Micropartículas con EGF, procedimiento de preparación y uso.

Micropartículas con EGF, procedimiento de preparación y uso.

La presente invención se refiere a micropartículas que comprenden polímeros biocompatibles y el factor de crecimiento epidérmico.

Asimismo, se refiere al método de preparación de dichas micropartículas y a su uso para promover la cicatrización de heridas.

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DESCRIPCION

Micropartículas con EGF, procedimiento de preparación y uso

Campo de la invención

La presente invención pertenece al campo de la microencapsulación. En concreto, se refiere a micropartículas que comprenden polímeros biocompatibles y el factor de crecimiento epidérmico. Asimismo, se refiere al procedimiento de preparación de dichas micropartículas y a su uso para promover la cicatrización de heridas.

Antecedentes de la invención

El envejecimiento de la población se asocia a un aumento progresivo de las enfermedades crónicas y sus complicaciones. Como consecuencia de una combinación de factores asociados a la edad, tales como insuficiencia venosa, enfermedad arterial oclusiva, obesidad, inmovilidad, deficiencia de factores de crecimiento, diabetes mellitus, defectos neurológicos y carencias nutricionales, entre otros, se presentan heridas que deterioran notablemente la calidad de vida de los pacientes, limitando su autonomía, en especial cuando afectan a las extremidades inferiores. Los cambios morfológicos de la piel en las personas mayores debidos al paso del tiempo, pueden favorecer una mayor predisposición a que fuerzas mecánicas, por presión, roce o cizalla de escasa envergadura o presentes un breve periodo de tiempo puedan generar lesiones que, junto con los problemas de cicatrización asociados a las enfermedades crónicas, hacen que estas lesiones no curen, provocando heridas crónicas de difícil curación. Las heridas crónicas representan un importante problema sanitario desde el punto de vista epidemiológico, económico y social, asociado a una alta morbilidad en ancianos. Las heridas crónicas son un grupo complejo y heterogéneo, si bien, aproximadamente el 70% de las mismas pueden clasificarse como úlceras de presión, diabéticas o vasculares; siendo menos frecuentes las de causa inflamatoria, tumoral o por agentes físicos (por quemaduras o radiación) .

El cuidado convencional de heridas crónicas incluye terapias como el oxígeno hiperbárico, presión negativa, debridamiento quirúrgico o apósitos. Estas terapias son paliativas e incapaces de garantizar una adecuada regeneración tisular y cierre de la herida. También se ha empleado la aplicación tópica de factores de crecimiento para 2

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mejorar la cicatrización, aunque con poco éxito (Goldman R. Growth factors and chronic wound healing: past, present and future. Adv Skin Wound Care 2004; 17:24-35) .

El factor de crecimiento epidérmico (EGF, del inglés Epidermic Growth Factor) aumenta la proliferación de células epidérmicas y por ello, es importante para el proceso de cicatrización que depende de la mitosis y la migración de los queratinocitos y fibroblastos dermales. Sin embargo, las heridas agudas pueden segregar enzimas proteolíticas que reducen considerablemente la biodisponibilidad local del EGF y por tanto, su tiempo de interacción con el receptor. Por ello, para que el EGF ejerza su efecto mitogénico para lograr una efectiva cicatrización, se requiere una continua exposición del EGF con las células de por lo menos 6-12 h. En este sentido, en India se ha autorizado un gel tópico basado en el factor de crecimiento epidérmico recombinante humano (rhEGF, del inglés recombinant human Epidermic Growth Factor) , REGEN-D 150, para el tratamiento de úlceras de pie diabético grado I y II, que se ha de aplicar dos veces al día hasta la completa curación de la úlcera y que reduce la duración de la cicatrización. Del mismo modo, en Países como Argentina, Bolivia, Colombia, Cuba, México y Venezuela se comercializa una formulación basada en rhEGF, Heberprot-P, que aumenta la granulación de úlceras de pie diabético de alto grado tras su administración intralesional tres veces por semana.

