Medicamento para aplicación local.

Procedimiento para la preparación de una solución que contiene fibrinógeno que es almacenable a temperatura de frigorífico o temperatura ambiente,

caracterizado por que la solución de fibrinógeno se prepara a partir de fibrinógeno preparado por ingeniería genética o a partir de fibrinógeno producido a partir de plasma mediante fraccionamiento con glicina a temperaturas menores de 0 ºC.

Medicamento para aplicación local

El cierre de heridas y la hemostasia relacionada con el mismo se realizan fisiológicamente mediante la coagulación de la sangre derramada en el lecho de la herida, con lo que se efectúa el cierre de pequeños vasos sanguíneos y capilares. La curación de herida incipiente posterior se realiza con la ayuda de la matriz extracelular (MEC) provisional formada por la sangre coagulada (Clark, R.A.F. et al., 1982, J. Invest. Dermatol. 70: 264-269; Clark,

R. A.F.(ed.), 1996, "The Molecular and Cellular Biology of Wound Repair", Plenum Press, Nueva York). Esta matriz está compuesta, aparte de células sanguíneas, esencialmente por fibrina como sustancia estructural que sirve como reservorio para una serie de proteínas plasmáticas que son importantes para la curación de heridas incipiente, como fibronectina (Mosesson, M.W. y Umfleet, R., 1970, J. Biol. Chem. 245: 5726-5736; Clark, R.A.F. et al., 1982, J. Invest. Dermatol. 70: 264-269), vitronectina (Preissner, K.T. y Jenne, D., 1991, Thromb. Haemost. 66: 189-194), plasminógeno (Castellino. F.J. etal., 1983, Ann. NY Acad. Sci. 408: 595-601), activador de plasminógeno (Thorsen,

S. et al., 1972, Thromb. Pathol. Haemost. 28: 65-74), inhibidor de activador de plasminógeno (Wagner, O.F. et al., 1989, Blood 70: 1645-1653) e inhibidor de plasmina a2 (Sakata, Y. y Aoki, N., 1980, J. Clin. Invest. 65: 290-297).

La cantidad de activador de plasminógeno, inhibidor de activador de plasminógeno e inhibidor de plasmina a2 y la relación entre ellos ejercen un control importante sobre el posterior proceso de degradación de la fibrina. En esta estructura de fibrina, están contenidas sin embargo también otras sustancias como, por ejemplo, trombina, TGF-p y PDGF, que son necesarias para la migración de células y la remodelación múltiple (reconstrucción) de la MEC provisional hasta la MEC definitiva con las correspondientes poblaciones celulares.

En primer lugar, migran en grandes cantidades granulocitos a la zona de la herida y al cierre de la herida. Liberan distintas sustancias importantes para el proceso de curación de la herida incipiente, particularmente colagenasas y elastasas, y destruyen los microorganismos extracelulares e intracelulares que acceden a la zona de la herida y pueden multiplicarse allí. Mientras la migración de granulocitos llega a su fin, aparecen en la zona de la herida cada vez más monocitos, incluyendo macrófagos. El tercer día, llega el brote de fibroblastos en la zona de la herida, que acceden hasta la superficie del cierre de la herida mediante las hebras de fibronectina. Después del crecimiento de los capilares sanguíneos, se llega a una serie de transformaciones celulares y procesos de remodelación que conducen en la mayoría de casos de nuevo a la integridad total del tejido dañado (Clark, R.A.F.(ed.), 1996, "The Molecular and Cellular Biology of Wound Repair", Plenum Press, Nueva York).

Los primeros ensayos, que datan ya de hace 80 a 90 años, de cierre de heridas con la ayuda de plasma sanguíneo no alcanzaron ningún éxito debido a la viscosidad relativamente baja en comparación con la sangre, de la baja adherencia al lecho de la herida y debido a la alta fragilidad del coágulo de plasma coagulado formado en todo caso por plasma.

El uso de soluciones de fibrinógeno enriquecidas en lugar de plasma para la hemostasia y para el cierre de heridas en principio no tuvo igualmente éxito, pero finalmente pudo conseguirse un éxito importante mediante la elevación de la concentración de fibrinógeno de dichas soluciones que contienen fibrinógeno a más de 10 veces el nivel de fibrinógeno en plasma (Lóblich, 1975, comunicación no publicada).

En la transformación de fibrinógeno en fibrina, existe la posibilidad de que se desprenda el cierre de herida de fibrina hemostático eficaz después de varias horas por enzimas del lecho de la herida y se llegue así a una hemorragia secundaria. El desprendimiento del cierre de herida de fibrina del lecho de la herida es el proceso esencialmente más frecuente, y por tanto más peligroso, en la fibrinólisis de todo el cierre de la herida de fibrina.

