Composiciones sólidas estabilizadas de polipéptidos del Factor VIIa.

Una composición que comprende un polipéptido del Factor VIIa, y una combinación de sacarosa y un poliol

seleccionado a partir del grupo que consiste en manitol, sorbitol y xilitol,

en donde dicho poliol está presente en una relación en peso con relación a dicha sacarosa que varía de 10:

1 a 1:2;

teniendo dicha composición un contenido en humedad no superior al 3% p/p.

Composiciones sólidas estabilizadas de polipéptidos del Factor VIla Campo de la invención

La presente invención se refiere a composiciones estables tanto química como físicamente que comprenden Factor Vil activado (Vlla), de modo que estas composiciones se pueden almacenar, manipular y utilizar a temperatura ambiente.

Antecedentes de la invención

El Factor Vil es un polipéptido implicado en el proceso de coagulación sanguínea. Hoy en día, el Factor Vlla se puede preparar mediante técnicas recombinantes (rFVIIa) y es de uso generalizado como agente prohemostático. El Factor Vil (humano de tipo silvestre) se ha descrito en el documento de patente de EE.UU. n° 4.784.95. El rFVIIa ofrece actualmente una respuesta prohemostática rápida y muy eficaz en individuos hemofílicos que padecen hemorragia. Ventajosamente, el rFVIIa se puede utilizar para tratar individuos hemofílicos que no se pueden tratar con otros productos a base de factores de coagulación, debido a la formación de anticuerpos. También individuos que tienen una carencia de Factor Vil o individuos que tienen un sistema de coagulación normal, pero que aun así experimentan una hemorragia excesiva, se pueden tratar con éxito con rFVIIa.

Se tienen que considerar diversos parámetros cuando se desarrolla un medicamento que comprende un polipéptido tal como, por ejemplo, el Factor Vlla. Por ejemplo, el medicamento debe ser eficaz, seguro y generar un buen cumplimiento por parte del paciente. Por otra parte, el medicamento se puede formular para administración parenteral utilizando excipientes farmacéuticamente aceptables, que tendrán que obtener la aprobación de diversas agencias reguladoras médicas mundiales. Con el fin de una administración parenteral, es muy deseable que la formulación sea aproximadamente isotónica y que el pH de la formulación esté en un valor fisiológicamente adecuado después de la inyección/infusión, de lo contrario puede producir dolor y molestias en el paciente. Para una revisión general de las formulaciones de proteínas, véase, por ejemplo, Cleland et al.: The development of stable protein formulations: A closer look at protein aggregation, deamidation and oxidation, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 1993, 1(4): 37-377; y Wang et al., Parenteral formulations of proteins and peptides: Stability and stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology 1988 (suplemento), 42 (2S).

Sin embargo, para medicamentos que comprenden polipéptidos, la seguridad puede estar directamente relacionada con la estabilidad física y química del polipéptido. Al ser un polipéptido, el Factor Vil o un polipéptido relacionado con el Factor Vil es susceptible de una degradación física, incluyendo desnaturalización y agregación, tal como la formación de agregados solubles o insolubles en forma de dímeros, oligómeros y polímeros, o una degradación química, incluyendo, por ejemplo, hidrólisis, desamidación y oxidación. En consecuencia, dicha inestabilidad física y química puede provocar una pérdida de la actividad del polipéptido del Factor Vil, una formación de productos de degradación tóxicos e inmunógenos, un riesgo grave de producir trombosis después de la inyección de los polipéptidos degradados del Factor Vil, una obstrucción de las agujas utilizadas para las inyecciones y un riesgo de falta de homogeneidad, por mencionar algunos ejemplos.

Por lo tanto, es esencial proporcionar composiciones que comprenden polipéptidos del Factor Vil que sean estables frente a la degradación física y química.

En la actualidad, el polipéptido FVII preparado de forma recombinante se proporciona como un producto liofilizado que está destinado a ser almacenado a temperaturas entre aproximadamente 2 y aproximadamente 8°C. El requisito de unas condiciones refrigeradas provoca una carga y es un inconveniente para el fabricante o el proveedor, así como para el usuario final (el paciente).