El documento WO 2007/087759 describe un proceso de formulación de EGF en microesferas para prevenir la amputación del pie diabético, donde el EGF es encapsulado con una eficacia de encapsulación del 40-60% y la tasa de liberación del EGF es de 5 y 10 µg al día, durante 14 días. Chu et al. (Nanotechnology promotes the full-thickness diabetic wound healing effect of recombinant human epidermal growth factor in diabetic rats", Wound Repair Regen 2010; 15:499-505) describen nanopartículas con una eficacia de encapsulación de EGF de un 85, 6%, con un contenido de EGF del 2%, que muestran una liberación rápida (burst inicial) durante la primera hora y sostenida durante 24h. Sin embargo, aunque las formulaciones descritas en Chu et al. promueven, en comparación con grupos control, la proliferación de fibroblastos y el proceso de cicatrización en modelo de rata diabetizada con inducción de heridas profundas, para conseguir estos resultados, requieren de una administración diaria del factor de crecimiento debido a que las formulación empleada ejerce una liberación sostenida de un máximo de 24 horas. La administración repetida supone un inconveniente muy importante para el paciente, ya que, aumentar el número de dosis conlleva un aumento de padecer efectos adversos al tratamiento, una mayor 3

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probabilidad del incumplimiento del mismo y en los casos que se administre mediante inyecciones en la hérida, un rechazo por parte del paciente debido a la sensación dolorosa de las mismas.

Sorprendentemente, con las micropartículas de la presente invención, micropartículas que comprenden EGF y polímeros de ácido poliláctico-co-glicólico (PLGA) y alginato, se consiguen altas eficacias de encapsulación del EGF (de hasta el 88%) y una liberación sostenida del EGF durante al menos 30 días lo que permite obtener excelentes resultados de cicatrización, incluso con una única administración. Además, la tasa de liberación sostenida de EGF es del orden de nanogramos, lo que también supone una ventaja ya que exposiciones prolongadas a concentraciones más altas de EGF pueden favorecer la proliferación celular, lo que puede resultar agresivo para el organismo.

Objeto de la invención

La presente invención se refiere a una micropartícula (micropartícula de la invención) que comprende un polímero de PLGA, un polímero de alginato, y factor de crecimiento epidérmico.

En otro aspecto se refiere a una composición farmacéutica (composición farmacéutica de la invención) que comprende la micropartícula de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Asimismo, se refiere a la micropartícula de la invención para su uso como medicamento y a la micropartícula de la invención para su uso para promover la cicatrización de heridas en un individuo. También se refiere a la composición farmacéutica de la invención para su uso como medicamento y a la composición farmacéutica de la invención para su uso para promover la cicatrización de heridas en un individuo.

En otro aspecto se refiere a un kit que comprende la micropartícula de la invención o la composición farmacéutica de la invención para promover la cicatrización de heridas.

Por último, en otro aspecto se refiere a un procedimiento para preparar la micropartícula de la invención que comprende las siguientes etapas: 35 a. Adición de una solución de PLGA en un disolvente orgánico (solución orgánica de PLGA) sobre una solución que comprende alginato y factor de 4

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crecimiento epidérmico (solución de EGF y alginato) , y mezcla de la solución orgánica de PLGA y la solución de EGF y alginato, b. Adición de la emulsión obtenida en la etapa a) sobre una solución acuosa que comprende tensoactivo y cloruro de sodio (solución acuosa) , y mezcla de 5 la emulsión obtenida en la etapa a) y la solución acuosa, c. Adición de la emulsión obtenida en b) sobre una solución que comprende cloruro de sodio y cloruro de calcio (solución de cloruros) , y mezcla de la emulsión obtenida en la etapa b) y la solución de cloruros, d. Extracción del solvente, y 10 e. Aislamiento de la micropartícula.

Breve descripción de las figuras

Figura 1. Fotografías de microscopía electrónica de barrido (SEM) de las 15 micropartículas (A) MP4 (x2500) , (B) MP5 (x1000) , y (C) MP5- (x1000) .

