Reducción de células b mediante el uso de moléculas de unión específica a cd37 y de unión específica a cd20.

Una proteína de unión específica a CD37 humanizada para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B,

donde la proteína de unión específica a CD37 humanizada comprende:

(a) regiones estructurales de cadena ligera humana, una cadena ligera CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 61, una cadena ligera CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 64, y una cadena ligera CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; y

(b) regiones estructurales de cadena pesada humana, una cadena pesada CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 63, una cadena pesada CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65, y una cadena pesada CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67 ó 68

que se caracteriza porque la proteína de unión específica a CD37 humanizada debe usarse en combinación con una proteína de unión específica a CD20.

Reducción de células b mediante el uso de moléculas de unión específica a cd37 y de unión específica a cd20

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona de forma general el uso de moléculas de unión específica a CD37 en métodos para la reducción de células B en un individuo. En particular, la invención proporciona el uso de moléculas de unión específica a CD37 en combinación con moléculas de unión específica a CD20, en algunos casos en una combinación sinérgica, en métodos para la reducción de células B. La invención proporciona además materiales y su uso en métodos para el tratamiento de actividad aberrante de células B.

FUNDAMENTO DE LA INVENCIÓN

En su función habitual, el sistema inmunitario humano protege al cuerpo frente al daño producido por sustancias extrañas y patógenos. Un modo en el que sistema inmunitario protege al cuerpo es a través de la producción de células especializadas denominadas linfocitos B o células B. Las células B producen anticuerpos que se unen a una sustancia extraña o patógeno, y en algunos casos intervienen en su destrucción.

Sin embargo, en algunos casos el sistema inmunitario humano y específicamente los linfocitos B del sistema inmunitario humano actúan de manera desviada dando como resultado enfermedades. Existen numerosos cánceres que implican una proliferación incontrolada de células B. También existen numerosas enfermedades autoinmunes que implican la producción de células B de anticuerpos que, en lugar de unirse a sustancias extrañas y patógenos, se unen a partes del cuerpo. A veces dichos anticuerpos se denominan autoanticuerpos. Adicionalmente, existen numerosas enfermedades autoinmunes e inflamatorias que implican células B en su patología, por ejemplo, a través de una presentación inapropiada de antígeno de célula B a células T, o a través de otros mecanismos que implican células B. Por ejemplo, los ratones propensos a autoinmunidad deficientes en células B no desarrollan enfermedad renal autoinmune, vasculitis o autoanticuerpos. Véase Shlomchik et al., J Exp. Med., 180: 1295-306 (1994) . De forma interesante, estos mismos ratones propensos a autoinmunidad que poseen células B pero son deficientes en producción de inmunoglobulina, sí desarrollan enfermedades autoinmunes cuando son inducidos experimentalmente, tal como describen Chan et al., J Exp. Med., 189: 1639-48 (1999) , lo que indica que las células B desempeñan una función integral en el desarrollo de la enfermedad autoinmune.

Las células B pueden ser identificadas por las moléculas de su superficie celular. La CD20 fue la primera molécula superficial específica de linaje de células B humanas identificada por un anticuerpo monoclonal. Se trata de una fosfoproteína de transmembrana de célula B no glicosilada, hidrófoba, de 35 kDA, que tiene ambos extremos, el

amino y el carboxi, situados en el interior de la célula. Véase, Einfeld et al., EMBO J., 7: 711-17 (1998) . La CD20 es expresada por todas las células B maduras normales, pero no es expresada por células B precursoras o células plasmáticas. Los ligandos naturales de la CD20 no han sido identificados, y la función de la CD20 en la biología de las células B sigue sin entenderse completamente.

