Método para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida.

Método para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida.

La presente invención se refiere a un método in vitro para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida caracterizado por comprender la detección de la expresión de al menos miR-142-3p, miR-140-5p, miR-15a, miR-520c-3p, miR-423-5p, miR-222, o miR-130b o cualquiera de sus combinaciones. También se refiere al uso de los mismos como biomarcadores de dicha enfermedad, a un kit para su detección y al uso in vitro del kit para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida. Además también se refiere al uso de inhibidores de miR-142-3p, miRl40-5p y miR-222 para el tratamiento de obesidad mórbida y al uso de miR-520c-3p, miR-15a, miR-130b y miR-423-5p o de cualquiera de sus combinaciones para el tratamiento de dicha enfermedad.

La presente invención se refiere a un método in vitro para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida caracterizado por comprender la detección de la expresión de microRNAs, donde dichos microRNAs son al menos miR-142-3p, miR-140-5p, miR- 15a, m¡R-520c-3p, miR-423-5p, miR-222, miR-130b, o cualquiera de sus combinaciones. Además también se refiere al uso de los mismos como biomarcadores de dicha enfermedad. Por tanto, la invención se podría encuadrar en el campo de la biomedicina.

ESTADO DE LA TÉCNICA ANTERIOR

La obesidad es un problema de salud mundial. Los sujetos obesos sufren una importante disminución de la calidad y esperanza de vida, así como de un mayor riesgo de padecer diabetes tipo 2, enfermedades cardiovasculares, problemas hepáticos y cáncer, entre otros (Calle EE, et al. Nat Rev Cáncer 2004; 4 (8):579-91). La composición corporal está muy probablemente determinada por la interacción entre la dotación genética con factores conductuales y ambientales. La ingesta de alimentos ricos en energía, especialmente cuando se combina con una actividad física reducida, contribuye a la alta prevalencia de la obesidad. Sin embargo, la existencia de un sistema fisiológico complejo que regula el balance de energía requiere una visión más amplia de este paradigma (Spiegelman BM, etal. Cell 2001; 104 (4):531-43).

En consecuencia se están realizando grandes esfuerzos para tratar de identificar los genes que influyen en la obesidad, para entender mejor su patogénesis, encontrar nuevas dianas para la práctica clínica habitual y permitir la predicción precoz de sus complicaciones metabólicas. Actualmente nuevas herramientas tales como las tecnologías de análisis genómico de alto rendimiento pueden resolver problemas frecuentes en la práctica clínica diaria, permitiendo un diagnóstico más precoz y preciso de las comorbilidades más frecuentes, y una mayor predicción y respuesta al tratamiento (Yang X, et al. Yi Chuan; 33 (8):829-46). Aunque los estudios genómicos en tejido adiposo han permitido importantes avances en la patogénesis de la obesidad

es necesario un método de diagnóstico, pronóstico y seguimiento de esta patología más adecuado y menos invasivo.

Los MicroRNAs (miRNAs) son pequeños ácidos ribonucléicos (RNAs) no codificantes pero altamente conservados. Desde su descubrimiento en 1993, los perfiles de expresión de miRNAs y sus funciones específicas están siendo ampliamente estudiados. A través de modificar la disponibilidad de RNAs mensajeros y la síntesis de proteínas, los miRNAs regulan muchos procesos celulares tales como el crecimiento, la proliferación, la diferenciación y la apoptosis celular (Schickel R, et al. Oncogene 2008; 27 (45):5959-74). Por otro lado, como la expresión de miRNAs está estrechamente relacionada con el comportamiento celular y el correcto desarrollo y funcionamiento de los tejidos corporales, los cambios en los perfiles de expresión miRNAs están siendo cada vez más estudiados en cáncer, osteoporosis, enfermedad isquémica y fallo cardíaco, entre otros (Hernando E. Clin Transí Oncol 2007;9(3):155- 60; lliopoulos D, et al. PLoS ONE 2008; 3 (11 ):e3740; Perera RJ, et al. BioDrugs 2007;21(2):97-104; van Rooij E, etal. Proc Nati Acad Sel U S A 2006; 103 (48):18255- 60; Ortega FJ, etal. PLoS One; 5 (2):e9022).