Figura 2. Representación gráfica del porcentaje de liberación sostenida de EGF en función del tiempo en horas (A) y en días (B) .

Figura 3. Micrografías de cultivos de fibroblastos tratados con (A) Medio libre de suero, (B) 15 ng/mL micropartículas de EGF (C) 15 ng/ml EGF libre.

Figura 4. Fotografías de heridas de ratas tratadas con (A) Control sin tratar, (B) Control vehículo, (C) Control micropartícula vacía, (D) EGF libre y (E) Micropartículas con EGF.

Figura 5. Micrografías de muestras de heridas para la evaluación del grado de reepitelialización... [Seguir leyendo]

1. Micropartícula que comprende un polímero de ácido poliláctico-co-glicólico (PLGA) , un polímero de alginato, y factor de crecimiento epidérmico (EGF) .

2. Micropartícula según la reivindicación 1 donde el factor de crecimiento epidérmico es el factor de crecimiento epidérmico recombinante humano (rhEGF) .

3. Micropartícula según la reivindicación 1 ó 2 que comprende entre 82, 7% y 99, 897% (p/p) de PLGA, entre 0, 003% y 1, 5 % (p/p) de factor de crecimiento epidérmico y entre 0, 1% y 5% (p/p) de alginato, respecto al peso total de la micropartícula.

4. Micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores que además comprende 0, 1-10% (p/p) de albúmina sérica humana y 0, 1-0, 8% (v/p) de polietilenglicol respecto al peso total de la micropartícula.

5. Micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizada porque el factor de crecimiento epidérmico se libera durante al menos 30 días.

6. Micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores embebida en una matriz de fibrina.

7. Composición farmacéutica que comprende una micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

8. Uso de una micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para 20 la elaboración de un medicamento.

9. Uso de una micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para la elaboración de un medicamento para promover la cicatrización de heridas en un individuo.

10. Uso según la reivindicación anterior, donde las heridas se seleccionan del grupo

formado por úlceras de pie diabético, úlceras por presión, úlceras vasculares y combinaciones de las mismas.

11. Kit para promover la cicatrización de heridas que comprende una micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

12. Kit para promover la cicatrización de heridas que comprende una composición 30 farmacéutica según la reivindicación 7.

13. Procedimiento para preparar una micropartícula según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 que comprende las siguientes etapas:

a. Adición de una solución de PLGA en un disolvente orgánico (solución orgánica de PLGA) sobre una solución que comprende alginato y EGF

(solución de EGF y alginato) , y mezcla de la solución orgánica de PLGA y la solución de EGF y alginato, 23

b. Adición de la emulsión obtenida en la etapa a) sobre una solución acuosa que comprende tensoactivos y cloruro de sodio (solución acuosa) , y mezcla de la emulsión obtenida en la etapa a) y la solución acuosa,

c. Adición de la emulsión obtenida en b) a una solución que comprende cloruro

de sodio y cloruro de calcio (solución de cloruros) , y mezcla de la emulsión obtenida en la etapa b) y la solución de cloruros,

d. Extracción del solvente, y

e. Aislamiento de la micropartícula.

14. Procedimiento según la reivindicación anterior donde el disolvente orgánico de la 10 solución orgánica de PLGA es una mezcla de diclorometano y acetona (3:1) .

15. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13 ó 14 donde la solución acuosa de la etapa b) comprende NaCl al 5-10% (p/v) respecto al volumen total de la solución acuosa y la solución de cloruros de la etapa c) comprende NaCl al 5-10% (p/v) en volumen respecto al volumen total de la solución de cloruros y de 0, 6 al 1, 2 mM de CaCl2.

16. Procedimiento para la preparación de una micropartícula según la reivindicación 6 que comprende después de las etapas del procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 13-15 las siguientes etapas:

f. Liofilizar la micropartícula aislada en la etapa e) , y g. Embeber la micropartícula liofilizada obtenida en la etapa f) en una matriz de fibrina.