El producto FVII preparado de forma recombinante existente es NovoSeven® (Novo Nordisk A/S, Dinamarca) que consiste en 1,2 mg de Factor Vlla humano recombinante, 5,84 mg de NaCI, 2,94 mg de CaCh, 2 H2, 2,64 mg de glicilglicina, ,14 mg de polisorbato 8 y 6, mg de manitol. Cuando se reconstituye en 2, mi de agua para inyección (WFI), el pH es 5,5 y la solución que contiene FVII preparada de este modo es suficientemente estable durante 24 horas a temperatura ambiente.

Los presentes investigadores han encontrado que en el almacenamiento del producto NovoSeven® liofilizado durante 6 meses a 25°C, aproximadamente 6 a 7% p/p del contenido inicial del rFVIIa está presente en forma de agregados.

Por lo tanto, las composiciones que comprenden polipéptidos del Factor Vil tienen que estar estabilizadas, permitiendo de ese modo el almacenamiento y la manipulación a temperatura ambiente. Sin embargo, la inestabilidad de los polipéptidos se refiere a varios parámetros y es imposible predecir la manera adecuada de estabilizar un Factor Vlla o un polipéptido relacionado con el Factor Vil.

Una metodología para la estabilización de una proteína se refiere a la eliminación del agua de la proteína, por ejemplo, proporcionando la proteína en forma de torta liofilizada, un material final obtenido en un proceso de liofilización.

Sin embargo, el proceso de liofilización en sí también es perjudicial para las proteínas; durante la liofilización, la solución de proteína se enfría primero hasta que se congela adecuadamente y la mayoría del agua en masa en la solución de proteína formará hielo en esta etapa. Por ello, la proteína es propensa a tensiones inducidas por la congelación lo que produce deformación y precipitación. En la siguiente etapa, la denominada etapa de secado primaria, el hielo se sublima y en la etapa de secado secundaria, el agua adsorbida o unida se elimina a temperaturas elevadas. Durante esta eliminación del agua, las proteínas pueden perder su conformación apropiada la cual se proporciona principalmente a través de enlaces de hidrógeno.

Por lo tanto, para conservar la conformación, la actividad y la estabilidad de la proteína durante la liofilización, la solución de polipéptido se tiene que complementar con cantidades suficientes de excipientes adecuados con propiedades crioprotectoras y/o lioprotectoras, a fin de proteger la proteína de tensiones inducidas por la liofilización y/o de tensiones durante la eliminación de agua, respectivamente.

Además, cuando se proporciona un producto liofilizado, una característica esencial se refiere a las propiedades de la torta liofilizada. Tiene que tener buenas propiedades en cuanto a su forma y estructura, es decir, no se tiene que colapsar porque las tortas de este tipo colapsadas pueden ser difíciles o incluso imposibles de disolver (reconstituir) antes del uso. Por el contrario, la estructura física de la torta liofilizada no puede ser demasiado hueca y blanda. Por lo tanto, se añaden uno o varios agentes denominados volumétricos a la solución de proteína antes de la liofilización.

Otras publicaciones de interés con respecto a la estabilización de polipéptidos son las siguientes:

El documento de EE.UU. 2131721 A1 (American Home Products) se refiere a formulaciones de Factor IX muy concentradas, liofilizadas y líquidas.

El documento WO 97/2699 (Genetics Institute) se refiere a preparaciones liofilizadas de Factor IX, adecuadas para el almacenamiento y la administración. Las preparaciones pueden comprender sacarosa o manitol como crioprotector.

El documento WO 95/28954 (Genetics Institute) se refiere a preparaciones de Factor IX, adecuadas para el almacenamiento y la administración. Las preparaciones pueden comprender sacarosa como crioprotector.

El documento WO /48635 (Besman M) se refiere a composiciones terapéuticas de Factor VIII que son estables en ausencia de albúmina. La composición comprende además de Factor VIII, 4% a 1% de un agente volumétrico seleccionado a partir del grupo que consiste en manitol, glicina y alanina; 1% a 4% de un agente estabilizador seleccionado a partir del grupo que consiste en sacarosa, trehalosa, rafinosa, arginina; sal de calcio 1 mM a 5 mM; NaCI 1 mM a 3 mM; y un agente tamponador para mantener un pH de aproximadamente entre 6 y 8. Esta composición puede comprender adicionalmente un tensioactivo tal como polisorbato 2, poli- sorbato 8, Pluronic F68 o Brij 35.

