Modulación por IVIG de quimioquinas para el tratamiento de la esclerosis múltiple, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

Método para verificar la eficacia de un tratamiento intravenoso con inmunoglobulina (IVIG) de exacerbaciones agudas de esclerosis múltiple recurrente-remitente en un sujeto,

comprendiendo el método los pasos de:

(a) Poner en contacto una primera muestra biológica del sujeto tratado con IVIG con un reactivo que se une específicamente a una secuencia de ácido nucleico de quimioquina (motivo C-X-C) ligando 5 (CXCL5);

(b) Medir la expresión génica de CXCL5;

(c) Comparar la expresión génica de CXCL5 en la primera muestra procedente del sujeto tratado con IVIG con la expresión génica del CXCL5 presente en una muestra de referencia procedente del sujeto obtenida con anterioridad al tratamiento con IVIG; y

(d) Determinar si el CXCL5 está o no sobreexpresado o infraexpresado en la muestra procedente del sujeto tratado con IVIG en comparación con la expresión génica del marcador en la muestra de referencia, verificando así la eficacia del tratamiento con IVIG de la esclerosis múltiple en el sujeto.

Modulaciïn por IVIG de quimioquinas para el tratamiento de la esclerosis mïltiple, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIïN

La esclerosis mïltiple (EM) es la enfermedad autoinmune inflamatoria mïs habitual del sistema nervioso central. Se caracteriza por lesiones desmielinizantes de la sustancia blanca del sistema nervioso central, cuyas consecuencias son dïficits neurolïgicos (Sospedra M. y Martin R., Immunology of Multiple Sclerosis. Annu Rev Immunol., 23: 683747 (2005) ) . La patogïnesis de la enfermedad estï asociada con la infiltraciïn en el cerebro de cïlulas inmunes y, especialmente, de cïlulas T activadas (Sospedra M. y Martin R., Annu Rev Immunol., 23: 683-747 (2005) ) . Esta infiltraciïn va acompaïada de una disrupciïn de la barrera hematoencefïlica (van Horssen J. y col., J Neuropathol Exp Neurol., 66: 321-8 (2007) ) .

Las inmunoglobulinas intravenosas (IVIG) han demostrado ser efectivas en el tratamiento de diversas enfermedades autoimmunes, incluyendo EM (Sospedra M. y Martin R., Immunology of Multiple Sclerosis. Annu Rev Immunol., 23: 683-747 (2005) ) , pero no se ha conseguido explicar por completo el mecanismo exacto de acciïn que subyace bajo la actividad inmunomoduladora de las IVIG. Existen diversos modelos que tratan de explicar la eficacia de las IVIG en pacientes que padecen enfermedades autoinmunes e inflamatorias (Kazatchkine M.D. y col., Mult Scler, 2:24-6; 33:24-26 (2000) ; Trebst C. and Stange M., Curr. Pharm. Design, 12:241-2493 (2006) ) . Estos modelos incluyen la inmunomodulaciïn mediada por los receptores Fcγ (Sorensen P.S., Neurol Sci, 4:227-230 (2003) ) , la modulaciïn de las redes idiotipo-antiidiotipo (Samuelsson A. y col., Science, 291:484-6 (2001) ) , la eliminaciïn de productos microbianos inmunoestimulantes (Dalakas M.C., Ann Intern Med, 126:721-30 (1997) ) y la neutralizaciïn de los anticuerpos que actïan contra las citoquinas y quimioquinas (Bayr y J. y col., Transfus Clin Biol., 10:165-9 (2003) ) . Tambiïn se ha demostrado el potencial de las IVIG para modificar el equilibrio entre la inmunoreactividad de las cïlulas Th1 y Th2 e inhibir la formaciïn de complejos anticuerpo/complemento (Andersson U. y col., Immunol Rev,

139: 21-42 (1994) ; Bayr y J. y col., Intravenous immunoglobulin in autoimmune disorders: An insight into the immunregulator y mechanisms) .

