Inhibidores de proteasa de epoxi-cetona tripeptídica cristalina.

Compuesto cristalino que tiene una estructura de fórmula (II)**Fórmula**

Inhibidores de proteasa de epoxi-cetona tripeptídica cristalina Antecedentes de la invención

En eucariotas, la degradación de proteínas se media predominantemente a través de la ruta de ubiquitina en la que proteínas seleccionadas como diana para destrucción se ligan al polipéptido de 76 aminoácidos ubiquitina. Una vez seleccionadas como diana, las proteínas ubiquitinadas sirven entonces como sustratos para el proteasoma 26S, una proteasa multicatalítica, que escinde proteínas para dar péptidos cortos a través de la acción de sus tres actividades proteolíticas principales. Aunque tiene una función general en el recambio proteico intracelular, la degradación mediada por proteasomas también desempeña un papel clave en muchos procesos tales como presentación de antígenos por el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase I, apoptosis, regulación del crecimiento celular, activación de NF-kB, procesamiento de antígenos y transducción de señales proinflamatorias.

El proteasoma 2S es un complejo de proteasas multicatalítico de forma cilindrica de 7 kDa compuesto por 28 subunidades organizadas en cuatro anillos. En la levadura y otros eucariotas, 7 subunidades a diferentes forman los anillos exteriores y 7 subunidades p diferentes comprenden los anillos interiores. Las subunidades a sirven como sitios de unión para los complejos reguladores 19S (PA7) y 11S (PA28), así como de barrera física para la cámara proteolítica interior formada por los dos anillos de subunidades p. Por tanto, in vivo, se cree que el proteasoma existe como una partícula 26S ("el proteasoma 26S"). Experimentos in vivo han mostrado que la inhibición de la forma 2S del proteasoma puede correlacionarse fácilmente con la inhibición del proteasoma 26S. La escisión de prosecuencias amino terminales de las subunidades p durante la formación de la partícula expone residuos de treonina amino terminales, que sirven como nucleófilos catalíticos. Las subunidades responsables de la actividad catalítica en los proteasomas tienen por tanto un residuo nucleófilo amino terminal, y estas subunidades pertenecen a la familia de las nucleófilo hidrolasas N-terminales (Ntn) (en las que el residuo nucleófilo N-terminal es, por ejemplo, Cys, Ser, Thr y otros restos nucleófilos). Esta familia incluye, por ejemplo, penicilina G acilasa (PGA), penicilina V acilasa (PVA), glutamina PRPP amidotransferasa (GAT) y glucosilasparaginasa bacteriana. Además de las subunidades p expresadas de manera ubicua, los vertebrados superiores también tienen tres subunidades p inducibles por ¡nterferón-y (LMP7, LMP2 y MECL1), que reemplazan a sus homólogos normales, Ps, pi y P7 respectivamente, alterando así las actividades catalíticas del proteasoma. A través del uso de diferentes sustratos peptídicos, se han definido tres actividades proteolíticas principales para el proteasoma 2S de eucariotas: actividad de tipo quimotripsina (CTL), que escinde después de grandes residuos hidrófobos; actividad de tipo tripsina (T-L), que escinde después de residuos básicos; y actividad hidrolizante del péptido de peptidilglutamilo (PGPH), que escinde después de residuos ácidos. También se han atribuido al proteasoma dos actividades menos caracterizadas adicionales: actividad BrAAP, que escinde después de aminoácidos de cadena ramificada; y actividad SNAAP, que escinde después de aminoácidos neutros pequeños. Las principales actividades proteolíticas del proteasoma parecen recibir la contribución de diferentes sitios catalíticos, puesto que inhibidores, mutaciones puntuales en subunidades (3 y el intercambio de subunidades p que se inducen por ¡nterferón-y alteran estas actividades en diversos grados.

El documento WO 28/14782 da a conocer inhibidores de proteasomas.

El artículo de Caira et al, Topics in Current Chemistry, vol. 198, páginas 163-28, 1998, comenta el polimorfismo cristalino en compuestos orgánicos.

El libro Vogels Textbook of Practical Organic Chemistry, vol. 5, páginas 135, 141, da a conocer técnicas de cristalización.

Se necesitan composiciones y métodos mejorados para preparar y formular inhibidor(es) de proteasomas.

Sumario de la invención

Un aspecto de la invención se refiere a compuestos cristalinos según las reivindicaciones.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 muestra un termograma de DSC (calorimetría diferencial de barrido) del compuesto 1 cristalino.

La figura 2 muestra un espectro de XRPD (difracción de rayos X de polvo) del compuesto 1 cristalino.

La figura 3 muestra un termograma de TG del compuesto 1 cristalino.

La figura 4 muestra termogramas modulados del compuesto 1 amorfo, flujo de calor reversible (abajo) y flujo de calor no reversible (arriba).

La figura 5 muestra una comparación de termogramas de DSC del compuesto 1 cristalino preparado según el ejemplo 2 (centro), el ejemplo 3 (arriba) y el ejemplo 4 (abajo).

La figura 6 muestra un espectro de XRPD del compuesto 1 amorfo preparado según el ejemplo 1 (abajo), en comparación con los espectros de XRPD del compuesto 1 cristalino preparados según el ejemplo 2 (arriba), el ejemplo 3 (2o desde abajo) y el ejemplo 4 (2o desde arriba).

