Procedimiento de purificación de ácido quenodesoxicólico.

Un procedimiento de purificación del compuesto de Fórmula I, que comprende las etapas de:

1) pre-tratamiento de la bilis porcina, disolviendo el sólido de bilis porcina derivado de bilis porcina, que contiene la mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I-IV,**Fórmula**

y que tiene el 5-35% en peso de contenido de ácido quenodesoxicólico, en sal que contiene disolvente orgánico, en el que el disolvente orgánico es acetato de etilo o acetona, y la sal es al menos una seleccionada de entre el grupo que consiste en cloruro de sodio, sulfato de magnesio anhidro y sulfato de sodio anhidro;

2) esterificación de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV añadiendo alcohol C1-4 al residuo obtenido en la etapa (1);

3) acetilación de la mezcla de ésteres de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV añadiendo ácido acético anhidro y una base débil seleccionada de entre acetato de sodio anhidro o piridina al residuo obtenido en la etapa (2);

4) añadir un disolvente orgánico no polar seleccionado de entre hexano, heptano, octano o isooctano al residuo obtenido en la etapa (3) y agitar bajo reflujo hasta que se disuelva todo el residuo y, posteriormente, cristalizar y 5 eliminar los ésteres acetilados de los ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV y una parte del éster acetilado o ácido quenodesoxicólico de Formula II;

5) añadir metanol al residuo obtenido en la etapa (4) y cristalizar el compuesto de Fórmula V**Fórmula**

durante 2~3 horas en el intervalo de temperaturas 0~15ºC; y 15 6) desprotección del compuesto de Fórmula V obtenido en la etapa (5) añadiendo agua y base seleccionada de entre hidróxido de sodio o hidróxido de potasio al compuesto de Fórmula V, y cristalización del compuesto de Fórmula I en presencia de agua añadiendo un ácido seleccionado de entre ácido clorhídrico y ácido sulfúrico.

Procedimiento de purificación de ácido quenodesoxicólico Campo técnico La presente invención se refiere a un procedimiento de purificación de ácido quenodesoxicólico (ácido 3α, 7α-dihidroxi-5βcólico) . En particular, la presente invención se refiere a un procedimiento de purificación de ácido quenodesoxicólico a partir de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de bajo grado contenida en la bilis porcina sólida, con alto rendimiento y pureza.

Antecedentes de la técnica En general, el ácido quenodesoxicólico está contenido en la bilis de vaca, cerdo, oso o aves de corral, tales como pollo o ganso, así como en la bilis humana. El ácido quenodesoxicólico se usa como material de partida para la preparación de ácido ursodesoxicólico que es eficaz para aliviar enfermedades del sistema biliar, hiperlipidemia, colelitiasis y enfermedades crónicas del hígado, y un procedimiento típico de preparación de ácido ursodesoxicólico conocido en la técnica es tal como se indica a continuación.

Un procedimiento típico de preparación de ácido quenodesoxicólico comprende las etapas de: esterificar ácido cólico (ácido 3α, 7α, 12α-trihidroxi cólico) con metilo; proteger el grupo hidroxilo de la posición 3α y 7α acetilándolo con ácido acético anhidro; oxidar el grupo hidroxilo de la posición 12α a un grupo carbonilo usando ácido crómico y, a continuación, eliminar el grupo carbonilo mediante una reacción de reducción de Wolff-Kirchner; hidrolizar y desproteger el producto obtenido para dar ácido quenodesoxicólico. El procedimiento anterior requiere que la reacción se mantenga a una alta temperatura de más de 200º C y el suministro de materia prima puede ser interrumpido por la encefalopatía espongiforme bovina, etc.

La bilis de aves de corral contiene ácido quenodesoxicólico, ácido litocólico y una pequeña cantidad de ácido cólico. De esta manera, el procedimiento de separación de ácido quenodesoxicólico a partir de aves de corral es bien conocido en la técnica, pero no es económicamente razonable debido a la reducción de la oferta de la materia prima y el bajo rendimiento [véase Windhaus et al, I Physiol. Chem., 140, 177~185 (1924) ].

