Procedimiento de diagnóstico de poliquistosis renal.

Un procedimiento de diagnóstico de un trastorno renal, que comprende detectar una proteína relacionada con Frizzled secretada (sFRP) en una muestra que contiene orina o suero obtenida de un individuo que sufre del trastorno renal o que es sospechoso de sufrir del trastorno renal,

en el que dicha sFRP es proteína relacionada con Frizzled secretada 5 (sFRP5) y en el que dicho trastorno renal es poliquistosis renal (PQR).

Procedimiento de diagnïstico de poliquistosis renal

La presente invenciïn se refiere al diagnïstico de poliquistosis renales (PQR) . La invenciïn proporciona procedimientos de diagnïstico de poliquistosis renales.

La poliquistosis renal (PQR) es una enfermedad hereditaria comïn asociada a insuficiencia renal. Aunque el crecimiento de quistes y la compresiïn del tejido circundante pueden explicar algo de pïrdida de tejido renal, la naturaleza de la insuficiencia renal progresiva en pacientes con PQR es desconocida.

La poliquistosis renal dominante autosïmica (PQRAD) se produce en aproximadamente 1 de 1000 seres humanos y produce enfermedad renal terminal (IRT) en mïs del 50 % de todos los pacientes afectados. La formaciïn de quistes se inicia durante la embriogïnesis, pero normalmente no pone en peligro la funciïn renal hasta mïs tarde en la vida. Las mutaciones de tanto PQR1 como PQR2 producen la enfermedad, pero sigue siendo inalcanzable por quï los quistes presentes en menos de un uno por ciento de todas las nefronas producen insuficiencia renal. Aunque la proliferaciïn persistente, la secreciïn de fluido y la expansiïn de quistes pueden daïar el tejido circundante por cambios reactivos de la matriz extracelular, la apoptosis aumentada del parïnquima sano parece ser el principal culpable de la insuficiencia renal progresiva. Las cïlulas epiteliales aisladas de riïones quïsticos muestran un aumento de los niveles de expresiïn proto-oncogïnica, una localizaciïn errïnea de proteïnas de la membrana integrales y una secreciïn de fluidos activa, pero estas alteraciones no explican la pïrdida acelerada de tejido acelerada in vivo.

Se estïn desarrollando medicamentos de los que puede esperarse un efecto terapïutico en el tratamiento de PQR (por ejemplo, antagonistas del receptor de vasopresina 2 e inhibidores de mTOR) . Los estudios clïnicos de fase II/III para estas sustancias se iniciarïn el prïximo aïo. Sin embargo, todavïa no se sabe cïmo podrïa monitorizarse la eficiencia terapïutica a corto plazo (es decir, dentro de un periodo de aproximadamente uno a aproximadamente cuatro aïos) . Como la enfermedad se desarrolla durante el transcurso de muchos aïos, es difïcil determinar si una intervenciïn terapïutica inhibirï eficientemente o no la progresiïn de la enfermedad. Actualmente, la mediciïn de la cantidad de creatinina en suero (eliminaciïn de creatinina) como marcador de la funciïn renal es el ïnico procedimiento disponible. Sin embargo, este procedimiento tiene la desventaja de que la funciïn renal sigue normal aunque los quistes ya se hayan desarrollado espectacularmente con el transcurso de los aïos. Como consecuencia, la mediciïn de creatinina en suero no es adecuada para monitorizar la progresiïn de PQR o para determinar la eficiencia terapïutica de un medicamento.

Por tanto un objeto de la presente divulgaciïn es proporcionar un procedimiento para determinar la eficiencia de un tratamiento terapïutico de PQR. Otro objeto de la presente invenciïn es proporcionar un procedimiento para diagnosticar PQR.

Se ha descubierto de manera sorprendente que la formaciïn de quistes estï asociada a un aumento de la producciïn y la acumulaciïn de proteïna relacionada con Frizzled secretada 4 (sFRP4) . La sFRP4 es un miembro de una familia en desarrollo de molïculas solubles que se unen tanto a molïculas de Wnt como de Frizzled. La sFRP4 es un factor soluble que antagoniza la seïalizaciïn de Wnt y produce apoptosis. Ademïs, se ha encontrado inesperadamente que la sFRP4 y otros miembros de la familia de las proteïnas relacionadas con Frizzled secretadas estïn presentes en el suero y se excretan en la orina de pacientes con PQR y que la producciïn de sFRP4 establece una correlaciïn con el grado del volumen de quistes y la fase de insuficiencia renal. Ademïs, la sFRP5 puede detectarse especïficamente en la orina de pacientes con PQR.

