Compuestos de pirrol[4,3,2-de]quinolin-8-amina y procedimientos de preparación y uso de los mismos.

El compuesto (E)-N-(8-amino-4-(3-metoxiacriloil)pirrol[4,3,2-de]quinolin-6-il)isobutiramida;

o un tautómero del mismo; o un estereoisómero del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero

Compuestos de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina y procedimientos de preparación y uso de los mismos.

Campo de la invención La presente invención se refiere a compuestos de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina y a procedimientos de su uso y preparación. La invención también se refiere a especies de actinomicetos capaces de producir compuestos de 5 pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina.

Antecedentes de la invención Alcaloides aromáticos policíclicos derivados de plantas y animales marinos han mostrado que presentan una variedad de actividades biológicas. Por ejemplo, plaquinidinas, que son compuestos de pirroloacridina pentacíclicos, se derivan de esponja roja de Vanuatuán, Plakortis, y se ha mostrado que tienen actividad antihelmínitca en 10 animales (patente de Estados Unidos nº 4.959.370) .

Limfostina es una pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina producida por una bacteria del suelo que pertenece al género Streptomyces y se sugiere que tiene actividad inmunosupresora (patentes de Estados Unidos 5.843.955 y 6.815.449) . La limfostina presenta la siguiente estructura:

La patente de Estados Unidos 6.815.449 describe análogos sintéticos derivados de limfostina, la mayor parte de los cuales están modificados en la posición 4 de la molécula. La única variación en la posición 6 de limfostina dio lugar a reducción de casi diez veces en actividad inhibitoria de linfocitos (comparando el compuesto 1 con el 27 en la tabla 3 de la patente de Estados Unidos 6.815.449) .

Los solicitantes han desarrollados nuevos compuestos de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina que muestran de forma 20 sorprendente potente actividad inhibitoria de mTOR, un serina/treonina quinasa que regula el crecimiento celular, la proliferación celular, motilidad celular, supervivencia celular, síntesis de proteínas y transcripción y de este modo está implicado en diversas rutas de cáncer.

Sumario de la invención La presente invención proporciona el compuesto (E) -N- (8-amino-4- (3-metoxiacriloil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-25 il) isobutiramida; o un tautómero del mismo; o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero; composiciones de las mismas; procedimientos para la preparación de las mismas; y el compuesto, estereoisómero, tautómero o sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en el tratamiento de cáncer.

También se divulga el compuesto pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina de fórmula I: 30

en la que,

R1 es CH=CH-OCH3 o (CH2) 2OH; y

R2 es alquilo C1-C4; o un tautómero del mismo; un estereoisómero del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero; a condición de que si R2 es metilo, entonces R1 es (CH2) 2OH.

También se divulga una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I, o un tautómero del 5 mismo; un estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto estereoisómero o tautómero y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

También se divulga una composición que comprende un compuesto aislado de fórmula I, o un tautómero del mismo; un estereoisómero del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero. 10

También se divulga una cepa de actinomiceto aislada con el número de depósito NRRL 50168 o NRRL 50167.

También se divulga un compuesto de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina aislado, un tautómero del compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto o tautómero, en el que el compuesto se produce con una cepa de actinomicetes que presenta el número de depósito NRRL 50168 o NRRL 50167; a condición de que el compuesto no se limfostina. 15

También se divulga (a) un procedimiento para la preparación de un compuesto de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina, o (b) un compuesto de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina o un tautómero, estereoisómero o sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero, a condición de que el compuesto no sea limfostina, preparado mediante un procedimiento, que comprende

la fermentación de una cepa de actinomicetos que presenta el número de depósito NRRL 50168 o NRRL 50167 en 20 un medio de cultivo que comprende una sal para formar una solución fermentada, en la que se forma el compuesto de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina en la solución fermentada, y

de forma opcional purificación del compuesto de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina.

También se divulga un compuesto seleccionado del grupo que consiste en (E) -N- (8-amino-4- (3-metoxiacriloil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) -propionamida; (E) -N- (8-amino-4- (3-metoxiacriloil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-25 il) -3-metilbutanamida; (E) -N- (8-amino-4- (3-metoxiacriloil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) -2-metilbutanamida; N- (8-amino-4- (3-hidroxipropanoil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) propionamida; N- (8-amino-4- (3-hidroxipropanoil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) isobutiramida; N- (8-amino-4- (3-hidroxipropanoil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) -3-metilbutanamida; N- (8-amino-4- (3-hidroxipropanoil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) -2-metilbutanamida; N- (8-amino-4- (3-hidroxipropanoil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) acetamida; o un tautómero del mismo; un estereoisómero del mismo; o 30 una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto estereoisómero o tautómero.

También se divulga un procedimiento de inhibición o tratamiento de un paciente que sufre de una enfermedad asociada con mTOR, en particular cáncer.

También se divulga una cepa de actinomicetos aislada que presenta el número de depósito NRRL 50168 o NRRL 50167. La invención también proporciona compuestos y composiciones producidas por dichas cepas y 35 procedimientos para la preparación de los compuestos de fórmula I.

Otros objetos, características y ventajas de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada.