La patente US Nº 4.186.143 divulga un procedimiento de separación y purificación de ácido quenodesoxicólico a partir de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos derivada de bilis porcina natural. Este procedimiento comprende las etapas principales de: pre-tratamiento para eliminar el ácido α-hidroxi-6-oxo-5β-cólico mediante saponificación de la bilis; esterificación de ácidos biliares; acetilación de los ésteres de ácidos biliares; eliminación del producto intermedio usando un disolvente orgánico no polar; cristalización del éster acetilado de Fórmula I; desprotección; y producción del compuesto de Fórmula I usando la cristalización en un disolvente orgánico. Sin embargo, esta patente no describe el contenido de HPLC para el éster acetilado de Fórmula I, y la pureza del producto final es muy baja, ya que la energía de rotación específica es [α]D25 +13, 8º (c=1, CHCl3) , y el punto de fusión es de 119~121º C [STD: [α]D25 15, 2º (c = 1, CHCl3) , punto de fusión 127~129º C]. Además, la cristalización para purificar el producto final requiere mucho tiempo (es decir, 16-48 horas) , y todo el procedimiento es complejo, tal como ocho (8) etapas. De esta manera, cuando se purifica el compuesto de Fórmula I usando el procedimiento anterior, el rendimiento del producto final es bajo, y el tiempo de reacción es de hasta 12 días. Por lo tanto, el procedimiento no es económicamente razonable.

En particular, cuando se purifica el éster acetilado de Fórmula I a partir de un sólido de bilis porcina que tiene el 5-35% en peso de contenido de ácido quenodesoxicólico usado en la presente invención usando el procedimiento anterior, a pesar de dos tiempos de recristalización en disolvente etanol, el contenido del producto final es tan bajo como el 80%.

Para superar los problemas anteriores, el objeto de la presente invención es proporcionar un nuevo procedimiento de purificación del compuesto de Fórmula I en alta pureza y rendimiento, con el cual se reduce el tiempo requerido para todo el procedimiento.

El documento EP 386 538 se refiere a un procedimiento de purificación de ácido ursodesoxicólico (ácido 3-α-7-βdihidroxicólico) , y la etapa de desprotección se lleva a cabo con éster de metilo de 3-α-7-β-dihidrocolánico.

El documento US 3 919 266 divulga la desprotección del éster de metilo de ácido 3-α-7-α-dihidroxi-5-β-colánico mediante la adición de KOH metanólico, acidificación con HCl acuoso y, a continuación, extracción de ácido 3-α-7-α-dihidroxi-5-βcolánico con éter etílico y cristalización del producto a partir de acetato de etilo caliente.

Divulgación de la invención La presente invención proporciona un procedimiento de purificación del compuesto de Fórmula I, que comprende las etapas de 1) pre-tratamiento de la bilis porcina; disolviendo un sólido de bilis porcina derivado de bilis porcina, que contiene la mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I-IV,

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y que tiene el 5-35% en peso de contenido de ácido quenodesoxicólico, en sal que contiene disolvente orgánico, en el que el disolvente orgánico es acetato de etilo o acetona, y la sal es al menos una seleccionada de entre el grupo que consiste en cloruro de sodio, sulfato de magnesio anhidro y sulfato de sodio anhidro; 2) esterificación de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV añadiendo alcohol C1-4 al residuo obtenido en la etapa (1) ; 3) acetilación de la mezcla de ésteres de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV añadiendo ácido acético anhidro y una base débil seleccionada de entre acetato de sodio anhidro o piridina al residuo obtenido en la etapa (2) ; 4) adición de un disolvente orgánico no polar seleccionado de entre hexano, heptano, octano o isooctano al residuo obtenido en la etapa (3) y agitación bajo reflujo hasta que se disuelva todo el residuo y, posteriormente, cristalización u eliminación de los ésteres acetilados de los ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV y una parte de éster acetilado o ácido quenodesoxicólico de Formula II, 5) adición de metanol al residuo obtenido en la etapa (4) y cristalización del compuesto de Fórmula V

** (Ver fórmula) **

durante 2~3 horas en el intervalo de temperaturas 0~15º C; y 6) desprotección del compuesto de Fórmula V obtenido en la etapa (5) añadiendo agua y base seleccionada de entre hidróxido de sodio o hidróxido de potasio al compuesto de Fórmula V, y cristalización del compuesto de Fórmula I en presencia de agua añadiendo ácido seleccionado de entre ácido clorhídrico y ácido sulfúrico.

Descripción detallada de la invención En la presente memoria descriptiva, la frase "sólido de bilis porcina" representa un sólido derivado de bilis porcina, y contiene la mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I~IV.

