Antígeno de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium.

Antígeno de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium, caracterizado por que tiene una estructura de disacárido que se compone de una furanosa del tipo Gal y de una piranosa del tipo Glc,

teniendo la estructura de disacárido la siguiente fórmula**Fórmula**

siendo los R1, independientemente unos de otros, OH, OAc, OCnHm, OFo, siendo Fo formilo, m ≥ 2n + 1 y n un número entero de 1 a 10, y siendo

X ≥ O,

Y ≥ O y

los CA, independientemente unos de otros, un radical acilo de C1-C6 o un radical hidroxiacilo.

Antígeno de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium

de enfermedades infecciosas que

1, a unos anticuerpos de acuerdo con las reivindicaciones 8 y 26, a unas composiciones de acuerdo con la reivindicación 9, a unos procedimientos de acuerdo con las reivindicaciones 13 y 27, a un estuche de acuerdo con la reivindicación 19 y a una utilización de acuerdo con la reivindicación 24.

Las infecciones nosocomiales (infecciones hospitalarias) son unas infecciones provocadas por microorganismos 1 que están en conexión causal con una permanencia en el hospital.

En los Estados Unidos de América (EE.UU.) la proporción de infecciones nosocomiales aumentó en un 36 % desde 1975 hasta 1995, de manera tal que en el año 1995 aproximadamente 1 de 1. pacientes habían resultado afectados por una infección de este tipo.

Las infecciones nosocomiales son por lo tanto responsables de 44. a 98. casos mortales por año, solamente 15 en los EE.UU.

Las infecciones de hospitales son responsables de una gran parte de todas las complicaciones que aparecen en estos hospitales, y cuya evitación es esencial para la calidad del abastecimiento de los pacientes con medicinas y con cuidados a los enfermos.

Ellas son por lo tanto un problema que se ha de considerar como grave para cada hospital, puesto que, tal como es 2 sabido, la meta más alta de todas las acciones orientadas hacia la calidad está en el tratamiento hospitalario de los pacientes sanos.

Las infecciones nosocomiales no solamente gravan a los pacientes propiamente dichos mediante trastornos adicionales, sino que en la mayor parte de los casos de los pacientes ellas prolongan también la permanencia en los hospitales - en promedio por aproximadamente 4 días - y contribuyen por consiguiente a la sobrecarga de los 25 hospitales y del sistema sanitario. En los EE.UU. las infecciones nosocomiales causan por cada año unos gastos por el importe de 17 a 29 millardos de dólares USA.

A pesar del indiscutible progreso médico se espera que en el futuro aumente más bien la frecuencia de las infecciones nosocomiales.

Entre otros, los siguientes factores son hechos responsables de este desarrollo: está aumentando el número de los pacientes con una edad elevada,

los pacientes con una defensa debilitada propia del cuerpo contra Infecciones son tratados en los hospitales en un número creciente,

se están llevando a cabo unas operaciones quirúrgicas más complicadas y más difíciles a causa de los progresos en la técnica quirúrgica,

se pueden llevar a cabo de modo creciente unas complicadas medidas técnicas Invasivas en cuanto a aparatos, con un riesgo elevado de infecciones,

se están llevando a cabo de modo creciente unas medidas técnicas terapéuticas que disminuyen el poder de defensa; y

se están empleando de un modo multiplicado unos antibióticos, en particular unos antibióticos de amplio espectro, lo cual contribuye al aumento de los microorganismos multirresistentes.

Unos estudios más recientes que se llevaron a cabo en este contexto (Am. J. Infecí. Control., 32:47-485, 24) han mostrado que hasta un 25 % de los materiales aislados de Enterococcus faecium procedentes de hospitales son resistentes contra los antibióticos gllcopeptídicos.

Los antibióticos gllcopeptídicos atacan a las paredes celulares y se Insertan directamente en la estructura de las 45 paredes celulares, con lo cual resultan agujeros y puede penetrar agua. Un ejemplo de antibióticos glicopeptídlcos es la vancomiclna.

El presente invento se refiere en general al sector de la detección y la prevención son provocadas por Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium.

En particular, el presente invento se refiere a un antígeno según la reivindicación

Díaz Granados, C.A., y colaboradores han mostrado hace poco tiempo que unos enterococos resistentes a la vancomicina causan una morbosidad y una mortalidad, considerables, en particular en el caso de unos pacientes que por lo demás ya tienen un sistema inmunológico debilitado (Clin. Infect. Dis., 41:327-333, 25).

Existe por lo tanto un constante interés de desarrollar unos modos de aproximación inmunoterapéuticos que permitan evitar estas infecciones o por lo menos controlarlas.