Por tanto la presente invenciïn se refiere a un procedimiento para diagnosticar un trastorno renal, que comprende detectar al menos sFRP5 en una muestra que contiene orina o suero obtenida de un individuo que sufre del trastorno renal o que se sospecha de que sufre del trastorno renal; en el que el trastorno renal es poliquistosis renal (PQR) . La PQR puede asociarse a o producirse por mutaciones en el (los) gen (es) PQR1 y/o PQR2.

Donauer y col. (2003) , Journal of the American Society of Nephrology, vol. 14, Abstracts issue, pïgina 106A, describen que el ARNm de sFRP4 estï regulado al alza en riïones extirpados de pacientes con poliquistosis renal (PQR) . Sin embargo, solo se detectï ARNm, pero no proteïna. En muchos casos, la verificaciïn de datos de micromatrices ha revelado que el ARNm de genes regulados al alza no se traduce necesariamente en un aumento de la producciïn de proteïna. Segundo, los riïones examinados en ese documento se extirparon de pacientes con insuficiencia renal terminal (IRT) . Los hallazgos en esta poblaciïn no reflejan necesariamente los cambios en la expresiïn gïnica y la producciïn de riïones con PQRAD funcionantes. Tercero, la detecciïn de sFRP4 por RT-PCR no implica complejos anticuerpoantïgeno, pero se basa completamente en la transcripciïn inversa de ARNm en ADNc y la detecciïn de este ADNc por PCR y electroforesis en gel. La inmunoquïmica no se realizï para sFRP4. La presente divulgaciïn no se refiere al descubrimiento de que el ARNm estï regulado al alza en pacientes con PQR con insuficiencia renal terminal, sino que se basa en un aumento de la producciïn de sFRP4 en pacientes con PQR con riïones funcionantes. Es probable que numerosos genes sean inducidos por uremia y/o terapia de reemplazo renal y la especificidad sigue siendo cuestionable. En la tïcnica anterior no se ha informado del hallazgo de que la sFRP4 asï como otros miembros de la familia de sFRP, sean detectables en la orina y la sangre de pacientes con riïones funcionantes.

Berndt y col. (2003) The Journal of Clinical Investigation 112 (5) , 785 describen estudios sobre la actividad fosfatïrica de sFRP4. Sin embargo, estos estudios no se relacionaron con PQR. Ademïs, este documento no revela que la sFRP4 pueda estar presente en el suero o la orina de sujetos que sufren de una enfermedad renal.

Zheng y col. (J. Am. Soc. Nephrol. 14: 2588-2595, 2003) describen estudios sobre la excreciïn urinaria de la proteïna quimioatrayente de monocitos 1 (MCP-1) en PQRAD. Esta publicaciïn no divulga la detecciïn de sFRP4 ni de sFRP5.

El documento US 2003/0143610 A1 describe procedimientos de diagnosticar y tratar trastornos metabïlicos que incluyen diabetes caracterizada por actividad SARP3 aberrante.

El documento EP 879 885 A1 describe un gen humano novedoso similar a una proteïna murina secretada sFRP-1. Tambiïn se divulgan procedimientos para producir polipïptidos llamados ATG-1009 y procedimientos para utilizar estos polipïptidos en tratar diversos trastornos y ensayos diagnïsticos para tales afecciones.

Los tïrminos “proteïna relacionada con Frizzled secretada” y “sFRP” se usan indistintamente en este documento. Las sFRP incluyen, pero no se limitan a, sFRP1, sFRP2, sFRP3, sFRP4 y sFRP5. La sFRP puede unirse preferentemente tanto a molïculas de Wnt como a una o mïs de Frizzled.