Estudios recientes han demostrado que los miRNAs no sólo están desregulados en los tejidos de sujetos con afecciones agudas y en pacientes con enfermedades sistémicas, sino también en la circulación (Zampetaki A, et al. Cardiovasc Res;93(4):555-62). De hecho, ha sido descrito que los miRNAs circulantes muestran un alto grado de reproducibilidad en los sujetos y que su presencia en plasma no cambia durante el día (Keller A, etal. Nat Methods;8(10):841-3).

DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN

En la presente invención se ha definido un patrón de expresión de miRNAs circulantes en la obesidad y estudiado los cambios derivados de la pérdida de peso. La presente invención se refiere por lo tanto a una firma de miRNAs circulantes en la obesidad y a un método de diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida en una muestra de plasma aislada de un sujeto.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a un método in vitro de obtención de

datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida caracterizado por la detección de la expresión de al menos un microRNA que se selecciona de la lista que comprende miR-142-3p, miR-140-Sp, miR-15a, miR-520c-3p, miR-423-5p, miR- 222 y miR-130b o cualquiera de sus combinaciones en una muestra biológica de un sujeto. En adelante nos referiremos a éste como al método primero de la invención.

En la presente invención el término obesidad mórbida (también llamada obesidad grave) se entiende como aquella obesidad que se caracteriza en adultos por un índice de masa corporal (IMC) igual o superior a 40 kg/m2.

Una realización preferida del primer aspecto de la invención se refiere al método que además comprende la detección de la expresión de al menos un microRNA que se selecciona de la lista que comprende miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR- 590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625, y miR-16-1 o cualquiera de sus combinaciones.

Las secuencias de nucleótidos para cada microRNA (miRNA, miR) están descritas en la base de datos conocida por el experto en la materia miRBase según el código indicado: miR-142-3p (SEQ ID NO: 1; MIMAT0000434), miR-140-5p (MIMAT0000431; SEQ ID NO: 2), miR-15a (MI0000069; SEQ ID NO: 3), miR-520c-3p (MIMAT0002846; SEQ ID NO: 4), miR-423-5p (MIMAT0004748; SEQ ID NO: 5), miR-222 (MIMA T0000279; SEQ ID NO:6), miR-130b (MI0000748; SEQ ID NO: 7), miR-532-5p (MIMAT0002888; SEQ ID NO: 8), miR-125b (MIMAT0000423; SEQ ID NO:9), miR-221 (MIMA T0000278; SEQ ID NO: 10), miR-21 (MI0000077; SEQ ID NO: 11), miR-590-5p (MIMAT0003258; SEQ ID NO: 12), miR-193a-5p (MIMAT0004614; SEQ ID NO: 13), miR-122 (MIMAT0000421; SEQ ID NO: 14), miR-483-5p (MIMAT0004761; SEQ ID NO: 15), miR-126 (MI0000471; SEQ ID NO: 16), miR-636 (MIMAT0003306; SEQ ID NO: 17), miR-625 (MIMAT0003294; SEQ ID NO: 18) y miR-16-1 (MIMAT0000069; SEQ ID NO:19).

Un segundo aspecto de la invención se refiere al método in vitro para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida en un sujeto caracterizado por comprender:

a. la detección de la expresión de al menos un microRNA que se selecciona de la lista que comprende: miR-142-3p, miR-140-5p, miR-

15a, miR-520c-3p, miR-222, miR-130b y miR-423-5p, o cualquiera de sus combinaciones;

b. la cuantificación de la expresión de al menos uno de los microRNA del paso (a);

c. la comparación de la expresión del paso (b) con la expresión de una muestra control;

d. la asociación de un aumento significativo de la expresión de al menos miR-142-3p, miR140-5p o miR-222; o la asociación de una disminución significativa de al menos miR-130b, miR-15a, miR-520c-3p o miR-423- 5p con obesidad mórbida.

En adelante nos referiremos a éste como al método segundo de la invención.

Una realización preferida del segundo aspecto de la invención se refiere al método donde en el paso (a) además también se detecta la expresión de al menos un microRNA que se selecciona de la lista que comprende: miR-532-5p, miR-125b, miR- 221, miR-21, miR-590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625, y miR-16-1, o cualquiera de sus combinaciones; y donde en el paso (d) la obesidad mórbida se asocia a un cambio en la expresión circulante del miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR-590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR- 126, miR-636, miR-625, o miR-16-1, o cualquiera de sus combinaciones.

