Procedimientos para predecir la respuesta al tratamiento del cáncer de mama triple negativo.

Un procedimiento para predecir la respuesta de un tumor de mama triple negativo al tratamiento con un fármaco antineoplásico,

comprendiendo el procedimiento :

(a) lisar una célula tumoral obtenida del tumor de mama triple negativo para producir un extracto celular; (b) determinar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular; y

(c) comparar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular determinado en la etapa (b) con un nivel de expresión de VEGFR2 de referencia,

en el que la presencia de un nivel de expresión de VEGFR2 bajo en comparación con la referencia es un factor pronóstico de la respuesta al tratamiento con el fármaco antineoplásico, en el que el fármaco antineoplásico es una combinación de bevacizumab (Avastin®), carboplatino y paclitaxel.

Procedimientos para predecir la respuesta al tratamiento del cáncer de mama triple negativo Antecedentes de la invención

El proceso de transducción de señales de las células es responsable de diversas funciones biológicas, Incluidas la división y la muerte celular, el metabolismo, la activación de células ¡nmunitarias, la neurotransmlslón y la percepción sensorial, por mencionar algunas. En consecuencia, los desarreglos en la transducción de señales normal de las células pueden dar lugar a una serie de estados patológicos tales como diabetes, cardiopatlas, autoinmunidad y

cáncer.

Una ruta de transducción de señales bien caracterizada es la ruta de las MAP cinasas, que se encarga de transduclr la señal desde el factor de crecimiento epidérmico (EGF) hasta la estimulación de la proliferación celular en las células (véase la figura 1 de la publicación PCT N° W29/18637, cuya divulgación se incorpora en el presente documento por referencia en su totalidad para todos los fines). El EGF se une a una tiroslna clnasa unida a un receptor transmembranario, el receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), que se activa por la unión al EGF. La unión del EGF al EGFR activa la actividad tirosina cinasa del dominio citoplásmico del receptor. Una consecuencia de esta activación de la cinasa es la autofosforllaclón del EGFR en los residuos de tirosina. Los residuos de tirosina fosforilados del EGFR activado proporcionan un sitio de anclaje para la unión del dominio SH2 que contienen proteínas adaptadoras, tales como la GRB2. En su función como adaptador, la GRB2 se une además a un factor de intercambio de nucleótidos de guanina, SOS, por medio de un dominio SH3 de GRB2. La formación del complejo de EGFR-GRB2-SOS conduce a la activación por SOS de un factor de intercambio de nucleótidos de guanina que estimula la eliminación del GDP de Ras. Tras la salida del GDP, Ras se une a GTP y queda activada.

Después de la activación, Ras se une y activa la actividad proteína cinasa de la RAF cinasa, una proteína cinasa específica de serina y treonina. A continuación se produce la activación de una cascada de proteínas cinasas que da lugar a la proliferación celular. De forma esquemática, a continuación, la clnasa RAF fosforila y activa a MEK, otra serina/treonina cinasa. La MEK activada fosforila y activa la proteína clnasa activada por mitógenos (MAPK). Entre los objetivos de fosforilación adicional por MAPK se encuentra la clnasa S6 de la proteína ribosómica 4S (RSK). La fosforilación de RSK por MAPK da lugar a la activación de RSK, que a su vez fosforila la proteína ribosómica S6. Otro objetivo conocido de MAPK es el protoncogén c-Myc, un gen importante para la proliferación celular, que aparece mutado en diversos tipos de cáncer. La MAPK también fosforila y activa otra proteína clnasa, MNK, que a su vez fosforila el factor de transcripción CREB. De forma Indirecta, MAPK también regula la transcripción del gen Fos, que codifica otro factor de transcripción más Implicado en la proliferación celular. Al modificar los niveles y actividades de estos factores de transcripción, MAPK transduce la señal extracelular original desde el EGF hacia la transcripción modificada de genes que son importantes para el avance del ciclo celular.

Dado el papel esencial que desempeñan las rutas de transducción de señales en la proliferación celular, no es sorprendente que muchos cánceres se produzcan como consecuencia de mutaciones y otras modificaciones de los componentes de la transducción de señales que dan lugar a la activación anómala de las rutas de proliferación celular. Por ejemplo, se ha asociado la sobreexpresión o la hlperactividad del EGFR con una serie de cánceres, incluidos el glioblastoma multiforme, el cáncer de colon y el cáncer de pulmón. Esto ha Inspirado el desarrollo de tratamientos antineoplásicos contra el EGFR, Incluidos egefitinib y erlotinib para el cáncer de pulmón y cetuximab para el cáncer de colon.