Ciertamente en el estado de la técnica se ha conocido fundamentalmente utilizar antígenos de hidratos de carbono para el desarrollo de vacunas (Ada, G., y colaboradores, Clin. Microbiol. Infecí., 9: 79-85, 23), pero hasta ahora se sabe solamente poca cosa acerca de la acción de polisacáridos asociados con las paredes celulares y capsulares en el caso de Enterococcus faecalis.

Hasta hoy en día se han descrito cuatro antígenos del tipo de hidratos de carbono (Hancock y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci USA, 99:1574-1579, 22; Hsu y colaboradores, BMC Microbiol., 6:62, 26; Pazur y colaboradores, J. Biol. Chem., 248: 279-284, 1973; Wang y colaboradores, Carbohydr. Res. 316: 155-16, 1999; Xu y colaboradores, Infect. Immun., 65:427-4215, 1997; Xu y colaboradores, Infecí. Immun. 66:4313-4323, 1998; Xu y colaboradores, Infect. Immun., 68:815-823, 2), pero se ha presentado un análisis estructural completo solamente para uno de ellos. Además, se ha descrito un antígeno del tipo de hidratos de carbono, que está expuesto en la superficie celular de la cepa FA2-2 de Enterococcus faecalis y que se compone de glucosa, galactosa y fosfato de glicerol.

El documento de solicitud de patente internacional WO 99/875 y la cita bibliográfica de Theilacker y colaboradores (en Infect. Immun. 26, 573-5712 (26)) describen unos antígenos del tipo de polisacáridos, que son aislables a partir de Enterococcus faecalis, los cuales sin embargo se diferencian en su estructura del antígeno del tipo de polisacárido que se describe en la presente solicitud.

Hufnagel y colaboradores (en J. Clin. Microbiol. 42, 2548-2557 (24)) describen unos sueros con anticuerpos contra células bacterianas enteras de E. faecalis del tipo 5. Sin embargo, se describen solamente en general unos anticuerpos contra todos los antígenos capsulares posibles (antisueros policlonales, del tipo de sueros específicos en inglés "type specific sera"). Las citadas "cepas de Maekawa" de esta publicación son, además de esto, una mezcla de los tipos 2 y 5, y por consiguiente los antisueros no son específicos.

Con el fin de hacer frente a la problemática que ha sido causada por la aparición de cepas multirresistentes de Enterococcus faecalis y de las cepas de Enterococcus faecium estrechamente afines, existe en el estado de la técnica una considerable necesidad de caracterizar a unos antígenos que están expuestos sobre la superficie de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium, con el fin de utilizar a éstos para la superación de los problemas más arriba descritos.

Por lo tanto, una misión del presente invento es la de poner a disposición unos antígenos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium hasta ahora desconocidos.

Otra misión del presente invento es la de poner a disposición unos anticuerpos contra estos antígenos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium hasta ahora desconocidos.

Otra misión del presente invento es la de poner a disposición una composición, que comprenda por lo menos un antígeno de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium o un anticuerpo contra éste, que sea apropiada de manera preferida para la inmunización activa o respectivamente pasiva contra infecciones causadas por Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium.

Otra misión del presente invento es la de poner a disposición un procedimiento que haga posible la detección del antígeno hasta ahora desconocido en una muestra.

Otra misión del presente invento es la de poner a disposición un procedimiento que haga posible la detección de unos anticuerpos contra el antígeno hasta ahora desconocido en una muestra.

Otra misión del presente invento es la de poner a disposición un estuche que haga posible la detección del antígeno hasta ahora desconocido o de unos anticuerpos contra este antígeno.

Otra misión del presente invento es la de poner a disposición una posibilidad de utilización del antígeno hasta ahora desconocido para la detección o la producción de unos correspondientes anticuerpos o fragmentos de anticuerpos, así como un correspondiente procedimiento.

Los problemas planteados por estas misiones del presente invento se resuelven mediante el antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, los anticuerpos de acuerdo con las reivindicaciones 8 y 26, las composiciones de acuerdo con la reivindicación 9, los procedimientos de acuerdo con las reivindicaciones 13 y 27, un estuche de acuerdo con la reivindicación... [Seguir leyendo]

1. Antígeno de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium, caracterizado por que tiene una estructura de disacárido que se compone de una furanosa del tipo Gal y de una piranosa del tipo Glc, teniendo la estructura de disacárido la siguiente fórmula

siendo los Ri, independientemente unos de otros, OH, OAc, OCnHm, OFo, siendo Fo formilo, m = 2n + 1 y n un número entero de 1 a 1, y siendo X = O,

Y = O y

los CA, independientemente unos de otros, un radical acilo de C1-C6 o un radical hidroxiacilo.

2. Antígeno de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por que Ri es = OH, X es = O, Y es = O y CA es = lactilo.

