Péptidos que provocan inmunidad celular T.

Un péptido caracterizado porque a) tiene al menos 8 aminoácidos de longitud y es un fragmento de una proteína mutante que se produce a partir de una mutación con desplazamiento del marco de lectura en un gen BAX de una célula cancerosa en el que dicha mutación con desplazamiento del marco de lectura se produce en la repetición G8 en el tercer exón que atraviesa los codones 38-41 del gen BAX no mutado;

y b) consiste en al menos un aminoácido de la parte mutante de una secuencia de proteínas codificada por dicho gen; y c) comprende 0-10 aminoácidos del extremo carboxilo de la parte normal de la secuencia de proteínas que precede al extremo amino de la secuencia mutante y opcionalmente se extiende al extremo carboxilo de la parte mutante de la proteína como se ha determinado por un nuevo codón de terminación generado por la mutación con desplazamiento del marco de lectura; y d) induce, tanto en su longitud completa como después del procesamiento por célula presentadora de antígeno, respuestas de linfocitos T, para su uso en un procedimiento para la vacunación de una persona predispuesta a, o afectada con, cáncer, que consiste en administrar al menos uno de dicho(s) péptido(s), una o más veces, en una cantidad suficiente para la inducción de inmunidad de linfocitos T específicos para las proteínas mutantes, o fragmentos de las mismas, codificadas por el gen BAX mutado por desplazamiento del marco de lectura.

Péptidos que provocan inmunidad celular T.

Sumario de la invención La presente invención se refiere a usos terapéuticos de péptidos que son fragmentos de productos de proteínas que se producen a partir de mutaciones con desplazamiento del marco de lectura en genes, cuyos péptidos provocan inmunidad celular T, y a vacunas contra el cáncer y composiciones para el tratamiento contra el cáncer que comprenden dichos péptidos.

La invención también se refiere a tales usos de secuencias de ADN que codifican al menos un péptido mutante por desplazamiento del marco de lectura, y vectores que comprenden al menos un sitio de inserción que contiene una secuencia de ADN que codifica al menos un péptido mutante por desplazamiento del marco de lectura.

Adicionalmente, la invención permite procedimientos para el tratamiento o profilaxis de cánceres asociados a mutaciones con desplazamiento del marco de lectura en genes por administración de al menos un péptido mutante por desplazamiento del marco de lectura o un vector de virus recombinante que comprende al menos un sitio de inserción que contiene una secuencia de ADN que codifica al menos un péptido mutante por desplazamiento del marco de lectura, o una secuencia de ADN aislada que comprende una secuencia de ADN que codifica al menos un péptido mutante por desplazamiento del marco de lectura.

La presente invención representa otro desarrollo del tratamiento contra el cáncer o profilaxis basado en el uso de péptidos para generar la activación y fortalecimiento de la actividad anticancerígena del brazo celular T del propio sistema inmunitario del cuerpo.

Antecedentes de la técnica Antígenos de tumor, estado:

Los antígenos de linfocitos T definidos se han caracterizado ahora en un amplio espectro de tipos de cáncer. Estos antígenos pueden dividirse en varios grupos principales, dependiendo de su expresión. Los dos grupos principales están constituidos por antígenos relacionados con la diferenciación del desarrollo (antígenos de tumor-testículo, antígenos oncofetales, etc., tales como antígenos MAGE y CEA) y antígenos de diferenciación específicos para tejido (tirosinasa, gp100, etc.) . El grupo que contiene los antígenos específicos para tumor verdaderos contiene proteínas que están alteradas debido a mutaciones en los genes que las codifican. En la mayoría de estas, las mutaciones son únicas y se han detectado en un único o en un pequeño número de tumores. Varios de estos antígenos parecen desempeñar una función en la oncogénesis.

Vacunas contra el cáncer, estado:

La atención en el desarrollo de las vacunas contra el cáncer ha sido en antígenos expresados en un alto grado dentro de una forma de cáncer (tal como melanoma) o en muchos tipos de cánceres. Un motivo para esto es el elevado reclutamiento de pacientes en protocolos clínicos. El campo está en rápido crecimiento, ilustrado por la tabla adjunta que enumera los protocolos de vacunas contra el cáncer actualmente registrados en la base de datos PDQ de NCI.