Los efectos beneficiosos de las IVIG en pacientes que padecen EM fueron demostrados mediante una serie de ensayos clïnicos abiertos (Basta M. y col., Blood, 77: 376-80 (1991) ) y mediante cuatro ensayos clïnicos aleatorios doble ciego (Sorensen P.S. y col., Eur J. Neurol, 9: 557-563 (2002) ; Strasser-Fuchs S. y col., Mult Scler, 2: 9-13 (2000) ; Sorensen P.S. y col., Neurology, 50: 1273-1281 (1998) ; Lewanska M. y col., Eur J. Neurol, 9: 565-572 (2002) ) . Las IVIG redujeron la frecuencia de recaïda en pacientes de EM, asï como el nïmero de lesiones realzadas con gadolinio observadas en el diagnïstico por imagen de resonancia magnïtica (MRI) (Dudesek A. y Zettl U.K., J. Neurol, 253; V/50-V/58) ) . Asimismo, se demostrï que la IVIG suprimïa la proliferaciïn de las cïlulas T perifïricas activadas (Bayr y J. y col., Neurol Sci, 4: 217-221 (2003) ; Stange M. y Gold R., Nervenarzt, (2005) ) . Las cïlulas T perifïricas auto-reactivas pueden atravesar la barrera hematoencefïlica y se cree que son las principales cïlulas efectoras responsables de la inflamaciïn cerebral (Sospedra M. y Martin R., Annu Rev Immunol., 23: 683-747 (2005) ; Helling N. y col., Immunol Res. 1: 27-51 (2002) ) . Por tanto, una modulaciïn de la funciïn cerebral T mediante IVIG podrïa explicar el efecto beneficioso desde el punto de vista terapïutico de las IVIG observado en los pacientes de EM.

Recientemente se ha observado que las IVIG son un tratamiento alternativo eficaz para aquellos pacientes que sufren esclerosis mïltiple recurrente-remitente (EMRR) (Elovaara l. y col., Intravenous Immunoglobulin is effective and well tolerated in the treatment of MS Relapse, manuscript submitted) . Debido a que se cree que las cïlulas T perifïricas auto-reactivas son las responsables de la inflamaciïn cerebral en la EM, se asume la tarea de identificar los genes que estïn regulados de forma diferencial en las cïlulas T perifïricas de pacientes con EM en grado de exacerbaciïn aguda tratados con IVIG. Se llegï a la conclusiïn de que las diferencias en los perfiles de expresiïn gïnica podrïan facilitar informaciïn importante sobre los potenciales mecanismos de acciïn del tratamiento con IVIG.

Ademïs, los cambios observados en los perfiles de expresiïn genïtica podrïan facilitar marcadores de pronïstico que predijesen el ïxito del tratamiento. Dichos marcadores podrïan tambiïn ayudar a identificar los objetivos de desarrollo de nuevos agentes terapïuticos.

El documento WO 02/059604 se refiere a mïtodos y composiciones para la detecciïn, diagnïstico y pronïstico de la esclerosis mïltiple, asï como para controlar la eficacia de diversos tratamientos. El documento WO 02/059604 tambiïn se refiere a la identificaciïn de aquellos pacientes con una mayor probabilidad de respuesta a un tratamiento terapïutico especïfico.

El documento WO 2005/027733 se refiere a marcadores biolïgicos de la esclerosis mïltiple y a su utilizaciïn para el diagnïstico y aplicaciones clïnicas de la enfermedad.

Asimismo, un nïmero cada vez mayor de evidencias sugieren que la inflamaciïn cerebral tiene una funciïn especïfica no sïlo en el caso de la EM, sino tambiïn en la patogïnesis de la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson (vïase, por ejemplo, Wilms y col., Curr. Pharm. Des. 13: 1925 (2007) ) . En microglias especïficas, las cïlulas inmunes innatas residentes desempeïan un papel principal en los procesos inflamatorios del cerebro y se sabe que estïn asociadas no sïlo a la EM, sino tambiïn a la Enfermedad de Alzheimer y la Enfermedad de Parkinson (vïanse, por ejemplo, Yamamoto y col., Am. J. Pathology 166: 1475 (2006) ; Huang y col., FASEB 19: 761 (2005) ; Kim y col., Exp. And Mol. Med. 38: 333 (2006) ) . Asï, la presente invenciïn proporciona nuevos marcadores de pronïstico que predicen el ïxito del tratamiento asociado a la administraciïn de un tratamiento con inmunoglobulina por vïa intravenosa, asï como nuevas dianas terapïuticas que pueden utilizarse para el tratamiento de la EM, por ejemplo esclerosis mïltiple recurrente-remitente (EMRR) , o de la enfermedad de Parkinson o de Alzheimer.

