Nueva formulación para incrementar la biodisponibilidad de la neurturina.

Una formulación farmacéutica que comprende neurturina como un ingrediente activo y un polímero polianiónico de bajo peso molecular que tiene un peso molecular promedio (Mw) de hasta 8000 Da junto con un portadores,

diluyentes y/o adyuvantes farmacéuticamente aceptables, donde el polímero polianiónico es un polímero que contiene grupo sulfato y en donde:

la formulación es para usar en inyección subcutánea o intravenosa, en ambos casos para usar en medicina humana o veterinaria; y/o

la formulación es para usar en la prevención o tratamiento de trastornos pancreáticos.

Nueva formulación para incrementar la biodisponibilidad de la neurturina Campo de la invención 5 La presente invención se refiere a formulaciones con proteínas de factores de crecimiento, particularmente la neurturina como ingrediente activo y excipientes polianiónicos que tienen una biodisponibilidad incrementada.

Antecedentes Las células beta pancreáticas segregan insulina en respuesta a niveles aumentados de glucosa sanguínea. La insulina, 10 entre otras hormonas, juega un papel clave en la regulación del metabolismo energético. La insulina regula el almacenamiento de glucógeno y triglicéridos y la síntesis de proteínas. La insulina estimula la entrada de glucosa a los músculos y células adiposas. En pacientes que sufren diabetes mellitus tipo I o LADA (diabetes autoinmune latente del adulto, Pozzilli & Di Mario, 2001, Diabetes Care. 8:1460-1467) las células beta se destruyen debido al ataque autoinmune. La cantidad de insulina que se produce por los islotes pancreáticos remanentes es demasiado baja, lo que 15 resulta en elevados niveles de glucosa sanguínea (hiperglicemia) . En la diabetes tipo II el hígado y las células musculares pierden su capacidad para responder a los niveles sanguíneos normales de insulina (insulino-resistencia) . Elevados niveles de glucosa sanguínea (y además elevados niveles de lípidos) a su vez conducen a una alteración de la función de las células beta y a un incremento de la muerte de las mismas. Es interesante que la velocidad de la neogénesis y replicación de las células beta no parecen incrementarse en los diabéticos tipo II, por lo tanto esto con el 20 tiempo causa una reducción en la masa total de células beta. Eventualmente la aplicación de insulina exógena se vuelve necesaria en diabéticos tipo II.

En diabéticos tipo I, en donde las células beta son destruidas por el ataque autoinmune, se han diseñado tratamientos que modulan el sistema inmune y pueden ser capaces de detener o reducir fuertemente la destrucción de los islotes 25 (Raz y otros, 2001, Lancet 358: 1749-1753; Chatenoud y otros, 2003, Nat Rev Immunol. 3: 123-132; Homann y otros, Immunity. 2002, 3:403-415) . Sin embargo, debido a la relativamente baja regeneración de las células beta humanas, tales tratamientos pueden ser más exitosos si se combinan con tratamientos que pueden estimular la regeneración de las células beta.

30 La diabetes es una enfermedad muy discapacitante, porque los medicamentos antidiabéticos comunes actuales no controlan los niveles de glucosa sanguínea lo suficientemente bien como para prevenir completamente la ocurrencia de niveles altos y bajos de glucosa sanguínea. Frecuentemente los niveles elevados de glucosa sanguínea son tóxicos y causan complicaciones de largo término como por ejemplo la nefropatía, la retinopatía y la enfermedad vascular periférica. La extensa pérdida de las células beta conduce además a una desregulación de la secreción de glucagón en 35 las células alfa pancreáticas que contribuye al incremento del riesgo de episodios de hipoglicemia. Existe además una multitud de afecciones relacionadas, tales como obesidad, hipertensión, enfermedad cardíaca e hiperglicemia para las cuales las personas con diabetes están sustancialmente en riesgo.

