Producción de tiacumicina.

Un procedimiento de producción de tiacumicina B que comprende:

cultivar un microorganismo en un medio nutritivo para acumular tiacumicina B en el medio nutritivo; y

aislar la tiacumicina B del medio nutritivo;

en el que el medio nutritivo comprende al menos una resina adsorbente que puede adsorber tiacumicina B.

Producción de tiacumicina ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las tiacumicinas son una familia de compuestos estructuralmente relacionados que contienen el anillo de macrólido de 18 miembros mostrado a continuación.

Actualmente, se han identificado varias tiacumicinas distintas y seis de estas (tiacumicina A-F) se definen por su patrón particular de sustituyentes R1, R2 y R3 (patente de EE.UU. n° 4.918.174; J. Antibiotics, 1987, 575-588).

Las lipiarmicinas son una familia de productos naturales estrechamente relacionados con las tiacumicinas. Dos miembros de la familia de las lipiarmicinas (A3 y B3) son idénticos a las tiacumicinas B y C, respectivamente (J. Antibiotics, 1988, 38-315; J. Chem. Soc. Perkin Trans I, 1987, 1353-1359).

Las tiacumicinas y las lipiarmicinas se han caracterizado por numerosos procedimientos físicos. Las estructuras químicas informadas de estos compuestos se basan en espectroscopia (UV-vis, IR y RMN 1H y 13C), espectrometría de masas y análisis elemental (véanse, por ejemplo: J. Antibiotics, 1987, 575-588; J. Antibiotics, 1983, 1312-1322).

Las tiacumicinas se producen por bacterias, que incluye Dactylosporangium aurantiacum subespecie hamdenensis, que puede obtenerse de ARS Patent Collection of the Northern Regional Research Center, United States Department of Agriculture, 1815 North University Street, Peoria, IL 6164, número de acceso NRRL 1885. Las características de la cepa AB 718C-41 se facilitan en J. Antibiotics, 1987, 567-574 y la patente de EE.UU. n°

4.918.174.

Las lipiarmicinas se producen por bacterias que incluye Actinoplanes deccanensis (patente de EE.UU. n° 3.978.211). Los estudios taxonómicos de la cepa tipo A/1655, que se ha depositado en la ATCC bajo el número 21983, se tratan en J. Antibiotics, 1975,247-25.

Las tiacumicinas, específicamente la tiacumicina B, muestran actividad contra una variedad de patógenos bacterianos, y en particular contra Clostridium difficile, una bacteria Gram-positiva (Antimicrob. Agents Chemother. 1991, 118-1111). Clostridium difficile es una bacteria formadora de esporas anaerobia que produce una infección del intestino. La diarrea es el síntoma más común, pero también pueden producirse dolor abdominal y fiebre. Clostridium difficile es un agente causal importante de la colitis (inflamación del colon) y la diarrea que pueden producirse tras la ingestión de antibióticos. Esta bacteria se adquiere principalmente en hospitales e instituciones de cuidado de enfermos crónicos. Debido a que la tiacumicina B muestra actividad prometedora contra C. difficile, se espera que sea útil en el tratamiento de infecciones bacterianas, especialmente aquellas del tubo gastrointestinal, en mamíferos. Ejemplos de tales tratamientos incluyen, pero no se limitan a, tratamiento de colitis y tratamiento de síndrome del intestino irritable. Las tiacumicinas también pueden usarse para el tratamiento de cánceres gastrointestinales.

Se usan procedimientos de fermentación para obtener antibióticos, que incluyen tiacumicinas. Los antibióticos pueden producirse cultivando un microorganismo en un medio que contiene fuentes fácilmente asimiladas de carbono, nitrógeno y sales inorgánicas bajo condiciones de fermentación aerobia sumergida, hasta que se produce una cantidad sustancial de actividad de antibiótico como se deduce de los análisis en el procedimiento. Debido al aumento de la demanda mundial de antibióticos, hay una necesidad continua de procedimientos mejorados para producir antibióticos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La Figura 1 muestra un cromatograma de HPLC de productos de fermentación en bruto producidos según el Ejemplo 1; la tiacumicina B tiene un tiempo de retención de aproximadamente 12,6 min.

La Figura 2 muestra un cromatograma de HPLC de productos de fermentación producidos según el Ejemplo 2; la tiacumicina B tiene un tiempo de retención de aproximadamente 11,8 min.

La Figura 3 muestra un cromatograma de HPLC de tiacumicina B purificada (por HPLC) producida por fermentación según el Ejemplo 2; la tiacumicina B tiene un tiempo de retención de aproximadamente 12, min. La Figura 4 muestra un cromatograma de HPLC de tiacumicina B producida por fermentación y purificada por cromatografía de líquidos de media presión de fase inversa, seguido de trituración según el Ejemplo 3; la tiacumicina B tiene un tiempo de retención de aproximadamente 1,1 min.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La materia de la invención se define en las reivindicaciones adjuntas.

Descripción detallada de la invención

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente es entendido por un experto habitual en la materia a la que pertenece la presente invención. A continuación se describen procedimientos y materiales a modo de ejemplo.

Las composiciones que contienen la tiacumicina B producida usando el procedimiento de la invención pueden administrarse para tratamientos profilácticos y/o terapéuticos. En aplicaciones terapéuticas, las composiciones se administran a un paciente que ya padece una infección, como se ha descrito anteriormente, en una cantidad suficiente para curar o al menos detener parcialmente los síntomas de la infección. Una cantidad adecuada para realizar esto se define como "cantidad o dosis terapéuticamente eficaz". Las cantidades eficaces para este uso dependerán de la gravedad y evolución de la infección, terapia previa, el estado de salud del paciente y la respuesta a los fármacos, y el criterio del médico práctico. En aplicaciones profilácticas, las composiciones que contienen la tiacumicina B producida mediante el procedimiento de la invención se administran a un paciente susceptible a o de otro modo en riesgo de una infección particular. Se define que una cantidad tal es una "cantidad o dosis profilácticamente eficaz". En este uso, las cantidades precisas dependen de nuevo del estado de salud del paciente, peso y similares.

