Péptidos largos de 22-45 residuos de aminoácidos que inducen y/o mejoran las respuestas inmunológicas específicas para antígenos.

Uso de un péptido que consiste en las posiciones de aminoácido 43 - 77 de E7 del VPH,

para la fabricación de un medicamento para inducir o mejorar una respuesta de las células T específica del VPH en un animal o un humano para la prevención o tratamiento de una enfermedad relacionada con el VPH.

Péptidos largos de 22-45 residuos de aminoácidos que inducen y/o mejoran las respuestas inmunológicas específicas para antígenos [0001] La presente invención se refiere en general al campo de la medicina, y más específicamente a la inducción y/o mejora de una respuesta de las células T dirigida hacia un antígeno, usando péptidos que comprenden epítopos específicos para dicho antígeno.

La invención es ejemplificada usando inmunidad dirigida al VPH como modelo.

La Infección de VPH es altamente predominante entre individuos jóvenes, masculinos y femeninos sexualmente activos. Grandes estudios prospectivos mostraron que la adquisición de VPH de compañeros masculinos es común, ocurriendo en el 40-60% de los sujetos durante un periodo de seguimiento de 3 años (Koutsky et al., 1997, Ho et al., 1998, Marrazzo et al., 2000) . Por lo tanto, el VPH es probablemente la enfermedad de transmisión sexual más común. Los virus del papiloma de los tipos de alto riesgo (p. ej. VPH 16, 18, 31, 33 y 45) son responsables del cáncer cervical (Bosch et al., 1995, Zur Hausen, 1996) . Después de la infección de las células epiteliales basales, los genes tempranos inmediatos E1, E2, E5, E6 y E7 del VPH son expresados. Los genes E1 y E2 regulan la replicación vírica. Además, la proteína E2 controla la expresión de las oncoproteínas E6 y E7. La proteína E6 de los tipos de alto riesgo del VPH se enlaza específicamente con la p53 y toma como objetivo su rápida degradación a través de la ruta de ubiquitina. La p53 está implicada en la iniciación de la apoptosis, y la pérdida de esta proteína supone la prevención de la apoptosis (Scheffner et al., 1990) . La proteína E7 de los tipos de alto riesgo se enlaza con la pRB, que normalmente impide a las células entrar en el ciclo celular inactivando la E2F, una proteína necesaria para la entrada en el ciclo celular (Dyson et al. 1989) . La expresión de E7 da lugar a que las células infectadas no puedan retirarse del ciclo celular y diferenciarse. La prolongada y elevada expresión de las oncoproteínas E6 y E7 está estrechamente asociada a la displasia inducida por el VPH y la transformación en carcinoma cervical. El papel protector del sistema inmunológico en la defensa contra las enfermedades relacionadas con el VPH y el cáncer inducido por el VPH en seres humanos es sugerido por el hecho de que en comparación con controles normales, pacientes de trasplante renal inmunosuprimidos y pacientes infectados con VIH muestran una incidencia 17 veces superior de infección genital de VPH (Ho et al., 1994, Matorras et al. 1991, Halpert et al. 1986) . La capacidad disminuida de individuos inmunosuprimidos para solucionar la infección del VPH apunta indirectamente hacia un papel protector del sistema inmunológico en los primeros momentos de la infección. La evidencia de protección contra el VPH a través de inmunidad contra los antígenos tempranos E2, E6 y E7 viene del modelo del virus del papiloma del conejo de cola de algodón que es el modelo animal principal para virus del papiloma asociados con el cáncer. La vacunación con las proteínas no estructurales E1 y E2 induce la regresión de papilomas inducidos por virus mientras que el crecimiento del tumor vírico es suprimido. Además, los conejos vacunados con la combinación de los genes E1, E2, E6, y E7 fueron completamente protegidos contra la provocación vírica (Han et al. 1999, Selvakumar et al. 1995) . Estos datos indican que la inmunidad contra E2, E6, y E7 puede ser eficaz como immunoprofilaxis de la infección del virus del papiloma así como terapéuticamente para lesiones y cáncer inducidos por VPH. Existe un interés considerable en la identificación de epítopos implicados en la respuesta inmune al VPH16, dada la posibilidad de incorporar éstos como subunidades en una vacuna o usar estos epítopos para monitorizar la inmunidad inducida por vacuna in vivo. Ya que la mayoría de las células epiteliales expresan el CMH clase I pero no clase II, la atención se ha centrado hasta el momento en la inducción de linfocitos T citotóxicos CD8+ tumoricidas, específicos de VPH (Melief et al., 2000; Ressing et al., 1995; Ressing et al., 2000; Ressing et al., 1996) . La reactividad de células T CD8+ específicas para VPH ha sido encontrada en la sangre periférica de pacientes diagnosticadas con lesiones de neoplasia intraepitelial cervical de grado III (NIC III) o carcinoma cervical (Nimako et al., 1997; Ressing et al., 1996) y en las poblaciones de células T infiltradas en tumores aisladas de pacientes con cáncer cervical (Evans et al., 1997) . La inmunidad auxiliar T ("Th") CD4+ específica de tumor es ahora también considerada crucial para la erradicación eficaz de tumores sólidos, a pesar del hecho de que la mayor parte de estos tumores no expresan el CMH clase II (reseñado en Melief et al., 2000; Pardoll y Topalian, 1998; Toes et al., 1999) . La evidencia reciente indica que las células T CD4+ específicas de tumor son requeridas no solo para la inducción óptima de LTC específicos de tumor CD8+ sino también para el óptimo ejercicio de la función celular de efector local mediante estos LTC (Ossendorp et al., 1998, Toes et al., 1999) . Para inducir inmunidad específica de tumor restringida por el CMH clase I, la presentación cruzada de antígenos que han sido capturados por células profesionales presentadoras de antígenos parece jugar un papel dominante. Para inducción apropiada de LTC específicos de tumor mediante cebado cruzado se requiere ayuda de células T CD4+ específicas de tumor (Toes et al., 1999, Schoenberger et al., 1998) . Un papel positivo para la inmunidad Th específica de VPH fue sugerido por el predominio de células T CD4+ en las verrugas genitales en regresión (Coleman et al., 1994) así como por la detección de respuestas de hipersensibilidad de tipo retardado para E7 del VPH16 en la mayoría de sujetos con regresión espontánea de lesiones de NIC (Hopfl et al., 2000) . Además, se han detectado células T CD4+ específicas del VPH 16 en la sangre de pacientes con infecciones persistentes de VPH, lesiones de NIC de alto grado o cáncer cervical (de Gruijl et al., 1998) . Para los tipos oncogénicos menos predominantes VPH59 y VPH68, se aislaron células Th restringidas por HLA-DR4 fueron aisladas de las células T que se infiltraron en una lesión de cáncer cervical (Hohn et al., 1999) . En cambio, a pesar de la presencia de VPH16 en la mayoría de lesiones de NIC progresivas y cánceres cervicales, no hay información en profundidad disponible en lo que se refiere a la restricción por HLA y especificidad de epítopo de respuestas de las auxiliares T específicas del VPH