El cetuximab es un ejemplo de inhibidor de anticuerpo monoclonal, que se une al dominio extracelular de unión a ligandos del EGFR, de modo que evita la unión de llgandos que activan la tirosina cinasa del EGFR. En contraste, gefitinib y erlotinib son moléculas pequeñas que Inhiben la tirosina cinasa del EGFR intracelular. En ausencia de actividad cinasa, el EGFR no se puede autofosforilar en los residuos de tirosina, lo que es un requisito previo para la unión de las proteínas adaptadoras posteriores, tales como GRB2. La interrupción de la cascada de señalización de las células que independen de esta ruta para proliferar, disminuye la migración y la proliferación de tumores.

Adicionalmente, en otros estudios se ha demostrado que aproximadamente el 7 % de los melanomas humanos y una fracción menor de otros tumores tienen una mutación puntual (V599E) en el gen Raf que da lugar a la activación persistente de la ruta de las MAPK (véase, p. ej., Davles et al., Nature, 417:949-954 (22)). Estos resultados apuntan a que las mutaciones en rutas de transducción de señales concretas pueden ser características de tipos de tumores concretos y que estas rutas de transducción de señales modificadas específicas pueden ser un objetivo prometedor para la intervención quimioterápica. En el artículo "Epidemial growth factor receptor and vascular endothelial growth factor receptor 2 are speclfic blomarkers in trlple-negative breast cáncer. Results from a controlled randomized trial with long-term follow-up", de Ryden L. et al. (BREAST CANCER RESEARCH AND TREATMENT, vol. 12, N° 2, 5 de febrero de 21 (5-2-21), páginas 491-498) se informa sobre un estudio de la prevalencla de biomarcadores candidatos de interés médico en tumores de pacientes con cáncer de mama triple negativo (CMTN), que incluyen los biomarcadores ER, PR, HER2, el factor de crecimiento epidérmico (EGFR), el factor de crecimiento endotelial vascular A (VEGF-A) y el receptor del factor de crecimiento de células endotellales vasculares 2 (VEGFR2). Ryden L. et al. han publicado el artículo "Vascular endothelial growth factor receptor 2 ¡s a significant

negative prognostic biomarker ¡n triple-negative breast cáncer: results from a controller) randomlsed trial of premenopausal breast cáncer" (CANCER RESEARCH, vol. 69, N° 2, supl. 1, 15 de enero de 29). En el articulo se Informa de que el VEGFR2 era un blomarcador pronóstico significativo en pacientes con CMTN. El análisis adicional de EGFR, VEGF-A y PDGFR (3 no añadió ninguna información de pronóstico para los pacientes con CMTN de este estudio.

Dado que los diferentes tratamientos contra el cáncer, en particular la quimioterapia contra el cáncer, pueden funcionar directa o Indirectamente ya sea por medio del bloqueo o bien de la activación de rutas celulares de transducclón de señales Implicadas en la proliferación o la muerte celular, respectivamente, la actividad de una ruta de transducclón de señales dada en una forma de cáncer en particular puede servir como un buen Indicador de la eficacia de diversos tratamientos contra el cáncer. En consecuencia, además de satisfacer otras necesidades, la presente Invención proporciona procedimientos para predecir y evaluar la eficacia de posibles tratamientos antlneopláslcos para un paciente Individual. Como tal, la presente invención proporciona procedimientos para ayudar al médico a seleccionar un tratamiento contra el cáncer adecuado a la dosis correcta y en el momento adecuado para cada paciente.

Breve sumarlo de la Invención

La Invención se refiere a un procedimiento para predecir la respuesta de un tumor de mama triple negativo frente al tratamiento con un fármaco antlneoplásico, comprendiendo el procedimiento:

(a) Usar una célula tumoral obtenida a partir del tumor de mama triple negativo para producir un extracto celular;

(b) determinar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular; y

(c) comparar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular determinado en la etapa (b) con un nivel de expresión de VEGFR2 de referencia,

en el que la presencia de un nivel de expresión de VEGFR2 bajo en comparación con la referencia es un factor pronóstico de la respuesta al tratamiento con el fármaco antineoplásico, en el que el fármaco antineoplásico es una combinación de bevacizumab (Avastin®), carboplatino y paclitaxel.

La etapa (b) puede comprender además determinar el nivel de expresión de c-KIT, HER1 y/o IGF-1R en el extracto celular.