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en las que el compuesto de Fórmula I representa ácido quenodesoxicólico (ácido 3α, 7α-dihidroxi-5β-cólico, CDCA) ; el compuesto de Fórmula II representa ácido hiodesoxicólico (ácido 3α, 6α -dihidroxi-5β-cólico, HDCA) ; el compuesto de Fórmula I representa ácido hiocólico (ácido 3α, 6α, 7α-trihidroxi-5β-cólico, HCA) ; y el compuesto de Fórmula IV representa ácido (ceto) 3α-hidroxi-6-oxo-5β-cólico.

A continuación, se ejemplificará en detalle cada etapa de purificación del ácido quenodesoxicólico según la presente invención.

Etapa 1: Pre-tratamiento de sólido de bilis porcina Para usar un sólido de bilis porcina que tiene el 5-35% en peso de contenido de ácido quenodesoxicólico en la etapa de purificación, todo el sólido de bilis porcina se agita y se disuelve en un disolvente orgánico con reflujo. A continuación, la mezcla se enfría a temperatura ambiente, y se agita adicionalmente durante 1-2 horas. A continuación, los materiales insolubles se eliminan de la mezcla usando papel de filtro, preferentemente papel de filtro y tierra de diatomeas. El

disolvente orgánico se elimina bajo presión reducida para obtener residuos (CDCA, HDCA, HCA y ceto) , que se usan en la etapa siguiente. La sal usada en la presente etapa puede ser seleccionada opcionalmente siempre que no afecte a los compuestos en el reactivo. Preferentemente, la sal es al menos una seleccionada de entre el grupo que consiste en cloruro de sodio, sulfato de magnesio anhidro (MgSO4) y sulfato de sodio anhidro, más preferentemente cloruro de sodio. La cantidad de sal... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de purificación del compuesto de Fórmula I, que comprende las etapas de:

1) pre-tratamiento de la bilis porcina, disolviendo el sólido de bilis porcina derivado de bilis porcina, que contiene la mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I-IV,

** (Ver fórmula) **

y que tiene el 5-35% en peso de contenido de ácido quenodesoxicólico, en sal que contiene disolvente orgánico, en el que el disolvente orgánico es acetato de etilo o acetona, y la sal es al menos una seleccionada de entre el grupo que consiste en cloruro de sodio, sulfato de magnesio anhidro y sulfato de sodio anhidro;

2) esterificación de una mezcla de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV añadiendo alcohol C1-4 al residuo obtenido en la etapa (1) ;

3) acetilación de la mezcla de ésteres de ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV añadiendo ácido acético 9

anhidro y una base débil seleccionada de entre acetato de sodio anhidro o piridina al residuo obtenido en la etapa (2) ;

4) añadir un disolvente orgánico no polar seleccionado de entre hexano, heptano, octano o isooctano al residuo obtenido en la etapa (3) y agitar bajo reflujo hasta que se disuelva todo el residuo y, posteriormente, cristalizar y eliminar los ésteres acetilados de los ácidos quenodesoxicólicos de Fórmulas I a IV y una parte del éster acetilado o ácido quenodesoxicólico de Formula II;

5) añadir metanol al residuo obtenido en la etapa (4) y cristalizar el compuesto de Fórmula V

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durante 2~3 horas en el intervalo de temperaturas 0~15º C; y 6) desprotección del compuesto de Fórmula V obtenido en la etapa (5) añadiendo agua y base seleccionada de entre hidróxido de sodio o hidróxido de potasio al compuesto de Fórmula V, y cristalización del compuesto de Fórmula I en presencia de agua añadiendo un ácido seleccionado de entre ácido clorhídrico y ácido sulfúrico.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la cantidad de sal es del 5-10% en peso, en base al peso total de disolvente orgánico.

3. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la pureza del compuesto de Fórmula V obtenido en la etapa (5) es del 98, 5% o superior.

4. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la etapa de cristalización se lleva a cabo en el intervalo de temperaturas de 0-5º C.

5. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la cantidad de metanol usado en la etapa (5) es 0, 5~3 veces la 25 cantidad de residuo obtenida en la etapa (4) .

6. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el pH de la desprotección en la etapa (6) es 4 o menor.

7. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la cristalización en presencia de agua en la etapa (6) se lleva a cabo en el intervalo de temperaturas de 35~45º C.