Glicosilación de péptidos a través de secuencias de glicosilación con unión en O.

Un conjugado covalente entre un polipéptido del secuón glicosilado o no glicosilado y un grupo de modificación polimérico,

correspondiendo dicho polipéptido del secuón a un polipéptido precursor y comprendiendo una secuencia de glicosilación con unión en O exógena, estando dicho grupo de modificación polimérico conjugado a dicho polipéptido del secuón en dicha secuencia de glicosilación con unión en O a través de un grupo de unión a glicosilo, en el que dicho grupo de unión a glicosilo está interpuesto entre y unido covalentemente tanto a dicho polipéptido del secuón como a dicho grupo de modificación polimérico, con la condición de que dicho polipéptido precursor no sea un miembro seleccionado entre hormona de crecimiento humano (hGH), factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF), interferón-alfa (INF-alfa), péptido-1 de tipo glucagón (GLP-1) y factor de crecimiento de 10 fibroblastos (FGF), en el que dicha secuencia de glicosilación con unión en O exógena es un miembro seleccionado entre: (X)mPTP, (X)mPTEI(P)n, (X)mPTQA(P)n, (X)mPTINT(P)n, (X)mPTTVS(P)n, (X)mPTTVL(P)n, (X)mPTQGAM(P)n, (X)mTET(P)n, (X)mPTVL(P)n, (X)mPTLS(P)n, (X)mPTDA(P)n, (X)mPTEN(P)n, (X)mPTQD(P)n, (X)mPTAS(P)n, (X)mPTQGA(P)n, (X)mPTSAV(P)n, (X)mPTTLYV(P)n, (X)mPSSG(P)n y (X)mPSDG(P)n,

m y n son números enteros seleccionados independientemente entre 0 y 1;

P es prolina; y

X es un miembro seleccionado independientemente entre ácido glutámico (E), glutamina (Q), ácido aspártico (D), asparagina (N), treonina (T), serina (S) y aminoácidos sin carga.

Glicosilación de péptidos a través de secuencias de glicosilación con unión en O

Campo de la invención La invención pertenece al campo de la modificación de polipéptidos por glicosilación. En particular, la invención se refiere a un procedimiento de preparación de polipéptidos glicosilados usando secuencias cortas de glicosilación con unión en O reconocidas por enzimas.

Antecedentes de la invención La presente invención se refiere a la glicosilación y modificación de polipéptidos, preferentemente polipéptidos de valor terapéutico. La administración de polipéptido glicosilados y no glicosilados para engendrar una respuesta fisiológica particular es bien conocida en las artes medicinales. Por ejemplo, la hGH tanto recombinante como purificada se usan para el tratamiento de afecciones y enfermedades asociadas con la deficiencia de hGH, por ejemplo, enanismo en los niños. Otros ejemplos incluyen el interferón, que ha conocido actividad antiviral, así como el factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) , que estimula la producción de glóbulos blancos.

La falta de sistemas de expresión que se puedan usar para la fabricación de polipéptidos con patrones de glicosilación de tipo silvestre ha limitado el uso de dichos polipéptidos como agentes terapéuticos. En la técnica se sabe que los polipéptidos glicosilados de forma incorrecta o incompleta pueden ser inmunogénicos, lo que conduce a la rápida neutralización del péptido y/o el desarrollo de una respuesta alérgica. Otras deficiencias de glicopéptidos producidos de forma recombinante incluyen potencia subóptima y eliminación rápida del torrente sanguíneo de estructuras de glicanos existentes y la unión de restos de glicosilo a restos de aminoácidos no glicosilados. Una amplia selección de glicosiltransferasas eucariotas recombinantes se ha hecho disponible, haciendo posible la síntesis enzimática in vitro de glicoconjugados de mamífero con patrones de glicosilación con diseño personalizado y estructuras de glicosilo. Véase, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº 5.876.980; Nº 6.030.815; Nº 5.728.554; Nº 5.922.577; así como el documento de patente WO/9831826; documento de patente US2003180835; y documento de patente WO 03/031464.