En el procedimiento de la invención, la presencia de un nivel de expresión de c-KIT bajo, un nivel de expresión de HER1 alto y/o un nivel de expresión de IGF-1R bajo en el extracto celular en comparación con un nivel de expresión de c-KIT, HER1 o IGF-1R de... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para predecir la respuesta de un tumor de mama triple negativo al tratamiento con un fármaco antineoplásico, comprendiendo el procedimiento :

(a) Usar una célula tumoral obtenida del tumor de mama triple negativo para producir un extracto celular;

(b) determinar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular; y

(c) comparar el nivel de expresión de VEGFR2 en el extracto celular determinado en la etapa (b) con un nivel de expresión de VEGFR2 de referencia,

en el que la presencia de un nivel de expresión de VEGFR2 bajo en comparación con la referencia es un factor pronóstico de la respuesta al tratamiento con el fármaco antineoplásico, en el que el fármaco antineoplásico es una combinación de bevacizumab (Avastin®), carboplatino y paclitaxel.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la etapa (b) comprende además determinar el nivel de expresión de c-KIT, HER1 y/o IGF-1R en el extracto celular.

3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que la presencia de un nivel de expresión de c-KIT bajo, un nivel de expresión de HER1 alto y/o un nivel de expresión de IGF-1R bajo en el extracto celular en comparación con un nivel de expresión de c-KIT, FIER1 o IGF-1R de referencia es un factor pronóstico de la respuesta al tratamiento con el fármaco antineoplásico.

4. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el paclitaxel es paclitaxel unido a nanopartículas de albúmina (nab).

5. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el nivel de expresión de referencia se calcula con una curva de calibrado generada a partir de una línea celular cancerosa, generándose opcionalmente dicha curva de calibrado a partir de varias concentraciones de un extracto celular diluido en serie preparado a partir de la línea celular cancerosa, expresando dicha línea celular cancerosa opcionalmente VEGFR2, c-KIT, FIER1 y/o IGF-1R.

6. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el procedimiento comprende además determinar el grado de activación de VEGFR2, c-KIT, FIER1, IGF-1R y/o AKT en el extracto celular.

7. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el procedimiento comprende además determinar el nivel de expresión y/o el grado de activación de una o más moléculas de transducción de señal adicionales del extracto celular.

8. El procedimiento de la reivindicación 7, en el que las una o más moléculas de transducción de señal adicionales se seleccionan del grupo que consiste en HER2, p95HER2, HER3, HER4, PI3K, AKT, MEK, PTEN, SGK3, 4E-BP1, ERK2 (MAPK1), ERK1 (MAPK3), PDK1, P7S6K, GSK-3(3, Shc, c-MET, VEGFR1, VEGFR3, un dímero receptor y combinaciones de las mismas.

9. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que la célula tumoral es una célula tumoral en circulación o una célula obtenida por aspiración con aguja fina (AAF) a partir de un tumor de mama triple negativo.

1. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la célula tumoral se aísla a partir de una muestra, obteniéndose opcionalmente de un sujeto con cáncer de mama triple negativo metastásico, siendo dicha muestra opcionalmente sangre entera, suero, plasma o una muestra de tejido tumoral.

11. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 1, en el que la presencia de un nivel de expresión de VEGFR2 bajo es un factor pronóstico de una duración mayor de la supervivencia sin progresión (SSP).

12. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11, en el que la presencia de un nivel de expresión de c-KIT bajo y/o la presencia de un nivel de expresión de HER1 alto son factores pronósticos de una duración mayor de la SSP.

13. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 1, en el que la presencia de un nivel de expresión de VEGFR2 bajo en combinación con la presencia de un nivel de expresión de c-KIT bajo y/o un nivel de expresión de HER1 alto, es un factor pronóstico de una duración mayor de la SSP en comparación con el nivel de expresión de VEGFR2, c-KIT o HER1 por separado.

14. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que la célula tumoral se ha puesto en contacto con fármaco antineoplásico antes de la etapa (a) in vitro.

15. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, en el que el nivel de expresión de VEGFR2 se

determina mediante la detección de los niveles de proteína total de VEGFR2, o el nivel de expresión de VEGFR2 se

determina con un ensayo de detección dual de proximidad, siendo, opcionalmente, dicho ensayo de detección dual de proximidad un inmunoensayo colaborativo reactivo potenciado por enzimas (CEER).

16. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 15, en el que el nivel de expresión de c-KIT,

FIER1 y/o IGF-1R se determina mediante la detección de los niveles de proteína total de c-KIT, HER1 y/o IGF-1R, o

el nivel de expresión de c-KIT, FIER1 y/o IGF-1R se determina con un ensayo de detección dual de proximidad, siendo opcionalmente dicho ensayo de detección dual de proximidad un inmunoensayo colaborativo reactivo potenciado por enzimas (CEER).