Prueba de genes de cáncer hereditario/cáncer:

Las formas heredadas de cáncer se producen con una cierta frecuencia en la población. Para varias de estas formas de cáncer, los defectos genéticos subyacentes se han mapeado. Esto también es el caso en cánceres por síndrome de Lynch, que constituyen un grupo importante de cáncer hereditario. En familias infligidas con este síndrome, los miembros de la familia heredan genes defectuosos que codifican enzimas reparadoras del emparejamiento incorrecto (MMR) de ADN. Portadores de tales defectos de MMR frecuentemente desarrollan cáncer colorrectal (HNPCC) y otras formas de cáncer (lista?) . Las mutaciones en enzimas MMR pueden detectarse usando el listado de genes de la misma forma que pueden detectarse otros genes relacionados con el cáncer.

La prueba génica de grupos de riesgo representa en este caso un dilema ético, ya que no existen formas aceptables de tratamiento profiláctico. Actualmente, la cirugía para extirpar el órgano en peligro de desarrollar cáncer ha sido la única opción de tratamiento. En estos pacientes, las vacunas contra el cáncer serán una forma (muy) interesante de profilaxis, dado que pueden desarrollarse vacunas eficaces.

La falta de reparación eficiente de ADN incorrectamente emparejado produce deleciones e inserciones en una cadena de ADN, y esto ocurre preferencialmente en estiramientos de ADN que contienen unidades repetidas (secuencias de repetición) . Hasta ahora, el objetivo han sido secuencias en forma de sitios de microsatélite no codificantes. De hecho, la inestabilidad de microsatélites es el distintivo de cánceres resultantes de defectos de MMR. Los presentes inventores han tomado otro enfoque, y se han concentrado en mutaciones con desplazamiento del marco de lectura que se producen en secuencias de ADN que codifican proteínas relacionadas con el proceso oncogénico. Tales mutaciones con desplazamiento del marco de lectura producen secuencias de aminoácidos completamente nuevas en la parte del extremo C de las proteínas, terminando prematuramente donde aparece un novedoso codón de terminación. Esto produce dos consecuencias importantes:

1) La proteína truncada resultante del desplazamiento del marco de lectura es generalmente no funcional, produciendo en la mayoría de los casos “inactivación” de una función celular importante. Las proteínas anómalas también pueden adquirir nuevas funciones tales como la capacidad para agregarse y formar placas. En ambos casos, el desplazamiento del marco de lectura produce enfermedad.

2) La nueva secuencia de aminoácidos del extremo C corta resultante del desplazamiento en el marco de lectura (la “secuencia de desplazamiento del marco de lectura”) es extraña al cuerpo. No existe antes de la mutación, y solo existe en células que tienen la mutación, es decir, en células tumorales y sus progenitores premalignos. Como son completamente novedosas y, por tanto, extrañas al sistema inmunitario del portador, pueden ser reconocidas por linfocitos T en el repertorio del portador. Hasta la fecha, nadie se ha centrado en este aspecto de mutaciones con desplazamiento del marco de lectura, y no existen informes de la caracterización de péptidos con desplazamiento del marco de lectura de regiones codificantes de proteínas como antígenos tumorales. Por tanto, este concepto es novedoso y forma la base para desarrollar vacunas basándose en estas secuencias. De esto resulta que tales vacunas también puedan usarse profilácticamente en personas que heredan enzimas defectuosas que pertenecen a la maquinaria de MMR. Por tanto, tales vacunas llenarán un espacio vacío en el armamento terapéutico contra formas heredadas del cáncer.

Se ha mostrado que sustituciones de un único aminoácido en “auto”-proteínas intracelulares pueden dar lugar a antígenos de rechazo tumoral, que consiste en péptidos que se diferencian en su secuencia de aminoácidos del péptido normal. Los linfocitos T que reconocen estos péptidos en el contexto de moléculas de histocompatibilidad mayor (MHC) sobre la superficie de las células tumorales pueden destruir las células tumorales y así rechazar el tumor del huésped.

A diferencia de anticuerpos producidos por los linfocitos B, que normalmente reconocen un antígeno libre en su conformación nativa y adicionalmente reconocen posiblemente casi cualquier sitio expuesto sobre la superficie del antígeno, los linfocitos T reconocen un antígeno solo si el antígeno está unido y es presentado por una molécula de MHC. Normalmente, esta unión tendrá lugar solo después del procesamiento apropiado de antígenos, que comprende una fragmentación proteolítica de la proteína, de manera que el fragmento de péptido resultante se ajusta en la ranura de la molécula de MHC. Así, también se permite que los linfocitos T reconozcan péptidos derivados de proteínas intracelulares. Los linfocitos T pueden así reconocer péptidos anómalos derivados de cualquier parte en la célula tumoral, en el contexto de moléculas de MHC sobre la superficie de la célula tumoral, y pueden posteriormente activarse para eliminar la célula tumoral que aloja el péptido anómalo.