Además, se han derivado glicopéptidos con uno o más grupos de modificación no sacáridos, tales como polímeros solubles en agua. Un polímero ejemplar que se ha conjugado con péptidos es el poli (etilenglicol) ("PEG") . La conjugación al PEG, que aumenta el tamaño molecular del polipéptido, se ha usado para reducir la inmunogenicidad y para prolongar el tiempo de eliminación de polipéptidos conjugados a PEG en circulación. Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 4.179.337 de Davis y col. divulga polipéptidos no inmunogénicos, tales como enzimas y hormonas polipeptídicas acopladas a polietilenglicol (PEG) o polipropilenglicol (PPG) .

El principal procedimiento para la unión de PEG y sus derivados a polipéptidos implica la unión no específica a través de un resto de aminoácido (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 4.088.538, Patente de Estados Unidos Nº 4.496.689, Patente de Estados Unidos Nº 4.414.147, Patente de Estados Unidos Nº 4.055.635, y documento PCT WO 87/00056) . Otro procedimiento de conjugación con PEG implica la oxidación no especifica de restos de glicosilo de un glipopéptido (véase, por ejemplo, el documento de patente WO 94/05332) .

En estos procedimientos no específicos, el PEG se añade aleatoria, no especifica a restos reactivos en una cadena principal polipeptídica. Este enfoque tiene inconvenientes significativos, que incluyen una falta de homogeneidad del producto final, y la posibilidad de actividad biológica o enzimática reducida del polipéptido modificado. Por lo tanto, es altamente deseable un procedimiento de derivación para polipéptidos terapéuticos que da como resultado la formación de un producto marcado específicamente, fácilmente caracterizable y sustancialmente homogéneo.

Agentes terapéuticos polipeptídicos homogéneos, modificados específicamente se pueden producir in vitro mediante el uso de enzimas. A diferencia de los procedimientos no específicos para la unión de un grupo de modificación, tal como un polímero sintético, a un polipéptido, las síntesis basadas en enzimas tienen las ventajas de regioselectividad y estereoselectividad. Dos clases principales de enzimas para su uso en la síntesis de polipéptidos marcados son las glicosiltransferasas (por ejemplo, sialiltransferasas, oligosacariltransferasas, N-acetilglucosaminiltransferasas) , y glicosidasas. Estas enzimas se pueden usar para la unión específica de azúcares que posteriormente se pueden alterar para que comprendan un grupo de modificación. Como alternativa, se pueden usar glicosiltransferasas y glicosidasas modificadas para transferir directamente azúcares modificados a una cadena principal del polipéptido (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Nº 6.399.336, y las Publicaciones de Solicitud de Patente de Estados Unidos Nº 20030040037, Nº 20040132640, Nº 20040137557, Nº 20040126838, y Nº 20040142856) . Además, se conocen procedimientos que combinan enfoques tanto químicos como enzimáticos ( (véase, por ejemplo, Yamamoto y col., Carbohydr. Res. 305: 415-422 (1998) y la Publicación de Solicitud de Patente de Estados Unidos Nº 20040137557) .

Los hidratos de carbono se unen a glicopéptidos de varias formas de los cuales los unidos en N a asparagina y los unidos en O a serina y treonina son los más relevantes para agentes terapéuticos de glicoproteína recombinante. La glicosilación con unión en O se encuentra en glicoproteína segregadas y asociadas a la superficie celular de todas las células eucariotas. Existe una gran diversidad en las estructuras creadas mediante glicosilación con unión en O.

Dichos glicanos se producen mediante la actividad catalítica de cientos de enzimas (glicosiltransferasas) que residen en el complejo de Golgi. La diversidad existe a nivel de la estructura de glicano y en posiciones de unión de O-glicanos a las estructuras principales de las proteínas. A pesar del alto grado de diversidad potencial, es evidente que la glicosilación con unión en O es un proceso altamente regulado que muestra un alto grado de conservación entre los organismos pluricelulares.

Los anticuerpos están glicosilados en posiciones conservadas en sus regiones constantes (Jefferis y Lund (1997) Chem. Immunol. 65: 111-128; Wright y Morrison (1997) TibTECH 15: 26-32) . Las cadenas laterales de oligosacáridos de anticuerpos influyen en su función (Wittwer y Howard. (1990) Biochem. 29:4175; Boyd y col., (1996) Mol. Immunol.