Aparte de la afectación en la calidad de vida de los pacientes, el tratamiento de la diabetes y sus complicaciones a largo 40 plazo presenta una enorme carga financiera para nuestros sistemas de cuidados de la salud con tendencia a elevarse. Por lo tanto, para el tratamiento de la diabetes mellitus tipo I y LADA, y además para el tratamiento de las etapas tardías de la diabetes mellitus tipo 2 hay una fuerte necesidad en la técnica de identificar factores que induzcan la regeneración de las células beta pancreáticas productoras de insulina. Estos factores podrían restaurar la función normal del páncreas endocrino una vez que se afecte su función o aún podrían prevenir el desarrollo o progreso de la diabetes tipo 45 I, LADA o diabetes tipo II.

La neurturina se expresa en el páncreas embrionario, y se ha demostrado que la neurturina recombinante estimula la diferenciación de las células ES en células productoras de insulina. Además, los ratones transgénicos con niveles elevados de neurturina tienen una masa de células beta pancreáticas sustancialmente incrementada. Con base en estos 50 hallazgos, se propuso el uso de la neurturina en trastornos pancreáticos tales como la diabetes (ver, por ejemplo, WO03/099318 y WO2005/051415) .

La neurturina se propuso anteriormente como un tratamiento para las enfermedades neurodegenerativas tales como Parkinson, Alzheimer y enfermedad de Huntington, trastornos de la neurona motora o trastornos auditivos. (WO 55 97/08196, WO 99/06064; Akerud y otros J Neurochem. 1999;73 (1) :70-78; Koeberle & Ball Neuroscience. 2002; 110 (3) :555-567; Bilak y otros Mol Cell Neurosci. 1999;13 (5) :326-336;Perez-Navarro y otros Neuroscience. 2000; 98 (1) :89-96; Rosenblad y otros, Eur J Neurosci. 1999; 11 (5) :1554-1566) .

Se encontró, sin embargo, que tras la liberación incrementada por convección (CED) en cerebros de rata, se limitó el 60

volumen de distribución de la neurturina y el factor GDNF relacionado (Hamilton y otros, Exp Neurol. 2001 ; 168 (1) :155-161) . En nuestros propios estudios, encontramos que después de la inyección subcutánea e intravenosa la biodisponibilidad de la neurturina es baja, solo aproximadamente 10% de la neurturina inyectada subcutáneamente entra a la circulación (ver Fig. 1) .Sería, por lo tanto, altamente deseable proveer una forma de formulación que incremente la biodisponibilidad de la neurturina. 5

La heparina se usa extensamente en medicina debido a sus acciones anticoagulantes. La inhibición de la coagulación sanguínea por heparina ocurre mediante la unión e inhibición del factor proteasa Xa y otras proteasas de serina que participan en la cascada de la coagulación y se describió que se requiere un mínimo de pentasacárido para la inhibición del factor Xa (Wang y otros., J Clin Invest. 2002; 110:127-136; Esko & Lindahl J Clin Invest. 2001;108 (2) :169-173; Weitz, 10 JL, N Engl J Med. 1997; 337 (10) :688-698) ) .

Se conoce que los factores de crecimiento proteicos tales como VEGF, bFGF, neurturina y - A - y la proteína relacionada GDNF se enlazan a la heparina (Lin y otros J Neurochem. 1994; 63 (2) :758-768; WO 97/08196; Kotzbauer y otros Nature. 1996; 384 (6608) :467-470; Hamilton y otros, más arriba) . La heparina no fraccionada consiste de cadenas 15 del polímero glicosaminoglicano. Estas cadenas contienen residuos alternos de D-glucosamina y ácido urónico (ya sea ácido glucurónico o ácido idurónico) , y tienen pesos moleculares hasta aproximadamente 30000 Dalton (Weitz y otros, más arriba) .

Hamilton y otros observaron un volumen de distribución significativamente incrementado en CED de GDNF y neurturina 20 junto con heparina.