M. Barinaga, Science, 257, 880-881, 1992, ofrece una breve revisión de cómo el MHC se une a péptidos. Una explicación más completa de los antecedentes técnicos de la presente invención puede encontrarse en D. Male y col., Advanced Immunology, 1987, J. B. Lippincott Company, Filadelfia.

Las moléculas de MHC en seres humanos normalmente se denominan moléculas de HLA (antígeno leucocitario humano) . Están codificadas por la región de HLA sobre el cromosoma humano nº 6.

Las moléculas... [Seguir leyendo]

1. Un péptido caracterizado porque a) tiene al menos 8 aminoácidos de longitud y es un fragmento de una proteína mutante que se produce a partir de una mutación con desplazamiento del marco de lectura en un gen BAX de una célula cancerosa en el que dicha mutación con desplazamiento del marco de lectura se produce en la repetición G8 en el tercer exón que atraviesa los codone.

3. 41 del gen BAX no mutado; y b) consiste en al menos un aminoácido de la parte mutante de una secuencia de proteínas codificada por dicho gen; y c) comprende 0-10 aminoácidos del extremo carboxilo de la parte normal de la secuencia de proteínas que precede al extremo amino de la secuencia mutante y opcionalmente se extiende al extremo carboxilo de la parte mutante de la proteína como se ha determinado por un nuevo codón de terminación generado por la mutación con desplazamiento del marco de lectura; y d) induce, tanto en su longitud completa como después del procesamiento por célula presentadora de antígeno, respuestas de linfocitos T, para su uso en un procedimiento para la vacunación de una persona predispuesta a, o afectada con, cáncer, que consiste en administrar al menos uno de dicho (s) péptido (s) , una o más veces, en una cantidad suficiente para la inducción de inmunidad de linfocitos T específicos para las proteínas mutantes, o fragmentos de las mismas, codificadas por el gen BAX mutado por desplazamiento del marco de lectura.

2. El péptido para su uso según la reivindicación 1, caracterizado porque contiene 8-25 aminoácidos, tal como 9-20 aminoácidos, 9-16 aminoácidos, 8-12 aminoácidos.

2. 25 aminoácidos, 9 aminoácidos, 12 aminoácidos, o 13 aminoácidos.

3. El péptido para su uso según la reivindicación 1, caracterizado porque está seleccionado de un grupo de péptidos que tiene los siguientes números de identidad de secuencia: SEC ID Nº: 1-12 o un fragmento de cualquiera de los mismos.

4. Un péptido como se define en la reivindicación 1 para su uso en el tratamiento de un paciente afectado con cáncer estimulando in vivo o ex vivo con el péptido definido en una cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

5. El péptido para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la cantidad del (de los) péptido (s) está en el intervalo de 1 microgramo (1 µg) a 1 gramo (1 g) y preferencialmente en el intervalo de 1 microgramo (1 µg) a 1 miligramo (1 mg) para cada administración.

6. El péptido para su uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se usa en combinación con al menos un péptido que

a) tiene un punto de mutación o translocación con respecto al fragmento correspondiente de una proteína protooncogénica;

y

b) se corresponde con, cubre completamente o es, un fragmento de un fragmento de proteína oncogénica procesada como se presenta por una célula cancerosa u otras células que presentan antígeno (CPA) ;

y

c) induce respuestas de linfocitos T específicos al fragmento de proteína oncogénica real producido por la célula por procesamiento y presentado en la molécula de HLA.

7. Una secuencia de ADN aislada que codifica un péptido mutante por desplazamiento del marco de lectura como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-3 para su uso en un procedimiento para el tratamiento de una persona predispuesta a, o afectada con, cáncer, por estimulación in vivo o ex vivo con dichas secuencias de ADN.

8. Un plásmido o vector de virus que comprende la secuencia de ADN definida en la reivindicación 7 para su uso en un procedimiento para el tratamiento de una persona predispuesta a, o afectada con, cáncer, por estimulación in vivo o ex vivo con una secuencia de ADN definida en la reivindicación 7.