Otra molécula superficial específica de linaje de células B es la CD37. La CD37 es una proteína de 40-52 kDa fuertemente glicosilada que pertenece a la familia transmembrana de tetraspanina de antígenos de superficie celular. Atraviesa la membrana celular cuatro veces formando dos bucles extracelulares y exponiendo sus extremos amino y carboxi al citoplasma. La CD37 es altamente expresada en células B (slg+) productoras de anticuerpos normales, pero no es expresada en pre-células B o en células plasmáticas. La expresión de CD37 en células T, monocitos y granulocitos, activados y en reposo, es baja y no existe una expresión detectable de CD37 en células NK, plaquetas o eritrocitos. Véase, Belov et al., Cancer Res., 61 (11) : 4483-4489 (2001) ; Schwartz-Albiez et al., J. Immunol., 140 (3) : 905-914 (1988) ; y Link et al., J. Immunol., 137 (9) : 3013-3018 (1988) . Además de las células B normales, casi todas las malignidades con origen en células B son positivas para la expresión de CD37, incluyendo CLL, NHL y leucemia de células pilosas [Moore et al., Journal of Pathology, 152: 13-21 (1987) ; Merson y Brochier, Immunology Letters, 19: 269-272 (1988) ; y Faure et al., American Journal of Dermatopathology, 12 (3) : 122-133

(1990) ]. LA CD37 participa en la regulación de la función de las células B, ya que se observó que ratones que carecían de CD37 presentaban niveles bajos de IgG1 en suero y estaban afectados en su respuesta humoral a antígenos víricos y antígenos modelo. Parece actuar como una molécula co-estimulante no clásica o influyendo directamente en la presentación a antígeno a través de la formación de un complejo con moléculas MHC de clase II. Véase Knobeloch et al., Mol. Cell. Biol., 20 (15) : 5363-5369 (2000) . La CD37 también parece desempeñar una 50 función en la señalización de TCR. Véase Van Spriel et al., J. Immunol., 172: 2953-2961 (2004) .

La investigación y el desarrollo de fármacos se ha producido en base al concepto de que las moléculas de superficie celular específicas de linaje de células B, tales como CD37 y CD20, pueden a su vez constituir dianas para anticuerpos que se unirían a células B causantes de enfermedades autoinmunes o cancerosas que presenten CD37

o CD20 en sus superficies, y mediarían en su destrucción. Considerado como "inmunoterapia", se administró a un 55 paciente anticuerpos preparados (o basados en anticuerpos preparados) en un animal no humano que se unen a CD37 o CD20 para agotar células B causantes de enfermedad autoinmune o cancerosa.

Un anticuerpo de CD37 ha sido marcado con 131I y evaluado en ensayos clínicos para terapia de NHL. Véase Press et al., J. Clin. Oncol., 7 (3) : 1027-1038 (1989) ; Bernstein et al., Cancer Res. (Supl.) , 50: 1017-1021 (1990) ; Press et

al., Front. Radiat. Ther. Oncol., 24: 204-213 (1990) ; Press et al., Adv. Exp. Med. Biol., 303: 91-96 (1991) y Brown et al., Nucl. Med. Biol., 24: 657-663 (1997) . El anticuerpo, MB-1, es un anticuerpo monoclonal de IgG1 murino que carece de funciones efectoras Fc tales como la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpo (ADCC, del inglés "antibody-dependent cellular cytotoxicity") y el MB-1 no inhibió el crecimiento tumoral en un modelo de xenoinjerto in vivo a menos que hubiera sido marcado con un isótopo (Buchsbaum et al., Cancer Res., 52 (83) : 6476-6481 (1992) . Se observó una biodistribución favorable de 131I-MB-1 en pacientes de linfoma que presentaban cargas tumorales menores (< 1 kg) y la terapia en dichos pacientes produjo remisiones totales de tumor que duraron entre 4 y 11 meses (Press et al., 1989 y Bernstein et al. 1990) .

Adicionalmente, se ha evaluado en ratones un inmunoconjugado compuesto por el fármaco adriamicina ligado a G28-1, otro anticuerpo anti-CD37, y ha demostrado efectos por medio de la internalización y la liberación intracelular del fármaco. Véase Braslawsky et al., Cancer Immunol. Immunother., 33 (6) : 367-374 (1991) .

Varios grupos han investigado el uso de anticuerpo anti-CD20 para tratar enfermedades relacionadas con células B. Un tratamiento consiste en anticuerpos anti-CD20 preparados en la forma de radionucleidos para tratar linfoma de células B (p.ej., anticuerpo anti-CD20 marcado con 131I) , así como una forma marcada con 89Sr para paliar el dolor óseo provocado por metástasis de cáncer de próstata y de mama [Endo, Gan To Kagaku Ryoho, 26: 744-748 (1999) ].

