Péptidos hsp y análogos para la modulación de respuestas inmunes mediante células presentadoras de antígeno.

Un análogo peptídico de una proteína de choque térmico (Hsp), en el que dicho análogo peptídico es la SEC ID Nº 8.

Campo de la invención La presente invención se refiere a péptidos y análogos peptídicos de proteínas de choque térmico (hsp) capaces de interactuar directamente con células dendríticas. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas que comprenden células dendríticas expuestas a dichos péptidos y análogos, útiles para la prevención o tratamiento de trastornos inflamatorios y enfermedades o malignidades autoinmunes, infecciones virales y alergia.

Antecedentes de la invención Proteínas de choque térmico Las proteínas de choque térmico (hsp) son polipéptidos ubicuos producidos por todas las células de todas las especies. Se encuentran entre las proteínas mejor conservadas filogenéticamente, con respecto tanto a la secuencia como a la función. Las proteínas de choque térmico humanas y bacterianas son más del 50% homólogas (Jindal et al. Mol Cell Biol. 9: 2279, 1989) . Las proteínas de choque térmico se expresan tanto como proteínas constitutivas que actúan como chaperonas moleculares (Becker J. y Craig A.E., Eur. J. Biochem. 219; 11, 1994) , como en forma de proteínas de estrés inducibles.

Hsp60 es una chaperona mitocondrial con un papel importante en el plegamiento y desplegamiento de proteínas, así como la translocación de proteínas a la mitocondria. Hsp60 se encuentra en el citosol celular en condiciones de estrés e inflamatorias; infección o niveles elevados de citoquinas inducirán la respuesta al estrés celular. Por lo tanto, no es sorprendente que hsp60 sea una proteína altamente inmunogénica: es el "antígeno común" de bacterias gram-negativas. La reactividad inmunológica a hsp60 tanto bacteriana como autóloga es altamente prevalente en la población general, ya que la respuesta inmune dirigida a patógeno puede convertirse fácilmente en una respuesta autoinmune debido a la alta homología.

Están presente respuestas de células T contra múltiples epítopos de hsp60 en diversas enfermedades autoinmunes e inflamatorias (Van Eden et al. Immunology Today 19; 303, 1998) , incluyendo la diabetes tipo 1 (Elias et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 88: 3088, 1991) , la artritis reumatoide y juvenil, la esclerosis múltiple, la espondilitis anquilosante, la infertilidad asociada con la inflamación pélvica, la enfermedad inflamatoria del intestino, la aterosclerosis, el rechazo de injertos y más. El sistema inmune reacciona contra epítopos de hsp60 tienen reacción cruzada entre los análogos humanos y bacterianos, o son idiosincrásicos.

Las enfermedades inflamatorias asociadas con la expresión de hsp60 en tejidos diana incluyen: (i) Enfermedades autoinmunes: diabetes (Birk et al. Proc Natl Acad Sci 93: 1032, 1996) , esclerosis múltiple, artritis reumatoide (Van Eden et al., Nature, 331: 171, 1988) , artritis crónica juvenil; (ii) Inflamación crónica: enfermedad inflamatoria del intestino, artritis reactiva; (iii) Rechazo de injertos: Hsp60 puede contribuir significativamente al proceso inflamatorio 45 que termina en el rechazo del injerto. Introduciendo antagonistas derivados de hsp60 derivado en una fase temprana después del trasplante, se podría amortiguar la inflamación y prolongar la supervivencia del injerto (Birk et al. Proc Natl Acad Sci, 96: 5159, 1999) ; (iv) Aterosclerosis: Hsp60 se ha implicado en la aterosclerosis, ya que se demostró que autoanticuerpos contra hsp60 humana se correlacionan con el estado clínico de los pacientes y modelos animales experimentales. Además, hsp60 puede estimular las funciones de macrófagos relevantes a la aterosclerosis, tales como la producción de TNFα, IL-6 y metaloproteinasas que degradan la matriz (Chen et al., J. Immunol. 162, 3212, 1999) .

Uso de proteínas de choque térmico en terapia 55 Muchas divulgaciones reivindican usos de las proteínas de choque térmico o fragmentos de las mismas como moduladores inmunes en el diagnóstico, tratamiento o prevención de enfermedades autoinmunes. La mayoría de estas divulgaciones se refieren a la proteína de choque térmico 60 también conocida anteriormente como hsp65, o fragmentos de esta proteína.

Por ejemplo, la proteína particular producida por el cuerpo humano durante el desarrollo de IDDM, que sirve como marcador de diagnóstico para el brote incipiente de IDDM, es la proteína de choque térmico humana que tiene un tamaño de aproximadamente 65 KD (hsp65 humana) o una antígeno con reacción cruzada con la misma como se describe en el documento EP 0417271, y en las patentes de Estados Unidos 5.114.844; 5.671.848; 5.578.303 y

5.780.034. Se ha descrito que fragmentos de esta proteína hsp60 pueden servir como entidades terapéuticamente 65 útiles en la prevención o el alivio de IDDM y la enfermedad de hospedador contra injerto (patentes de Estados Unidos 6.180.103 y 5.993.803 y documento WO 96/19236, documento WO 97/01959 y documento WO 98/08536) .