16.

Para una estrategia clínicamente pertinente de inmunización de sujetos, por ejemplo, contra células infectadas de forma (mico) bacteriana o vírica, o células tumorales, y VPH en particular, se prefiere que tanto las células T auxiliares específicas como los LTC sean inducidos. Hemos mostrado ya que la inmunización con epítopos de LTC mínimos produce protección contra los tumores en algunos modelos (Feltkamp et al. 1993, Kast et al. 1991) mientras que en otros modelos, esto puede llevar a tolerancia o eliminación funcional de virus y LTC específicos de tumor que cuando se inducen de otra manera son protectores (Toes et al. 1996ab) . La incidencia de tolerancia o eliminación funcional reduce los efectos de vacunación significativamente. No obstante, hasta la presente invención no hubo ninguna solución para este fenómeno. Los epítopos implicados en este efecto, por lo tanto, no eran adecuados para fines de inmunización. El procesamiento de antígenos exógenos para la presentación por moléculas del CMH clase I mediante cebado cruzado así como por otros mecanismos, es ahora una vía secundaria ampliamente reconocida de procesamiento para la presentación por CMH clase I, junto con la bien conocida vía endógena (Jondal et al. 1996, Reimann et al. 1997) . El resultado normal del procesamiento de antígeno a través de esta ruta es la tolerancia a LTC, a menos que tenga lugar la activación de CPA por células T CD4+ (Kurts et al., 1997) . Además, en diferentes estudios con infecciones de virus murino, se detectó una correlación positiva entre la frecuencia de precursores de LTC y la inmunidad protectora (Sedlik et al. 2000, Fu et al., 1999) . Para una inducción óptima de LTC, la presentación de epítopos de LTC tiene lugar preferiblemente en la superficie de células presentadoras de antígeno profesionales (CPA) tales como las células dendríticas (Mellman et al. 1998, Rodríguez et al. 1999) . Mientras que los epítopos mínimos de LTC y de Th pueden, sin la necesidad de procesamiento mediante células presentadoras de antígeno profesionales, ser presentados a células T, las proteínas necesitan ser absorbidas y... [Seguir leyendo]