Otro grupo desarrolló un anticuerpo monoclonal quimérico específico para CD20, que consistía en regiones variables de cadena pesada y ligera de origen murino fusionadas a regiones constantes de cadena pesada de IgG1 humana y de cadena ligera kappa humana. Se publicó que el anticuerpo quimérico retenía la capacidad de unirse a CD20 y la capacidad de mediar en ADCC y fijar complemento. Véase, Liu et al., J. Immunol. 139: 3521-26 (1987) . Otro anticuerpo anti-CD20 quimérico adicional fue preparado a partir de hibridoma C2B8 IDEC y se denominó rituximab. Se piensa que el mecanismo de actividad antitumoral del rituximab es una combinación de varias actividades, que incluyen ADCC, fijación de complemento y activación de señales que promuevan la apoptosis en células B malignas, aunque el gran tamaño del anticuerpo quimérico impide una difusión óptima de la molécula en tejidos linfoides que contengan células B malignas, limitando con ello su actividad antitumoral. La ADCC es una reacción mediada por células en la que las células citotóxicas no específicas... [Seguir leyendo]

1. Una proteína de unión específica a CD37 humanizada para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B, donde la proteína de unión específica a CD37 humanizada comprende:

(a) regiones estructurales de cadena ligera humana, una cadena ligera CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 61, una cadena ligera CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 64, y una cadena ligera CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; y

(b) regiones estructurales de cadena pesada humana, una cadena pesada CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 63, una cadena pesada CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65, y una cadena pesada CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67 ó 68

que se caracteriza porque la proteína de unión específica a CD37 humanizada debe usarse en combinación con una proteína de unión específica a CD20.

2. Una proteína de unión específica a CD20 para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B que se caracteriza porque la proteína de unión específica a CD20 debe usarse en combinación con una proteína de unión específica a CD37 humanizada para uso en el tratamiento de un cáncer o enfermedad autoinmune de células B, donde la proteína de unión específica a CD37 humanizada comprende:

(a) regiones estructurales de cadena ligera humana, una cadena ligera CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 61, una cadena ligera CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 64, y una cadena ligera CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; y

(b) regiones estructurales de cadena pesada humana, una cadena pesada CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 63, una cadena pesada CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65, y una cadena pesada CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67 ó 68.

3. Un artículo de fabricación que comprende una proteína de unión específica a CD20 y una proteína de unión específica a CD37 humanizada para uso en el tratamiento de un cáncer o enfermedad autoinmune de células B, donde la proteína de unión específica a CD37 humanizada comprende:

(a) regiones estructurales de cadena ligera humana, una cadena ligera CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 61, una cadena ligera CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 64, y una cadena ligera CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 66; y

(b) regiones estructurales de cadena pesada humana, una cadena pesada CDR1 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 63, una cadena pesada CDR2 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 65, y una cadena pesada CDR3 que comprende una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 67 ó 68.

4. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, donde las cadenas ligeras CDR1, CDR2 y CDR3 de la proteína de unión específica a CD37 humanizada de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS: 61, 64 y 66, respectivamente; y

donde las CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada consisten en las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS: 63, 65 y 67, respectivamente.

5. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, donde las cadenas ligeras CDR1, CDR2 y CDR3 de la proteína de unión específica a CD37 humanizada de las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS: 61, 64 y 66, respectivamente; y

donde las CDR1, CDR2 y CDR3 de cadena pesada consisten en las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NOS: 63, 65 y 68, respectivamente.

6. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende:

una región estructural de cadena ligera humana seleccionada de las SEQ ID NOS.

17. 172, 175, 179, 182, 184188, 191.

19. 198, 203 .

20. 210; o una región estructural de cadena pesada humana seleccionada de las SEQ ID NOS: 140, 141.

14. 147, 150, 151.

15. 163, 168 y 169.

7. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende:

una primera región estructural de cadena ligera (FR1) seleccionada de las SEQ ID NOS.

17. 172, 175 y 177181; una FR2 humana de la región estructural de cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS: 182.

18. 188 y 191; una FR3 humana de la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS.

19. 198, 203 y 205; y una FR4 humana de la cadena ligera seleccionada de las SEQ ID NOS.

20. 210; o una primera región estructural (FR1) de cadena pesada humana seleccionada de las SEQ ID NOS: 140, 141 .