Para el GDNF se demostró que la heparina puede incrementar la unión a su receptor GFRal, y que el GDNF unido a la heparina está protegido del ataque proteolítico (Rickard y otros, Glycobiology. 2003; 13 (6) :419-426) .

25 El documento US 5, 849, 689 reveló la administración del factor de crecimiento del hepatocito (HGF) en combinación con la heparina, heparina de bajo peso molecular y polisulfato de pentosán. Se mostró que la vida media en plasma de HGF se incrementó significativamente mediante la co-administración de HGF y heparina, mientras que la co-administración de HGF con heparina de bajo peso molecular condujo a sólo un pequeño incremento de la vida media plasmática en comparación con la administración de HGF solo. 30

Los presentes inventores encontraron que la biodisponibilidad de la neurturina, sin embargo, sólo se incrementa moderadamente mediante la heparina, particularmente después de la administración subcutánea. Por lo tanto, el objetivo de la presente invención fue proporcionar una nueva formulación de factores de crecimiento proteicos, particularmente formulaciones novedosas de neurturina, que tienen una biodisponibilidad significativamente 35 incrementada.

Resumen de la invención

La presente invención se refiere a una formulación farmacéutica que comprende la neurturina como ingrediente activo y un polímero polianiónico de bajo peso molecular que tiene un peso molecular (Mw) promedio de hasta 8000 Da junto 40 con portadores farmacéuticamente aceptables, diluyentes y/o adyuvantes, donde el polímero polianiónico es un polímero que contiene un grupo sulfato y en donde:

la formulación es para uso en inyección subcutánea o intravenosa, en ambos casos para uso en medicina humana o veterinaria; y/o 45

la formulación es para... [Seguir leyendo]

1. Una formulación farmacéutica que comprende neurturina como un ingrediente activo y un polímero polianiónico de bajo peso molecular que tiene un peso molecular promedio (Mw) de hasta 8000 Da junto con un portadores, diluyentes y/o adyuvantes farmacéuticamente aceptables, donde el polímero polianiónico es un polímero que 5 contiene grupo sulfato y en donde:

la formulación es para usar en inyección subcutánea o intravenosa, en ambos casos para usar en medicina humana o veterinaria;

y/o 10

la formulación es para usar en la prevención o tratamiento de trastornos pancreáticos.

2. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la neurturina es neurturina humana o un fragmento farmacéuticamente activo de esta.

3. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2 en donde la neurturina está unida a propilenglicol.

4. La formulaciónpara usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el polímero polianiónico es seleccionado de sacáridos sulfatados, ciclodextrinas sulfatadas, polímeros acrílicos sulfatados, 20 y/o polímeros aromáticos sulfatados, polialcoholes sulfatados.

5. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el polímero polianiónico es seleccionado de heparinas de bajo peso molecular, o derivados de la heparina antiinflamatorios desprovistos de actividad anticoagulante, sulfatos de heparina, sulfatos de condroitina, sulfatos de dextrano, polisulfatos de pentosana o 25 combinaciones de estos.

6. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 5, en donde las heparinas y derivados de la heparina de bajo peso molecular son Enoxaparina, Dalteparina, Nadroparina, Tinzaparina, Fondaparina, Bemiparina, Reviparina, Ardeparina, Certoparina, y/o Parnaparina. 30

7. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 4, en donde el polímero polianiónico es un polisulfato de pentosana con un peso molecular promedio ponderado (Mw) de 4000 a 6000 Da.

8. La formulación para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para usar en inyección 35 subcutánea o intravenosa.

9. La formulación para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes para usar en la prevención y tratamiento de trastornos pancreáticos.

10. La formulación para usar de acuerdo con la reivindicación 9 para usar en la prevención o tratamiento de la diabetes tipo I, diabetes autoinmune latente en adultos (LADA) o diabetes tipo II.

11. La formulación para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para la administración a un mamífero, particularmente un humano. 45