1. Uso de un péptido que consiste en las posiciones de aminoácid.

43. 77 de E7 del VPH, para la fabricación de un medicamento para inducir o mejorar una respuesta de las células T específica del VPH en un animal o un humano para la prevención o tratamiento de una enfermedad relacionada con el VPH.

2. Uso según la reivindicación 1, que comprende además el uso de un péptido E6 del VPH con una longitud d.

22. 45 aminoácidos y que comprende una secuencia de aminoácidos tomada de una proteína E6 del VPH y/o de un péptido que consiste en las posiciones de aminoácido 1 - 35.

2. 56.

3. 77.

4. 62.

4. 72 .

64. 98 de E7 del VPH para la fabricación del medicamento.

3. Uso según la reivindicación 2, donde la secuencia de aminoácidos del péptido E6 del VPH es tomada de la parte del

C-terminal de una proteína E6 del VPH tal y como se define mediante las posiciones de aminoácid.

81. 158. 15

4. Un uso según la reivindicación 3, donde el péptido E6 del VPH comprende una secuencia de aminoácidos que abarca una región de las posiciones de aminoácido 127 - 142 de la proteína E6 de VPH.

5. Uso según la reivindicación 2, donde el péptido E6 de VPH es seleccionado de un péptido que consiste en las

posicionesde aminoácido 1 - 22, 11 - 32, 19 - 50, 21 - 42, 31 - 52, 41 - 62, 51 - 72, 61 - 82, 71 - 92, 81 - 102, 91 - 112, 101 - 122, 109 - 140, 109 - 143.

11. 132.

12. 142.

12. 158.

12. 158.

13. 152.

14. 162 .

13. 158 de E6 del VPH.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además el uso de un péptido E2 del VPH

con una longitud d.

22. 45 aminoácidos y con una secuencia de aminoácidos tomada de una proteína E2 del VPH para 25 la fabricación del medicamento.

7. Uso según la reivindicación 6, donde la secuencia de aminoácidos del péptido E2 de VPH es tomada de una región que se define por las posiciones de aminoácid.

31. 120, 151 - 195 o 271 - 365.

8. Uso según la reivindicación 6 ó 7, donde el péptido E2 de VPH comprende una secuencia de aminoácidos que abarca una región seleccionada entre las posiciones de aminoácid.

51. 70.

61. 76, 311 - 325, 316 - 330, 346 - 355 y 351 - 365 de la proteína E2.

9. Uso según la reivindicación 8, donde la enfermedad relacionada con VPH es una infección del VPH, una lesión de 35 NIC o cáncer cervical.

10. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el VPH tiene un serotipo seleccionado de 16, 18, 31, 33, 45, 59 y 68.

11. Uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde el medicamento comprende además un adyuvante, preferiblemente donde el adyuvante comprende al menos uno entre: un exosoma, poli I: C, poli I: poli C12 U, monofosforil lípido A, un CpG que contiene ácido nucleico, un ligando CD40 o anticuerpo anti-CD40.

12. Medicamento que comprende un péptido y opcionalmente un adyuvante según se define en cualquiera de las 45 reivindicaciones 1 a 11.