14. 146; una FR2 humana de la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NOS: 147, 150 y 151; una FR3 humana de la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NOS.

15. 160; y una FR4 humana de la cadena pesada seleccionada de las SEQ ID NOS.

16. 163, 168 y 169.

8. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes,

donde la proteína de unión comprende un polipéptido Fv de cadena sencilla (scFv) , un anticuerpo o un fragmento de unión al mismo, o una proteína de fusión de inmunoglobulina que comprende, desde el extremo amino al carboxi, (i) un dominio de unión que tenga regiones variables de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina separadas por un péptido de enlace, (ii) un polipéptido de región de bisagra de inmunoglobulina que tenga cero, uno o dos residuos de cisteína, y (iii) dominios CH2 y CH3 de inmunoglobulina.

9. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de la reivindicación 8, donde el polipéptido de la región de bisagra de inmunoglobulina puede ser un polipéptido de región de bisagra de IgG1, IgGA o IgE o una IgG1 mutante.

10. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones 8 ó 9, donde:

la proteína de unión es una proteína de fusión de inmunoglobulina de la reivindicación 8, que comprende una región variable de cadena ligera y una región variable de cadena pesada;

la región variable de cadena ligera está unida a la región variable de cadena pesada mediante un péptido de unión que comprende (Gly4SER) n, donde n es 1, 2, 3, 4, 5 ó 6; y

las regiones variables de cadena ligera y pesada unidas están conectadas a un dominio efector IgG1 a través de una bisagra compuesta por una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 115, 116, 118, 120, 122, 124, 126 ó 127.

11. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la proteína de unión específica a CD37 humanizada comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en las SEQ ID NO: 48 y 52.

12. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la proteína de unión específica a CD20 es un anticuerpo monoclonal específico de CD20.

13. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el anticuerpo monoclonal específico de CD20 es Rituximab.

14. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, donde la proteína de unión específica a CD20 es una proteína de fusión de inmunoglobulina que es específica de CD20 y comprende, desde el extremo amino al carboxi, (i) un dominio de unión que tiene regiones variables de cadena ligera y pesada de inmunoglobulina separadas por un péptido de enlace, (ii) un polipéptido de región de bisagra de inmunoglobulina que tiene cero, uno o dos residuos de cisteína, y

(iii) dominio CH2 y CH3 de inmunoglobulina.

15. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de la reivindicación

14, donde el polipéptido de la región de bisagra de inmunoglobulina puede ser un polipéptido de región de bisagra de IgG1, IgGA o IgE o una IgG1 mutante.

16. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica a CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el método comprende además el uso de un agente quimioterapéutico, un agente radioterapéutico, una citocina, una quimiocina o un factor de crecimiento.

17. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica de CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el cáncer de células B es enfermedad de Hodgkin, linfoma no de Hodgkin, linfomas del sistema nervioso central, leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, leucemia de células pilosas, leucemia mioblástica crónica, mieloma múltiple, linfoma linfocítico pequeño, leucemia prolinfocítica de células B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de zona marginal esplénica, mieloma de célula plasmática, plasmacitoma solitario de hueso, plasmacitoma extraóseo, linfoma de células B de zona marginal extranodal de tejido linfoide asociado a mucosa, linfoma de células B de zona marginal nodal, linfoma folicular, linfoma de células manta, linfoma de células B grandes difusas, linfoma de células B grandes mediastinales (tímicas) , linfoma de células B grande intravascular, linfoma de efusión primaria, linfoma/leucemia de Burkitt, proliferaciones de células B de potencial maligno incierto, granulomatosis linfomatoide o trastorno linfoproliferativo post-trasplante.

18. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica de CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, donde la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, esclerosis múltiple, lupus sistémico eritematoso, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, enfermedad de Grave, diabetes mellitus de tipo I, soriasis, púrpura trombocitopénica inmune, pénfigo, miopatía inflamatoria idiopática, miastenia gravis o macroglobinemia de Waldenstorm.

19. La proteína de unión específica a CD37 humanizada o la proteína de unión específica de CD20 o el artículo de fabricación para uso en el tratamiento de un cáncer o una enfermedad autoinmune de células B de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde la proteína de unión específica a CD37 y la proteína de unión específica a CD20 se administran secuencialmente en un periodo de aproximadamente 24 horas o se administran simultáneamente.