3. Antígeno de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado por que tiene un peso molecular de aproximadamente 1.-2. Da, de manera más preferida de aproximadamente 5.-15. Da y de

manera especialmente preferida de aproximadamente 1. Da.

4. Antígeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 hasta 3, caracterizado por que la unidad se presenta por lo menos 5 veces, de manera preferida por lo menos 1 veces, de manera más preferida por lo menos 1 veces y de manera especialmente preferida por lo menos 1. veces por cada antígeno.

5. Antígeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 hasta 4, caracterizado porque está fijado a un soporte.

6. Antígeno de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizado por que la fijación al soporte es de naturaleza

covalente.

7. Antígeno de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6, caracterizado por que el soporte es un soporte inmunológico.

8. Anticuerpo monoclonal específico contra un antígeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 hasta 7.

9. Composición que comprende un antígeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 hasta 7 o un anticuerpo 25 de acuerdo con la reivindicación 8.

1. Composición de acuerdo con la reivindicación 9, que comprende un soporte farmacéuticamente aceptable.

11. Composición de acuerdo con la reivindicación 9 ó 1, caracterizada por que ella es una vacuna contra Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium.

12. Composición de acuerdo con una de las reivindicaciones 9 hasta 11, caracterizada por que ella es una composición farmacéutica.

13. Procedimiento para la detección de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium, que comprende,

- poner en contacto unos antígenos de acuerdo con una reivindicación 1-7 con una muestra que se ha de ensayar para descubrir anticuerpos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium, y

- detectar unos complejos de anticuerpos y antígenos o unos conjugados de anticuerpos y antigenos, indicando la presencia de tales complejos la presencia de anticuerpos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium en la muestra.

14. Procedimiento para la detección de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium que comprende

- poner en contacto unos anticuerpos monoclonales de acuerdo con la reivindicación 8 opcionalmente inmovilizados sobre un soporte con una muestra que se ha de ensayar para descubrir antigenos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium y

- detectar unos complejos de anticuerpos y antígenos o un conjugado de anticuerpos y antígenos, indicando la presencia de tales complejos la presencia de antígenos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium.

15. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 13 o 14, caracterizado porque los antígenos o respectivamente anticuerpos son inmovilizados sobre una matriz, en particular sobre una matriz sólida, de manera preferida sobre una placa de microtitulación.

16. Procedimiento de acuerdo con la reivindicaciones 13 hasta 15, caracterizado porque el antígeno o el anticuerpo es provisto de un marcador.

17. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16, caracterizado por que el marcador se selecciona entre el conjunto que compone de marcadores radiactivos, marcadores coloreados, marcadores enzimáticos y marcadores magnéticos.

18. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 16 ó 17, caracterizado por que el marcador muestra una modificación de las propiedades después de la fijación de un anticuerpo.

19. Estuche para la detección de anticuerpos de Enterococcus faecalis y/o - Enterococcus faecium, que comprende un antígeno de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 hasta 7.

2. Estuche para la detección de antígenos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium en una muestra, que comprende un anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 8, opcionalmente fijado a un soporte.

21. Estuche de acuerdo con la reivindicación 19 ó 2, caracterizado por que el antígeno o respectivamente el anticuerpo está marcado con un marcador.

22. Estuche de acuerdo con la reivindicación 21, caracterizado por que el marcador es un marcador radiactivo, un marcador coloreado, un marcador enzimático o un marcador magnético.

23. Estuche de acuerdo con una de las reivindicaciones 19 hasta 22, caracterizado por que el antígeno o respectivamente el anticuerpo está unido con una matriz, de manera preferida con una matriz sólida.

24. Utilización de un antígeno de acuerdo con las reivindicaciones 1 hasta 7, para la detección o la producción no terapéutica de unos específicos anticuerpos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium y/o de fragmentos de anticuerpos, en particular Fab o scFv,.

25. Utilización de acuerdo con la reivindicación 24, estando previstos los anticuerpos de Enterococcus faecalis y/o Enterococcus faecium y/o los fragmentos que se han producido para la inmunoterapia pasiva o para la profilaxia contra antígenos de enterococos.

26. Anticuerpo recombinante, caracterizado por que él se corresponde estructuralmente con el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 8, o un fragmento Fab o scFv recombinante.

27. Procedimiento para la producción de un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 8 o de un fragmento Fab o scFv del mismo en forma recombinante, que comprende la clonación de una secuencia de ADN que codifica este anticuerpo o su fragmento Fab o scFv en un vector de expresión, la transformación de una célula, en particular de una célula de E. coli o de una célula de levadura con esta construcción artificial y la expresión del anticuerpo recombinante o de un fragmento Fab o scFv del mismo.