Ya en las primeras aplicaciones exitosas de soluciones de fibrinógeno de alta concentración (Matras, H. et al., 1972, Wr. Med. Wschr. 122: 517-523), la transformación de fibrinógeno en fibrina mediante trombina en la zona de la herida ha mostrado que pueden evitarse la retirada del cierre de herida de fibrina y las hemorragias secundarias que ocurren así la mayoría de veces mediante inhibidores de la fibrinólisis. De los inhibidores de bajo peso molecular experimentados, han podido encontrarse como eficaces el ácido s-aminocaprónico y derivados, sin embargo estos presentaban la desventaja de difundirse rápidamente desde la fibrina coagulada y desde la zona de la herida y por tanto perder su eficacia local.

La adición de inhibidores de alto peso molecular como, por ejemplo, aprotinina (Trasylol) ha podido llevarse a cabo exitosamente llegando a solo una lenta difusión del inhibidor a partir de la zona la herida, sin embargo con la desventaja de que se trata en este sentido de un inhibidor de proteasa bovino, y por tanto xenogénico, que puede causar alergias y anafilaxis potenciales. Últimamente, se han puesto objeciones contra el uso de materiales animales para aplicación parenteral a personas debido a la potencial capacidad de transmisión de zoonosis.

En el documento WO-A-99/11301, se hace la propuesta de usar inhibidores de elastasa u otros inhibidores eficaces contra proteasas leucocíticas en lugar de aprotinina. Esta propuesta ocasiona sin embargo, al entender del inventor de la presente invención, distintas desventajas. Ciertamente, estos inhibidores son eficaces directa o indirectamente mediante la inhibición de enzimas que pueden activar el sistema fibrinolítico, pero pueden alterar la iniciación de la

curación de heridas por migración de los granulocitos a la zona de la herida por una fuerte inhibición de las proteasas liberadas por granulocitos, como colagenasas y elastasas.

Otra dificultad en la preparación de medicamentos farmacéuticos que contienen fibrlnógeno y trombina que pueden contener un Inhibidor de proteasa alogénico y un zimógeno de transglutaminasa está dada por la inactivación vírica 5 necesaria desde hace largo tiempo de dichos preparados. Con la inactivación vírica, se pierde la mayoría de veces una gran parte de la actividad del inhibidor de proteasa o zimógeno de transglutaminasa contenido en el preparado, de modo que los preparados obtenidos después de la práctica de la inactivación vírica a menudo presentan ya solo una baja actividad del inhibidor de proteasa o zimógeno de transglutaminasa. Por ello, puede llegarse a una inhibición insuficiente de las enzimas fibrinolíticas presentes en el lecho de la herida y como consecuencia a la 10 liberación del cierre de herida de fibrina del lecho de la herida.

Las soluciones concentradas de fibrinógeno presentan una serie de desventajas. Son de baja estabilidad al almacenamiento, deben congelarse o liofilizarse para almacenamiento y no siempre pueden volverse satisfactoriamente utilizables o reconstituirse mediante descongelación o redisolución. Además, la disolución de un liofilizado de fibrinógeno ocupa largo tiempo. Los solubilizantes o fibrinógenos fácilmente solubles son tóxicos 15 celulares la mayoría de veces y por tanto no procedentes para una curación de heridas sin problemas.

La mayor dificultad en el almacenamiento de productos que contienen fibrinógeno es la inestabilidad del fibrinógeno, ya que las trazas de impurezas con factores de coagulación causan una transformación lenta de fibrinógeno en fibrina ¡nsoluble, lo que no permite ya entonces la aplicación de dicho preparado farmacéutico.

La presente invención evita esta desventaja.

Por tanto, la presente invención se refiere a un procedimiento para la preparación de una solución que contiene fibrinógeno que es estable a temperatura de frigorífico o temperatura ambiente y que se caracteriza porque la solución de fibrinógeno se prepara a partir de fibrinógeno preparado por ingeniería genética o fibrinógeno producido a partir de plasma mediante fraccionamiento con glicina a temperaturas menores de 0 °C.

Las soluciones que contienen fibrinógeno preparadas según la invención son estables y pueden almacenarse en 25 estado líquido con o sin estabilizadores durante dos años a una temperatura de 4-8° C, o congeladas o liofilizadas, sin que precipite a este respecto fibrina insoluble o se formen productos de disociación de fibrinógeno por la generación de plasmina durante el almacenamiento en una medida que perjudique la coagulabilidad. Dichas soluciones no coagulan... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para la preparación de una solución que contiene fibrinógeno que es almacenable a temperatura de frigorífico o temperatura ambiente, caracterizado por que la solución de fibrinógeno se prepara a 5 partir de fibrinógeno preparado por ingeniería genética o a partir de fibrinógeno producido a partir de plasma mediante fraccionamiento con glicina a temperaturas menores de 0 °C.