Además, pueden usarse fragmentos de hsp60 como vehículos para el desarrollo de vacunas sintéticas aumentando la inmunogenicidad de antígenos poco inmunogénicos como se describe en las patentes de Estados Unidos 5.736.146 y 5.869.058.

La patente europea Nº 0262710 describe polipéptidos útiles para el alivio, tratamiento y diagnóstico de artritis autoinmune y enfermedades autoinmunes similares. Los polipéptidos reivindicados se obtienen de la proteína bacteriana llamada "antígeno A" que se identificó más tarde como hsp60 micobacteriana.

El documento WO 92/04049 describe péptidos de al menos siete aminoácidos homólogos a un fragmento de hsp60 de Mycobacterium tuberculosis, que inhiben la activación y proliferación de linfocitos T y puede proteger contra reacciones inmunes y enfermedades relacionadas con el sistema inmune.

Los documentos WO 89/12455 y WO 94/29459, describen el uso de proteínas de estrés y análogos para producir o potenciar una respuesta inmune o para inducir tolerancia inmune, para profilaxis o terapia de enfermedades autoinmunes y para tratar o prevenir infecciones o cáncer. Se reivindica una proteína de fusión que comprende una proteína de estrés fusionada con una proteína contra la cual se desea una respuesta inmune.

El documento WO 95/25744 describe fragmentos de la proteína de estrés microbiana que contienen epítopos homólogos a epítopos de mamífero relacionados -usados para tratar y prevenir enfermedades autoinmunes inflamatorias y para prevenir el rechazo del trasplantes. Los epítopos protectores se localizan en péptidos cortos que comprenden regiones de secuencias de 5-15 aminoácidos de proteínas de estrés, que están altamente conservadas entre microorganismos y animales.

Los documentos WO 97/11966 y WO 96/10039 describen polipéptidos de hasta 21 aminoácidos, derivados de la proteína de choque térmico microbiana que son útiles para la profilaxis o tratamiento de enfermedades autoinmunes, especialmente la artritis.

El documento WO 96/16083 describe un péptido de 25 aminoácidos de longitud, derivado de la proteína de choque térmico de 10 kD (hsp10) de Mycobacterium tuberculosis que es útil en productos farmacéuticos para el tratamiento de patologías inflamatorias, especialmente artritis reumatoide.

El documento WO 91/02542 describe el uso de material antigénico y/o inmuno-regulador derivado de Mycobacterium vaccae y, específicamente, hsp60, para el tratamiento de trastornos inflamatorios crónicos causados o acompañados por una liberación anormalmente alta de IL-6 y/o TNFα.

El documento WO 96/18646 describe péptidos de 9-20 aminoácidos derivados de hsp60 micobacteriana usados para el tratamiento o prevención de enfermedades autoinmunes del SNC, por ejemplo, esclerosis múltiple, enfermedad inflamatoria crónica del SNC y tumores cerebrales primarios.

El documento WO 94/02509 describe péptidos de 7-30 aminoácidos derivados del epítopo DR3-restringido de hsp60 micobacteriana usados para el tratamiento de enfermedades autoinmunes relacionadas con HLA-DR3.

El documento WO 00/27870 describe péptidos derivados de hsp60 micobacteriana y de rata y vacunas que comprenden dichos péptidos para inmunización contra enfermedades autoinmunes e inflamatorias.

El documento US 5.958.416 describe péptidos de proteína de choque térmico y métodos para modular enfermedades autoinmunes del sistema nervioso central.

El documento WO 01/43691 describe fragmentos y antagonistas de Hsp60, capaces de reducir o prevenir la inducción de una respuesta inmune pro-inflamatoria de células del sistema inmune innato por hsp60, para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y autoinmunes. Los compuestos descritos inhiben la unión de hsp60 al receptor tipo Toll, y por lo tanto reducen o previenen la inducción de una respuesta proinflamatoria consecuente.... [Seguir leyendo]

1. Un análogo peptídico de una proteína de choque térmico (Hsp) , en el que dicho análogo peptídico es la SEC ID Nº

8.

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2. Una composición farmacéutica que comprende el análogo peptídico de la reivindicación 1 y un vehículo

farmacéuticamente aceptable.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, que adicionalmente comprende células presentadoras de

10 antígeno.

4. Una composición farmacéutica que comprende:

células presentadoras de antígeno expuestas al análogo peptídico de acuerdo con la reivindicación 1 en

15 ausencia de un antígeno diferente a dicho análogo peptídico, en la que las células son capaces de estimular

adicionalmente células T auxiliares, y

un vehículo farmacéuticamente aceptable.

5. La composición de la reivindicación 4, en la que las células presentadoras de antígeno son células dendríticas.

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6. La composición de la reivindicación 5, en la que las células dendríticas son células dendríticas autólogas.

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