Una vez se produce la mejora de las afecciones del paciente, se administra una dosis de mantenimiento si fuera necesario. Posteriormente, la dosificación o la frecuencia de administración, o ambas, puede reducirse, en función de los síntomas, a un nivel al que la afección mejorada se retiene. Cuando los síntomas se han aliviado al nivel deseado, puede cesarse el tratamiento. Sin embargo, los pacientes pueden requerir tratamiento intermitente a largo plazo tras cualquier reaparición de los síntomas de la enfermedad.

En general, una dosis eficaz adecuada de la tiacumicina B producida mediante el procedimiento de la presente invención estará en el intervalo de ,1 a 1 miligramos (mg) por receptor por día, preferentemente en el intervalo de 1 a 5 mg por día. La dosificación deseada se presenta preferentemente en una, dos, tres, cuatro o más subdosis administradas a intervalos apropiados a lo largo del día. Estas subdosis pueden administrarse como formas de dosificación unitaria, por ejemplo, que contienen 5 a 1 mg, preferentemente 1 a 2 mg de principio activo por forma de dosificación unitaria. Preferentemente, los compuestos de la invención se administrarán en cantidades de entre aproximadamente 1, mg/kg y 25 mg/kg de peso corporal del paciente, entre aproximadamente una a cuatro veces al día.

Una "composición farmacológica" se refiere a una mezcla de una o más de las tiacumicinas descritas en el presente documento, o sales fisiológicamente aceptables de las mismas, con otros componentes químicos, tales como vehículos y/o excipientes fisiológicamente aceptables. El fin de una composición farmacológica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo.

Las "sales farmacéuticamente aceptables" de los compuestos de la invención incluyen aquellas derivadas de ácidos y bases inorgánicos y orgánicos farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de ácidos adecuados incluyen ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, glucónico, láctico, salicílico, succínico, tolueno-p-sulfónico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico, naftaleno-2-sulfónico, bencenosulfónico, 1,2-etanosulfónico (edisilato), ácido galactosil-D-glucónico, y similares. Otros ácidos, tales como ácido oxálico, aunque en sí mismos no son farmacéuticamente aceptables, pueden emplearse en la preparación de sales útiles como productos intermedios en la obtención del compuesto producido mediante el procedimiento de la presente invención y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables. Sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metal alcalino (por ejemplo,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de producción de tiacumicina B que comprende:

cultivar un microorganismo en un medio nutritivo para acumular tiacumicina B en el medio nutritivo; y aislar la tiacumicina B del medio nutritivo;

en el que el medio nutritivo comprende al menos una resina adsorbente que puede adsorber tiacumicina B.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el medio nutritivo comprende ,5 %-15 % en peso de la al menos una resina adsorbente que puede adsorber la tiacumicina B.

3. El procedimiento según la reivindicación 1 que comprende cultivar un microorganismo que tiene la capacidad para producir tiacumicina B en un medio nutritivo que comprende al menos un adsorbente que puede adsorber tiacumicina B durante dicho cultivo, en el que dicho adsorbente está seleccionado del grupo que consiste en un gel de sílice de fase inversa, Amberlite® XAD16, XAD16HP, XAD2, XAD7HP, XAD118, XAD16, IRC5 y Duolite® XAD761 y acumular la tiacumicina B en el medio nutritivo.

4. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho microorganismo es Dactylosporangium aurantiacum NRRL 1885.

5. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicha tiacumicina B se aísla de dicho medio nutritivo usando técnicas seleccionadas del grupo que consiste en: tamizar y eliminar material no deseado eluyendo con al menos un disolvente o una mezcla de disolventes; extracción con al menos un disolvente o una mezcla de disolventes; cristalización; separación cromatográfica; cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC); MPLC; trituración; y extracción con salmuera saturada con al menos un disolvente o una mezcla de disolventes.

6. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho microorganismo se cultiva a una temperatura de aproximadamente 25 °C a 35 °C y a un pH de aproximadamente 6, a 8,.

7. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el medio nutritivo comprende una o más fuentes de carbono seleccionadas del grupo que consiste en glucosa, sacarosa, almidón, molasas, dextrinas, suero de la leche, glicerol, lípidos y harina de maíz.

8. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el medio nutritivo se alimenta con una fuente de carbono

adicional, según se necesite.

9. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el medio nutritivo comprende una o más fuentes de nitrógeno/orgánicas que pueden soportar el crecimiento de microorganismos seleccionadas del grupo que consiste en extracto bovino, sémola de soja, levadura completa, extracto de levadura, harina de soja, peptona, casaminoácido, polvo de pescado, extracto soluble de maíz, sales de amonio, caseína y aminoácidos.

1. El procedimiento según la reivindicación 9, en el que el medio nutritivo comprende polvo de pescado.

11. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que el medio nutritivo comprende una o más sales inorgánicas que pueden soportar el crecimiento de microorganismos seleccionadas del grupo que consiste en K2HPO4, MgS4-7H2 y CaCC>3.

12. El procedimiento según la reivindicación 3, en el que el gel de sílice de fase inversa está seleccionado del grupo que consiste en KP-C18, KP-C 18-WP y KP-C18HS.