La figura 7 muestra un termograma de TG del compuesto 1 amorfo.

Descripción detallada de la invención

En determinadas realizaciones, la Invención se refiere a un compuesto cristalino de fórmula (II)

(II)

Tales compuestos pueden prepararse mediante un método para la preparación de un compuesto cristalino de fórmula (II), que comprende uno o más de: (i) preparar el compuesto amorfo, por ejemplo, según la solicitud de patente estadounidense n.° 11/595.84; (ii) disolver el compuesto amorfo en un disolvente orgánico; (iii) llevar la disolución a supersaturación; (iv) aislar los cristales, por ejemplo, mediante filtración de los cristales, mediante decantación de fluidos de los cristales, o mediante cualquier otra técnica de separación adecuada; y (v) lavar los cristales. En determinadas realizaciones, la preparación comprende además inducir cristalización. En determinadas realizaciones, la preparación comprende además secar, preferiblemente a presión reducida, tal como a presión de vacío.

En determinadas realizaciones, el compuesto amorfo puede disolverse en un disolvente seleccionado de acetonitrilo, acetato de etilo, heptanos, hexanos, acetato de ¡sopropilo, metanol, metil etil cetona, tetrahidrofurano, tolueno y agua, o cualquier combinación de los mismos. En determinadas realizaciones, el compuesto amorfo de fórmula (II) puede disolverse en un disolvente orgánico seleccionado de acetonitrilo, heptanos, hexanos, metanol, tetrahidrofurano y tolueno, o cualquier combinación de los mismos. En determinadas realizaciones preferidas, el disolvente orgánico es tolueno, tetrahidrofurano o acetonitrilo, preferiblemente acetonitrilo o tolueno.

En determinadas realizaciones, llevar la disolución a supersaturación comprende la adición lenta de un antldlsolvente, tal como agua, heptanos, hexanos u otro líquido polar o no polar miscible con el disolvente orgánico, permitir que la disolución se enfríe (con o sin siembra de la disolución), reducir el volumen de la disolución, o cualquier combinación los mismos. En determinadas realizaciones, llevar la disolución a supersaturación comprende añadir un antldlsolvente, enfriar la disolución hasta temperatura ambiental o inferior, y reducir el volumen de la disolución, por ejemplo, mediante la evaporación del disolvente de la disolución. En determinadas realizaciones, permitir que la disolución se enfríe puede realizarse de manera pasiva (por ejemplo, permitiendo que la disolución permanezca a temperatura ambiental) o activa (por ejemplo, enfriando la disolución en un baño de hielo o congelador).

En determinadas realizaciones, el método comprende además inducir precipitación o cristalización. En determinadas realizaciones, inducir precipitación o cristalización comprende una nucleación secundaria, en la que la nucleación se produce en presencia de cristales simiente o interacciones con el entorno (paredes del cristalizador, impulsores de agitación, sonicación, etc.).

En determinadas realizaciones, lavar los cristales comprende lavar con un líquido seleccionado de antidisolvente, acetonitrilo, heptanos, hexanos, metanol, tetrahidrofurano, tolueno, agua, o una combinación de los mismos. En determinadas realizaciones, los cristales se lavan con una combinación de antidisolvente y el disolvente orgánico. En determinadas realizaciones, el antidisolvente es agua, mientras que en otras realizaciones es un disolvente de alcano, tal como hexano o pentano, o un disolvente hidrocarbonado aromático, tal como benceno,... [Seguir leyendo]

Compuesto cristalino que tiene una estructura de fórmula (II)

Compuesto cristalino según la reivindicación 1, que tiene un punto de fusión de 14 a 155°C. Compuesto cristalino según la reivindicación 2, que tiene un punto de fusión de 145 a 15°C.

Compuesto cristalino según la reivindicación 1, que tiene valores de 29 de 8,94; 9,39; 9,76; 1,6; 11,9; 12,74; 15,27; 17,74; 18,96; 2,58; 2,88; 21,58; 21,78; 22,25; 22,8; 24,25; 24,66; 26,4; 26,44; 28,32; 28,96; 29,65; 3,22; 3,46; 3,78; 32,17; 33,65; 34,49; 35,8; 35,33; 37,85; 38,48.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de cáncer.

Compuesto cristalino según la reivindicación 5, en el que el cáncer se selecciona del grupo que consiste en: cánceres hematológicos, macroglobulinemia de Waldenstróm, mieloma múltiple, linfoma difuso de células B, linfoma de células del manto, cáncer de páncreas y cáncer de pulmón.

Compuesto cristalino según la reivindicación 6, en el que el cáncer es mieloma múltiple.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunltarla.

Compuesto cristalino según la reivindicación 8, en el que la enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste en: lupus, artritis reumatoide y presentación de antígenos.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de un estado relacionado con injerto o trasplante.

Compuesto cristalino según la reivindicación 1, en el que el estado relacionado con injerto o trasplante es enfermedad de injerto contra huésped.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de la inflamación.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de un estado asociado con fibrosis.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de un estado relacionado con isquemia.

Compuesto cristalino según la reivindicación 15, en el que el estado relacionado con isquemia es insuficiencia cardiaca.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de una infección.

Compuesto cristalino según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en el tratamiento de una enfermedad asociada con pérdida ósea.

Compuesto cristalino según la reivindicación 18, en el que la enfermedad asociada con pérdida ósea es osteoporosis.