agente terapïutico para la sequedad ocular. En lo que se refiere a sus acciones, el ïcido hialurïnico actïa en la adhesiïn, la propagaciïn y el movimiento de las cïlulas epiteliales, pero sus efectos de proliferaciïn de las cïlulas epiteliales son bajos. El ïcido hialurïnico tiene la desventaja de ser difïcil de usar como formulaciïn oftïlmica debido al aumento de la viscosidad a alta concentraciïn.

El pïptido PHSRN es un pentapïptido desvelado en la publicaciïn internacional WO98/22617 y en "The PHSRN sequence induces extracellular matrix invasion and accelerates wound healing in obese diabetic mice", The Journal of Clinical Investigation, 105 (11) , pïg. 1537-1545, 2000. En estas referencias bibliogrïficas de la tïcnica anterior, se indica que el pïptido PHSRN presenta efectos de cicatrizaciïn de heridas externas, asï como efectos supresores de la invasiïn y la proliferaciïn contra las cïlulas cancerosas. Sin embargo, no se conocen informes que se refieran al pïptido PHSRN en relaciïn con los campos oftalmolïgicos.

Por lo tanto, no se conocen composiciones satisfactorias para el tratamiento del trastorno de la cïrnea, y se desean enormemente mejores composiciones.

Como se ha mencionado anteriormente, la fibronectina es reconocida como clïnicamente eficaz en los campos oftalmolïgicos. Sin embargo, debido a problemas inherentes al producto sanguïneo (por ejemplo, problemas de saneamiento, la gran molestia de tener que extraer muestras de sangre autïloga de un paciente, la problemïtica de purificar la fibronectina del plasma, etc.) , el uso de la fibronectina no estï extendido. Ademïs, dado que el sitio activo de la fibronectina no se habïa aclarado adecuadamente, quedaba mucho por investigar y desarrollar para poder usar la fibronectina como un componente eficaz de un agente terapïutico para el trastorno de la cïrnea.

En Journal of Biomaterials Science vol.13, Nï 4, 2002, Aucoin L. et al., se describe la modificaciïn de superficies de polidimetilsiloxano (PDMS) mediante uniones covalentes de combinaciones de adhesiïn celular y pïptidos sinïrgicos obtenidos de laminina y fibronectina para facilitar la adhesiïn de las cïlulas epiteliales de la cïrnea a un sustrato de PDMS. Los pïptidos estudiados incluïan YIGSR y su pïptido sinïrgico PDSGR de laminina, y RGDS y PHSRN derivados de fibronectina. En dicho estudio, se pudo demostrar que la modificaciïn de la superficie con combinaciones apropiadas de pïptidos de adhesiïn celular y pïptidos sinïrgicos se traduce en mejores interacciones de la superficie celular.

Livan D. L. et al. describieron en Journal of Clinical Invetigation, vol. 105, Nï 11, junio de 2000 que la secuencia de PHSRN del dominio de uniïn celular de la fibronectina plasmïtica induce a los queratinocitos y fibroblastos humanos a invadir las matrices extracelulares libres de suero de manera natural de embriones de erizos de mar. Se ha demostrado el aumento significativo de la potencia del PHSRN acetilado y amidado (Ac-PHSRN-NH2) . El tratamiento con el mismo estimula la repitelializaciïn y contracciïn de las heridas dïrmicas en ratones diabïticos obesos con problemas de cicatrizaciïn. Ademïs, un solo tratamiento con Ac-PHSRN-NH2 estimula la migraciïn de los queratinocitos y los fibroblastos a las heridas, aumenta la fibroplasia y la vascularizaciïn en la matriz, y estimula la formaciïn de fibras prominentes.

Por otra parte, Ki-San Kim et al. han demostrado que el tratamiento de pacientes que sufren defectos epiteliales en la cïrnea mediante gotas oculares de homïlogos de fibronectina produjo una total repitelializaciïn (Korean J. Ophthalmol; 1992, pïg. 12-18) .

La presente invenciïn se ha realizado en vista de las circunstancias... [Seguir leyendo]

1. Uso del pïptido PHSRN o de una sal del mismo en la preparaciïn de una formulaciïn oftïlmica para la estimulaciïn de la cicatrizaciïn de las heridas producidas en el epitelio de la cïrnea. 5

2. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 1, en el que dicha herida estï causada por el trastorno de la cïrnea que es ïlcera corneal, erosiïn del epitelio de la cïrnea, queratitis o sequedad ocular.

3. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 1 o 2, en el que la formulaciïn estï en forma de gotas oculares o 10 pomada ocular.

4. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 3, en el que el PHSRN estï presente en un intervalo de concentraciones del 0, 00001 al 1 %.

5. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 3 o 4, en el que la formulaciïn de gotas oculares comprende ademïs al menos un miembro seleccionado del grupo que consiste en un agente tampïn, un agente de tonicidad y un estabilizante.

6. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 5, en el que el agente de tonicidad comprende ademïs cloruro de sodio o 20 cloruro de potasio.

7. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 5 o 6, en el que el agente tampïn comprende ademïs hidrïgenofosfato de sodio y/o dihidrïgenofosfato de sodio.

8. Uso de acuerdo con las reivindicaciones 3 o 4, en el que la formulaciïn de pomada ocular comprende ademïs una base de pomada ocular.

9. Uso de acuerdo con la reivindicaciïn 8, en el que la base de pomada ocular comprende ademïs vaselina blanca y/o parafina lïquida. 30

10. El pïptido PHSRN para su uso en la estimulaciïn de la cicatrizaciïn de heridas en el epitelio de la cïrnea.

11. El pïptido para su uso de acuerdo con la reivindicaciïn 10, en el que el PHSRN estï presente en un intervalo

de concentraciones del 0, 00001 al 1 %. 35

12. El pïptido para su uso de acuerdo con la reivindicaciïn 10, en el que dicha herida estï causada por el trastorno de la cïrnea que es ïlcera corneal, erosiïn del epitelio de la cïrnea, queratitis o sequedad ocular.