32: 1311) así como interacciones inter e intramoleculares (Goochee, y col., (1991) Bio/Technology, 9: 1347; Parekh, (1991) Curr. Opin. Struct. Biol., 1: 750; Hart, (1992) Curr. Opin. Cell Biol., 4: 1017; Jefferis y Lund mencionados anteriormente; Wyss y Wagner (1996) Curr. Opin. Biotech. 7: 409) .

Para la IgG humana, el oligosacárido núcleo normalmente consiste en GlcNAc2Man3 GlcNAc, con ligeras diferencias en los números de restos externos. Por ejemplo, la variación entre IgG individuales se produce a través de unión de galactosa y/o galactosa-ácidos siálico en los dos GlcNAc terminales a través de unión de una tercera rama de GlcNAc (GlcNAc bisectriz) . Se ha encontrado que la retirada del resto de hidrato de carbono, por escisión con glicosidasas o mutagénesis, afecta a la unión a C1q y FcγR y las respuestas corriente abajo tales como la activación de complementos y ADCC. (Leatherbarrow y col. Molec. Immunol. 22: 407-415 (1985) ; Duncan y col. Nature of the carbohydrate moiety, either by glycosidase cleavage or mutagenesis, has been found to affect binding to C1q and FcγR and the downstream responses such as complement activation and ADCC. (Leatherbarrow y col. Molec. Immunol. 22: 407-415 (1985) ; Duncan y col. Nature 332: 738-740 (1988) ; Walker y col. Biochem. J. 259: 347-353 (1989) ) . Cuando el hidrato de carbono está presente, la naturaleza de los restos de azúcar puede influir en las funciones efectuadas de IgG (Wright y col. J. Immunol. 160: 3393-3402 (1998) ) .

No todos los polipéptidos comprenden una secuencia de glicosilación como parte de su secuencia de aminoácidos. Además, las secuencias de glicosilación existentes pueden no ser adecuadas para la unión de un grupo de modificación. Dicha modificación puede causar, por ejemplo, una disminución indeseable de la actividad biológica del polipéptido modificado. Por lo tanto, existe una necesidad en la técnica de procedimientos que permitan tanto la creación precisa de secuencias de glicosilación dentro de la secuencia... [Seguir leyendo]

1. Un conjugado covalente entre un polipéptido del secuón glicosilado o no glicosilado y un grupo de modificación polimérico, correspondiendo dicho polipéptido del secuón a un polipéptido precursor y comprendiendo una secuencia de glicosilación con unión en O exógena, estando dicho grupo de modificación polimérico conjugado a dicho 5 polipéptido del secuón en dicha secuencia de glicosilación con unión en O a través de un grupo de unión a glicosilo, en el que dicho grupo de unión a glicosilo está interpuesto entre y unido covalentemente tanto a dicho polipéptido del secuón como a dicho grupo de modificación polimérico, con la condición de que dicho polipéptido precursor no sea un miembro seleccionado entre hormona de crecimiento humano (hGH) , factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) , interferón-alfa (INF-alfa) , péptido-1 de tipo glucagón (GLP-1) y factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) , en el que dicha secuencia de glicosilación con unión en O exógena es un miembro seleccionado entre: (X) mPTP, (X) mPTEI (P) n, (X) mPTQA (P) n, (X) mPTINT (P) n, (X) mPTTVS (P) n, (X) mPTTVL (P) n, (X) mPTQGAM (P) n, (X) mTET (P) n, (X) mPTVL (P) n, (X) mPTLS (P) n, (X) mPTDA (P) n, (X) mPTEN (P) n, (X) mPTQD (P) n, (X) mPTAS (P) n, (X) mPTQGA (P) n, (X) mPTSAV (P) n, (X) mPTTLYV (P) n, (X) mPSSG (P) n y (X) mPSDG (P) n, m y n son números enteros seleccionados independientemente entre 0 y 1;

P es prolina; y X es un miembro seleccionado independientemente entre ácido glutámico (E) , glutamina (Q) , ácido aspártico (D) , asparagina (N) , treonina (T) , serina (S) y aminoácidos sin carga.

2. El conjugado covalente de la reivindicación 1, en el que dicho grupo de modificación polimérico es un miembro seleccionado entre lineal y ramificado y comprende uno o más restos de polímero, en el que cada resto de polímero es seleccionado independientemente, en el que opcionalmente dicho resto de polímero es un miembro seleccionado entre poli (etilenglicol) y metoxi-poli (etilenglicol) (m-PEG) .