Una realización preferida del método primero y del método segundo de la invención se refiere a estos donde la muestra biológica se selecciona de la lista que comprende tejido, mucosa oral, sangre, plasma, suero y linfa. Preferiblemente la muestra biológica es plasma.

Otra realización preferida del método primero y del método segundo de la invención se refiere a estos donde el sujeto es un humano. El método es válido tanto para hombres como para mujeres.

Otra realización preferida del primer y del segundo aspectos de la invención se refiere al método donde la detección de la expresión se realiza mediante la reacción en

cadena de la polimerasa a tiempo real. Preferiblemente mediante cebadores y sondas de hidrólisis.

Un tercer aspecto de la invención se refiere al uso in vitro de al menos un microRNA que se selecciona de la lista que comprende: miR-142-3p, miR140-5p, miR-15a, miR- 520c-3p, miR-222, miR-130b ymiR-423-5p, o cualquiera de sus combinaciones, como marcador diagnóstico y/o pronóstico... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro de obtención de datos útiles para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida caracterizado por la detección de la expresión de los microRNAs miR-15a, miR-520c-3p, miR-423-5p y miR-130b en una muestra biológica de un sujeto.

2. Método según la reivindicación 1 que además comprende la detección de la expresión de miR-142-3p, miR-140-5p y miR-222.

3. Método según la reivindicación 2 que además comprende la detección de la expresión de los microRNAs miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR-590- 5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625 y miR-16-1.

4. Método in vitro para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida en un sujeto caracterizado por comprender:

a. la detección de la expresión de los microRNAs: miR-15a, miR-520c-3p, miR-130by miR-423-5p;

b. la cuantificación de la expresión de los microRNAs del paso (a);

c. la comparación de la expresión del paso (b) con la expresión de una muestra control;

d. la asociación de una disminución significativa de miR-130b, miR-15a, miR-520c-3p y miR-423-5p con obesidad mórbida.

5. Método según la reivindicación 4 donde en el paso (a) además también se detecta la expresión de los microRNAs miR-142-3p, miR-140-5p y miR-222-, y donde en el paso (d) la obesidad mórbida también se asocia a un aumento significativo de la expresión de miR-142-3p, miR140-5py miR-222.

6. Método según la reivindicación 5 donde en el paso (a) además también se detecta la expresión de los microRNAs: miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR- 590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625 y miR- 16-1; y donde en el paso (d) la obesidad mórbida se asocia a un cambio en la

expresión circulante del miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR-590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625 o miR-16-1.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 donde la muestra biológica se selecciona de la lista que comprende tejido, mucosa oral, sangre, plasma, suero y linfa.

8. Método según la reivindicación 7 donde la muestra biológica es plasma.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 donde el sujeto es un humano.

10. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 donde la detección de la expresión se realiza mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real.

11. Uso in vitro de los microRNAs miR-15a, miR-520c-3p, miR-130b y miR-423-5p como marcador diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida en un sujeto.

12. Uso según la reivindicación 11 que además comprende el uso de los microRNAs miR-142-3p, miR140-5p y miR-222 como marcador diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida en un sujeto

13. Uso según la reivindicación 12 que además comprende el uso de los microRNAs miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR-590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625 y miR-16-1.

14. Kit que comprende cebadores y sondas que detectan los microRNAs miR-520c-3p, miR-15a, miR-130b y miR-423-5p en una muestra biológica de un sujeto.

15. Kit según la reivindicación 14 que además comprende cebadores y sondas que detectan miR-142-3p, miR140-5p y miR-222 en una muestra biológica de un sujeto.

16. Kit según la reivindicación 15 que además comprende cebadores y sondas que detectan los microRNAs miR-532-5p, miR-125b, miR-221, miR-21, miR-590-5p, miR-193a-5p, miR-122, miR-483-5p, miR-126, miR-636, miR-625y miR-16-1.

17. Uso in vitro del kit según cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16 para el diagnóstico y/o pronóstico de obesidad mórbida.

18. Uso de los microRNAs miR-520c-3p, miR-15a, miR-130b y miR-423-5p para el 5 tratamiento de obesidad mórbida y/o de las comorbilidades que se seleccionan de

la lista que comprende hipertensión, dislipemia, resistencia a la insulina y la diabetes tipo 2.