BREVE SUMARIO DE LA INVENCIïN

La presente invenciïn proporciona mïtodos para estudiar la eficacia del tratamiento de la esclerosis mïltiple segïn la reivindicaciïn 1.

El reactivo puede ser un ïcido nucleico, incluyendo un oligonucleïtido o un conjunto de cebadores de RT-PCR. En otros aspectos, la muestra es una muestra de sangre que puede contener cïlulas T. La muestra puede ser tambiïn lïquido cerebroespinal.

BREVE DESCRIPCIïN DE LAS FIGURAS

Figura 1: muestra el desarrollo de las puntuaciones EDSS en 10 pacientes de EMRR durante el tratamiento con IVIG. Los trazos de los recuadros, que contienen la mediana, los percentiles 25 y 75, la mïnima y la mïxima, muestran las puntuaciones EDSS de los pacientes durante la remisiïn, asï como antes y despuïs del tratamiento con IVIG durante la fase de relapso.

Figura 2: muestra que el tratamiento con IVIG no altera la composiciïn celular de cïlulas obtenidas por aislamiento de ARN. Se muestran los datos de expresiïn gïnica relativa obtenidos por anïlisis de microarray para CD3, CD4, CD8 y CD14. A la expresiïn gïcnica se asigna el dïa 0 el valor 1 y se compara con la expresiïn gïcnica el dïa 6 (A) y el dïa 26 (B) . Cada punto representa un paciente individual.

Figura 3: PCR en tiempo real, mostrando la expresiïn de genes representativos. Los grïficos de los recuadros contienen la mediana, los percentiles 25 y 75, la mïnima y la mïxima, muestran la expresiïn relativa de los genes indicados. La expresiïn gïnica se normalizï con respecto a un control endïgeno (gliceraldehïdo-3-fosfato-deshidrogenasa) . Los experimentos PCR en tiempo real se llevaron a cabo en tripletes, confirmïndose al menos en dos ocasiones en diferentes dïas.

DESCRIPCIïN DETALLADA DE LA INVENCIïN

En tïrminos generales, la esclerosis mïltiple (EM) se refiere a una enfermedad inflamatoria desmielinizante que afecta al sistema nervioso central (SNC) . Durante la evoluciïn de la EM, la mielina que rodea los axones neuronales se degenera, lo que resulta en una subsecuente degeneraciïn axonal. Se cree que la patogïnesis de la EM implica una respuesta autoinmune en la cual las cïlulas T atacan partes del sistema nervioso central, desencadenando... [Seguir leyendo]

1. Mïtodo para verificar la eficacia de un tratamiento intravenoso con inmunoglobulina (IVIG) de exacerbaciones agudas de esclerosis mïltiple recurrente-remitente en un sujeto, comprendiendo el mïtodo los pasos de:

(a) Poner en contacto una primera muestra biolïgica del sujeto tratado con IVIG con un reactivo que se une especïficamente a una secuencia de ïcido nucleico de quimioquina (motivo C-X-C) ligando 5 (CXCL5) ;

(b) Medir la expresiïn gïnica de CXCL5;

(c) Comparar la expresiïn gïnica de CXCL5 en la primera muestra procedente del sujeto tratado con

IVIG con la expresiïn gïnica del CXCL5 presente en una muestra de referencia procedente del sujeto obtenida con anterioridad al tratamiento con IVIG; y

(d) Determinar si el CXCL5 estï o no sobreexpresado o infraexpresado en la muestra procedente del sujeto tratado con IVIG en comparaciïn con la expresiïn gïnica del marcador en la muestra de referencia, verificando asï la eficacia del tratamiento con IVIG de la esclerosis mïltiple en el sujeto.

2. Mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque el reactivo es un ïcido nucleico.

3. Mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque el reactivo es un oligonucleïtido.

4. Mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque el reactivo es un conjunto de cebadores de PCR RT.

5. Mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque la muestra es una muestra de sangre.

6. Mïtodo segïn la reivindicaciïn 5, caracterizado porque la muestra de sangre comprende cïlulas T.

7. Mïtodo segïn la reivindicaciïn 1, caracterizado porque la muestra es lïquido cerebroespinal.

Fig. 1

Fig. 2 A-B Fig. 3 A-D