3. El conjugado covalente de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que dicho grupo de unión a glicosilo es un grupo de unión a glicosilo intacto, en el que opcionalmente el conjugado covalente comprende un resto de acuerdo con la Fórmula (III) :

en la que R9 es H, una carga negativa o un contraión salino; y RP es un miembro seleccionado entre:

en las que n es un número entero seleccionado de 1 a 20 y f y e son números enteros seleccionados independientemente entre 1-2500.

4. Un conjugado de polipéptido que comprende un polipéptido del secuón, correspondiendo dicho polipéptido del secuón a un polipéptido precursor y teniendo una secuencia de glicosilación con unión en O exógena, comprendiendo dicho conjugado de polipéptido un resto de acuerdo con la Fórmula (V) :

en la que

w es un número entero seleccionado entre 0 y 1; q es un número entero seleccionado entre 0 y 1; AA-O-es un resto derivado de un aminoácido que tiene una cadena lateral sustituida con un grupo hidroxilo, estando colocado dicho aminoácido dentro de dicha secuencia de glicosilación con unión en O, en el que opcionalmente dicho aminoácido es serina (S) o treonina (T) ; Z* es un miembro seleccionado entre un resto de glicosilo y un grupo de unión a glicosilo, en el que opcionalmente Z* es un miembro seleccionado entre GalNAc, GalNAc-Gal, GalNAc-Gal-Sia y GalNAc-Sia; y X* es un miembro seleccionado entre un grupo de modificación polimérico y un grupo de unión a glicosilo unido covalentemente a un grupo de modificación polimérico, con la condición de que dicho polipéptido precursor no sea un miembro seleccionado entre hormona de crecimiento humano (hGH) , factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) , interferón-alfa (INF-alfa) , péptido-1 de tipo glucagón (GLP-1) y factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) , en el que dicha secuencia de glicosilación con unión en O exógena es un miembro seleccionado entre: (X) mPTP, (X) mPTEI (P) n, (X) mPTQA (P) n, (X) mPTINT (P) n, (X) mPTTVS (P) n, (X) mPTTVL (P) n, (X) mPTQGAM (P) n, (X) mTET (P) n, (X) mPTVL (P) n, (X) mPTLS (P) n, (X) mPTDA (P) n, (X) mPTEN (P) n, (X) mPTQD (P) n, (X) mPTAS (P) n, (X) mP-TQGA (P) n, (X) mPTSAV (P) n, (X) mPTTLYV (P) n, (X) mPSSG (P) n y (X) mPSDG (P) n m y n son números enteros seleccionados independientemente entre 0 y 1; P es prolina; y X es un miembro seleccionado independientemente entre ácido glutámico (E) , glutamina (Q) , ácido aspártico (D) , asparagina (N) , treonina (T) , serina (S) y aminoácidos sin carga.

5. El conjugado de polipéptido de acuerdo con la reivindicación 4, en el que dicho grupo de modificación polimérico es un miembro seleccionado entre lineal y ramificado y comprende uno o más restos de polímero, en el que cada uno de dichos restos de polímero es seleccionado independientemente, en el que opcionalmente dicho resto polimérico es un miembro seleccionado entre poli (etilenglicol) y derivados del mismo.

6. El conjugado de polipéptido de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que w es 1, opcionalmente

o bien:

en el que X* comprende un resto, que es un miembro seleccionado entre un resto de sialilo (Sia) , un resto de galactosilo (Gal) , un resto de GalNAc y un resto de Gal-Sia, o en el que X* comprende un resto de acuerdo con la Fórmula (VI) :

en la que E es un miembro seleccionado entre O, S, NR27 y CHR28 , en el que R27 y R28 son miembros seleccionados independientemente entre H, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir y heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir; E1 es un miembro seleccionado entre O y S; R2 es un miembro seleccionado entre H, -R1, -CH2R1, y -C (X1) R1, en los que R1 es un miembro seleccionado entre OR9, SR9, NR10R11, alquilo sustituido o sin sustituir y heteroalquilo sustituido o sin sustituir en el que R9 es un miembro seleccionado entre H, una carga negativa, un ión metálico, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir y acilo; R10 y R11 son miembros seleccionados independientemente entre H, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir y acilo; X1 es un miembro seleccionado entre alquenilo sustituido o sin sustituir, O, S y NR8 en el que R8