Breve descripción de las figuras Fig. 1A representa la secuencia de ADN polinucleótida casi completa para el gen de ARNr 16S de la cepa 40 actinomiceto DPJ-0019 (nº de depósito NRRL 50168) (ID SEC Nº 1) .

Fig. 1B representa la secuencia de ADN polinucleótida casi completa para el gen de ARNr 16S de DPJ-0024 (nº de depósito NRRL 50167) (ID SEC Nº 2)

Fig. 1C representa una secuencia de ADN conservada en el gen de ARNr 16S de DPJ-0024 (ID SEC Nº 3) , que no está presente en secuencias de gen de ARNr 16S de ARNr de Salinispora arenicola o Salinispora tropica. 45

Fig. 2 ilustra las relaciones filogenéticas de DPJ-0019 y DPJ-0024 con cepas de los dos Salinispora spp, Salinispora arenicola y Salinispora tropica actualmente aceptados. Se generó el árbol filogenético con secuencias de ADNr de espaciador intergénico de 16S-23S completas. Se usó un procedimiento de unión por proximidad para calcular valores de distancias Bootstrap con 1000 réplicas y se muestran en sus nodos respectivos si el valor es mayor que o igual a 50%. Se usó Actinomadura madurae como un grupo saliente. 50

Fig. 3 es un alineamiento que compara las secuencias de ADN de polinucleótidos de genes de ARNr 16S de Salinispora spp S arenicola (ID SEC Nº 6) y S tropica (ID SEC Nº 7) con DPJ-0024 (ID SEC Nº 2) yDPJ-0019 (ID SEC Nº 1) .

Descripción detallada Definiciones: 5

"Alquilo" se refiere a grupos hidrocarbilo alifáticos saturados monovalentes que presentan de 1 a 6 átomos de carbono (alquilo C1-C6) , y preferiblemente de 1a 4 átomos de carbono (alquilo C1-C4) . Este término incluye, a modo de grupos hidrocarbilo lineales y ramificados ejemplo tales como metilo (CH3-) , etilo (CH3CH2-) , n-propilo (CH3CH2CH2-) , isopropilo ( (CH3) 2CH-) , n-butilo (CH3CH2CH2CH2-) , isobutilo ( (CH3) 2CHCH2-) , sec-butilo ( (CH3) (CH3CH2) CH-) , y t-butilo ( (CHs) 3C-) . 10

“Hidroxi" se refiere al grupo -OH.

“Metoxi" se refiere al grupo -OCH3

“Estereoisómero" se refiere a compuestos que difieren en la quiralidad o conectividad atómica en uno o más estereocentros. Estereoisómeros incluyen enantiómeros, diastereómeros así como también isomerismo cis-trans (E/Z) . 15

En diversos sitios en la presente memoria descriptiva se divulgan sustituyentes de compuestos en grupos o en intervalos. Se pretende de forma específica que la descripción incluya cada una de las sub-combinaciones individuales de los miembros de tales grupos e intervalos. Por ejemplo, el término “alquilo C1-4” se pretende específicamente que describa individualmente C1, C2, C3, C4, C1-C4, C1-C3, C1-C2, C2-C4, C2-C3 y C3-C4.

"Tautómero" se refiere a formas alternativas de un compuesto... [Seguir leyendo]

1. El compuesto (E) -N- (8-amino-4- (3-metoxiacriloil) pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-6-il) isobutiramida; o un tautómero del mismo; o un estereoisómero del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero.

2. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 1; un tautómero del 5 mismo; un estereoisómero del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

3. Un compuesto de la reivindicación 1; un tautómero del mismo; un estereoisóemero del mismo; o una sal farmacéuticamente aceptable del tal compuesto, estereoisómero o tautómero del mismo; o una composición de la reivindicación 2 para su uso en el tratamiento del cáncer. 10

4. El compuesto; tautómero; estereoisómero; sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero; o una composición del mismo para su uso de acuerdo con la reivindicación 3, en el que el cáncer es cáncer de colon, cáncer de recto, cáncer gástrico, carcinoma de tiroides, carcinoma de células renales, cáncer de lengua, carcinoma de vejiga, carcinoma de cilio, hepatoma, cáncer de próstata, carcinoma de útero, cáncer de faringe, cáncer de pulmón, cáncer de 15 mama, melanoma maligno, granuloma, sarcoma de Kaposi, cáncer de cerebro, neuroblastoma, cáncer de ovarios, cáncer de testículo, cáncer de páncreas, hipernefroma, hemangloendotelioma, leucemia de células T adultas (ATL) , leucemia mielogenosa crónica (CML) , leucemia mielogenosa aguda (AML) o mieloma múltiple.

5. Un procedimiento de preparación de un compuesto de la reivindicación 1, un tautómero del mismo, un 20 estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de tal compuesto, estereoisómero o tautómero del mismo, comprendiendo dicho procedimiento la fermentación de una cepa de actinomicetos que presenta el número de acceso a Agricultural Research Service Culture Collection (NRRL) nº NRRL 50167 o NRRL 50168 en un medio de cultivo que comprende una sal para formar una solución fermentada, en el que el compuesto de pirrol[4, 3, 2-de]quinolin-8-amina es formado en la solución 25 fermentada.