El tïrmino “proteïna relacionada con Frizzled secretada 1” o “sFRP1” denota una proteïna que tiene sustancialmente la secuencia de aminoïcidos que se muestra en SEC ID N.ï: 1 (Figura 7) . Preferentemente, la sFRP1 es una proteïna que 15 consiste sustancialmente en la secuencia de aminoïcidos que se muestra en SEC ID N.ï: 1. La sFRP1 tambiïn incluye variantes de proteïnas de la secuencia que se muestra en SEC ID N.ï: 1 por ejemplo debidas a variaciïn alïlica. Las variantes pueden tener mutaciones con respecto a la secuencia que se muestra en SEC ID N.ï: 1 por ejemplo sustituciones, adiciones y/o deleciones. Uno de 30, o uno de 20, o uno de diez, o uno de cinco, o uno de tres aminoïcidos pueden estar sustituidos, delecionados y/o aïadidos con respecto a la secuencia que se muestra en SEC

ID N.ï: 1.

El tïrmino “proteïna relacionada con Frizzled secretada 2” o “sFRP2” denota una proteïna que tiene sustancialmente la secuencia de aminoïcidos que se muestra en SEC ID N.ï: 2 (Figura 7) . Preferentemente, la sFRP2 es una proteïna que consiste sustancialmente en la secuencia de aminoïcidos que se muestra en SEC ID N.ï: 2. La sFRP2 tambiïn incluye variantes de proteïnas de la secuencia que se muestra en SEC ID N.ï: 2 por ejemplo debidas a variaciïn alïlica. Las variantes pueden tener mutaciones con respecto a la secuencia que se muestra en SEC ID N.ï: 2 por ejemplo sustituciones, adiciones y/o... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento de diagnïstico de un trastorno renal, que comprende detectar una proteïna relacionada con Frizzled secretada (sFRP) en una muestra que contiene orina o suero obtenida de un individuo que sufre del trastorno renal o que es sospechoso de sufrir del trastorno renal, en el que dicha sFRP es proteïna relacionada con Frizzled secretada 5

(sFRP5) y en el que dicho trastorno renal es poliquistosis renal (PQR) .

2. Un procedimiento segïn la reivindicaciïn 1, en el que dicha muestra es una muestra de orina.

3. Un procedimiento segïn la reivindicaciïn 1, en el que dicha muestra es una muestra de suero.

4. Un procedimiento segïn una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la detecciïn de un nivel elevado de la sFRP5 en la muestra del individuo con respecto a muestras de control indica un diagnïstico del trastorno renal.

5. Un procedimiento segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la detecciïn comprende poner en contacto la muestra con al menos un anticuerpo que puede unirse a la sFRP5 para permitir la formaciïn de complejos anticuerpo-antïgeno y detectar la presencia de complejos anticuerpo-antïgeno formados.

6. Un procedimiento segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el procedimiento comprende al menos un inmunoensayo directo o indirecto seleccionado del grupo que consiste en un ensayo de uniïn competitiva, un ensayo de uniïn no competitiva, un radioinmunoensayo, un enzimoinmunoanïlisis de adsorciïn (ELISA) , un ensayo de tipo sïndwich, una reacciïn de precipitina, un ensayo de inmunodifusiïn de difusiïn en gel, un ensayo de aglutinaciïn, un inmunoensayo fluorescente, inmunoensayo de quimioluminiscencia, inmunoensayo de inmunoPCR, un inmunoensayo de proteïna A o proteïna G y un ensayo de inmunoelectroforesis.

7. Un procedimiento segïn una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que al menos dos muestras obtenidas del mismo individuo en momentos diferentes se criban para la presencia de la sFRP5; y/o en el que dicho procedimiento comprende detectar tanto sFRP4 como sFRP5 en dicha muestra.

8. El uso de medios para la detecciïn de una proteïna relacionada con Frizzled secretada (sFRP) para diagnosticar poliquistosis renal en el procedimiento segïn la reivindicaciïn 1, en el que dicha sFRP es proteïna relacionada con Frizzled secretada 5 (sFRP5) .

9. El uso segïn la reivindicaciïn 8, en el que el medio para la detecciïn de sFRP5 es un anticuerpo capaz de uniïn a la sFRP5.