es un miembro seleccionado entre H, OH, alquilo sustituido o sin sustituir y heteroalquilo sustituido o sin sustituir; Y es un miembro seleccionado entre CH2, CH (OH) CH2, CH (OH) CH (OH) CH2, CH, CH (OH) CH; CH (OH) CH (OH) CH, CH (OH) , CH (OH) CH (OH) , y CH (OH) CH (OH) CH (OH) ; Y2 es un miembro seleccionado entre H, OR6, R6, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir,

en las que R6 y R7 son miembros seleccionados independientemente entre H, La-R6b, C (O) R6b, C (O) -La-R6b, alquilo sustituido o sin sustituir y heteroalquilo sustituido o sin sustituir, en los que R6b es un miembro seleccionado entre H, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir y un grupo de modificación; R3, R3' y R4 son miembros seleccionados independientemente entre H, OR3", SR3", alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, -La-R6c, -C (O) -La-R6c, -NH-La-R6c, =N-La-R6c y -NHC (O) -La-R6c en los que R3" es un miembro seleccionado entre H, alquilo sustituido o sin sustituir y heteroalquilo sustituido o sin sustituir; y R6c es un miembro seleccionado entre H, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir, NR13R14 y un grupo de modificación, en el que R13 y R14 son miembros seleccionados independientemente entre H, alquilo sustituido o sin sustituir y heteroalquilo sustituido o sin sustituir; y

cada La es un miembro seleccionado independientemente entre un enlace y un grupo de engarce, y si X* comprende un resto de acuerdo con la fórmula (VI) , en la que además opcionalmente X* comprende un resto de acuerdo con la Fórmula (VII) :

o en la que al menos uno de R6b y R6c es un miembro seleccionado entre:

en los que s, j y k son números enteros seleccionados independientemente de 0 a 20; cada n es un número entero seleccionado independientemente de 0 a 2500; m es un número entero de 1-5; Q es un miembro seleccionado entre H y alquilo C1-C6; R16 y R17 son restos de polímero seleccionados independientemente; X2 y X4 son fragmentos de unión seleccionados independientemente que unen restos de polímero R16 y R17 a C; X5 es un grupo no reactivo distinto de un resto de polímero; y A1, A2, A3, A4, A5, A6, A7, A8, A9, A10 y A11 son miembros seleccionados independientemente entre H, alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, -NA12A13, -OA12 y -SiA12A13 en los que

A12

y A13 son miembros seleccionados independientemente entre alquilo sustituido o sin sustituir, heteroalquilo sustituido o sin sustituir, heterocicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, and heteroarilo sustituido o sin sustituir.

7. Un polipéptido del secuón que corresponde a un polipéptido precursor, en el que dicho polipéptido del secuón comprende una secuencia de glicosilación con unión en O exógena seleccionada entre SEC ID Nº : 1 y SEC ID Nº : 2:

(X) m P O* U (B) p (Z) r (J) s (O) t (P) n (SEC ID Nº : 1) ;

y

(X) m (B1) p T U B (Z) r (J) s (P) n (SEC ID Nº : 2)

en las que

m, n, p, r, s y t son números enteros seleccionados independientemente entre 0 y 1; P es prolina; O* es un miembro seleccionado entre serina (S) y treonina (T) ; U es un miembro seleccionado entre prolina (P) , ácido glutámico (E) , glutamina (Q) , ácido aspártico (D) , asparagina (N) , treonina (T) , serina (S) y aminoácidos sin carga; X, B y B1 son miembros seleccionados independientemente entre ácido glutámico (E) , glutamina (Q) , ácido aspártico (D) , asparagina (N) , treonina (T) , serina (S) y aminoácidos sin carga; y Z, J y O son miembros seleccionados independientemente entre ácido glutámico (E) , glutamina (Q) , ácido aspártico (D) , asparagina (N) , treonina (T) , serina (S) , tirosina (Y) , metionina (M) y aminoácidos sin carga, con la condición de que dicho polipéptido precursor no sea un miembro seleccionado entre hormona de crecimiento humano (hGH) , factor de estimulación de colonias de granulocitos (G-CSF) , interferón-alfa (INF-alfa) , péptido-1 de tipo glucagón (GLP-1) y factor de crecimiento de fibroblastos (FGF) , en el que dicha secuencia de glicosilación con unión en O exógena es un miembro seleccionado entre: (X) mPTP, (X) mPTEI (P) n, (X) mPTQA (P) n, (X) mPTINT (P) n, (X) mPTTVS (P) n, (X) mPTTVL (P) n, (X) mPTQGAM (P) n, (X) mTET (P) n, (X) mPTVL (P) n, (X) mPTLS (P) n, (X) mPTDA (P) n, (X) mPTEN (P) n, (X) mPTQD (P) n, (X) mPTAS (P) n, (X) mPTQGA (P) n, (X) mPTSAV (P) n, (X) mPTTLYV (P) n, (X) mPSSG (P) n y (X) mPSDG (P) n, m y n son números enteros seleccionados independientemente entre 0 y 1;

P es prolina; y X es un miembro seleccionado independientemente entre ácido glutámico (E) , glutamina (Q) , ácido aspártico (D) , asparagina (N) , treonina (T) , serina (S) y aminoácidos sin carga.

8. El conjugado covalente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, conjugado de polipéptido de cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 o polipéptido del secuón de la reivindicación 7, en el que dicha secuencia de glicosilación con unión en O exógena es un miembro seleccionado entre: PTP, PTEI, PTEIP, PTQA, PTQAP, PTINT, PTINTP, PTTVS, PTTVL, PTQGAM, PTQGAMP y TETP.

9. El conjugado covalente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y 8, conjugado de polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6 y 8 o polipéptido del secuón de acuerdo con la reivindicación 7 u 8, en el que dicho polipéptido precursor es un miembro seleccionado entre proteína morfogenética ósea 2 (BMP-2) , proteína morfogenética ósea 7 (BMP-7) , proteína morfogenética ósea 15 (BMP-15) , neurotrofina-3 (NT-3) , proteasa del factor von Willebrand (vWF) , eritropoyetina (EPO) , α1-antitripsina (inhibidor de la proteasa α-1) , glucocerebrosidasa, activador de plasminógenos de tipo celular (TPA) , leptina, hirudina, uroquinasa, DNasa humana, insulina, proteína de superficie de la hepatitis B (HbsAg) , toxina-IL-2 de difteria quimérica, gonadotropina coriónica humana (hCG) , peroxidasa tiroidea (TPO) , alfa-galactosidasa, alfa-L-iduronidasa, beta-glucosidasa, alfa-galactosidasa A, α-glucosidasa ácida (maltasa ácida) , anti-trombina III (AT III) , hormona de estimulación de folículos, péptido 2 de tipo glucagón (GLP-2) , Factor VII, Factor VIII, Factor VII con el dominio B suprimido, Factor IX, Factor X, Factor XIII, proquinetisina, extendina-4, CD4, receptor del factor de necrosis tumoral (TNF-R) , α-CD2O, ligando-1 de la glicoproteína P-selectina (PSGL-1) , complemento, transferrina, molécula de adhesión celular dependiente de la glicosilación (GlyCAM) , molécula de adhesión de células neurales (N-CAM) , proteína de fusión de la región Fc de IgG del receptor de TNF, anticuerpo monoclonal anti-HER2, anticuerpo monoclonal para la proteína F del virus sincitial respiratorio, anticuerpo monoclonal para la proteína F del virus sincitial respiratorio, anticuerpo monoclonal para TNF-α, anticuerpo monoclonal para glicoproteína IIb/IIIa, anticuerpo monoclonal para CD20, anticuerpo monoclonal para VEGF-A, anticuerpo monoclonal para PSGL-1, anticuerpo monoclonal para CD4, anticuerpo monoclonal para a-CD3, anticuerpo monoclonal para EGF, anticuerpo monoclonal para antígeno carcinoembrionario (CEA) y anticuerpo monoclonal para el receptor de IL-2.

10. Un ácido nucleico aislado que codifica dicho polipéptido del secuón de cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9 o un vector de expresión o célula que comprende dicho ácido nucleico.

11. Una composición farmacéutica que comprende un conjugado covalente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, 8 y 9 o un conjugado de polipéptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, 8 y 9 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.