El documento WO 93/87 (Cryolife) se refiere a un método para estabilizar biomateriales durante la liofilización utilizando un sistema de dos componentes. El sistema de dos componentes descrito comprende un crio- protector (A), preferiblemente polietilenglicol (PEG), polivinilpirrolidona, hidroxietil almidón, dextrano o ficol; y un segundo componente (B) seleccionado... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende un polipéptido del Factor VIla, y una combinación de sacarosa y un pollol seleccionado a partir del grupo que consiste en manitol, sorbltol y xilitol,

en donde dicho poliol está presente en una relación en peso con relación a dicha sacarosa que varía de 1:1 a 1:2; teniendo dicha composición un contenido en humedad no superior al 3% p/p.

2. La composición según la reivindicación 1, en la que la combinación de sacarosa y un poliol comprende además un antioxidante seleccionado a partir del grupo que consiste en homocisteína, cisteína, cistationina, metió- nina, glutatión, y péptidos que contienen uno cualquiera entre homocisteína, cisteína, cistationina, metionina y gluta- tión.

3. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho poliol está en una cantidad que varía de ,5 a 75 mg/ml, tal como de 2 a 6 mg/ml, de 5 mg/ml a 55 mg/ml, de 8 a 45 mg/ml, de 1 a 4 mg/ml, de 1 a 3 mg/ml o de 2 a 45 mg/ml, de 5 mg/ml a 45 mg/ml, de 5 a 35 mg/ml, de 5 a 25 mg/ml, de 5 a 2 mg/ml, de 2 a 4 mg/ml, o tal como de 2 a 3 mg/ml.

4. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicha sacarosa está presente en una cantidad que varía de ,5 a 75 mg/ml, tal como de 2 a 6 mg/ml, de 5 mg/ml a 55 mg/ml, de 8 a 45 mg/ml, de 1 a 4 mg/ml, de 1 a 3 mg/ml o de 2 a 45 mg/ml, de 5 mg/ml a 45 mg/ml, de 5 a 35 mg/ml, de 5 a 25 mg/ml, tal como de 5 a 2 mg/ml.

5. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho pollol está en una relación en peso con respecto a dicha sacarosa que varía desde 6:1 hasta 1:2; de 4:1 a 1:1; o de 4:1 a 3:2.

6. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un agente adecuado para mantener el pH de dicha composición en el Intervalo de 3 a 9 cuando se disuelve en un disolvente acuoso, preferiblemente el pH está en el intervalo de 4 a 7, más preferido en el Intervalo de 4,5 a 6,5, aún más preferido en el intervalo de 5 a 6, en donde dicho agente se selecciona a partir del grupo que consiste en citrato, acetato, histidina, malato, fosfato, ácido tartárico, ácido succínico, MES, HEPES, PIPES, ¡midazol, TRIS, lactato, glutamato y gllcllgllclna.

7. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un modificador de la tonicidad seleccionado a partir del grupo que consiste en acetato de sodio, lactato de sodio, cloruro de sodio, cloruro de potasio y cloruro de calcio.

8. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que comprende además un tensioactivo seleccionado a partir del grupo que consiste en polisorbatos, éteres alquílicos de polioxietileno o po- loxámeros, y otros polímeros en bloque de etileno/polipropileno o polietilenglicol (PEG).

9. La composición según la reivindicación 8, en la que el tensioactivo se selecciona a partir del grupo de: poli- sorbato 2, polisorbato 8, Brij 35®, Poloxámero 188 o Poloxámero 47 y PEG8.

1. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el poliol es manitol.

11. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el polipéptido del Factor Vlla se selecciona a partir del grupo que consiste en Factor Vlla humano, Factor Vlla humano recombinante y una variante de la secuencia del Factor Vil.

12. La composición según la reivindicación 11, en la que el polipéptido del Factor Vlla es Factor Vlla humano o

Factor Vlla humano recombinante.

13. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en la que el polipéptido del Factor Vlla está presente en una concentración de ,6 mg/ml a 1, mg/ml, tal como de ,6 mg/ml a 6 mg/ml, de ,6 mg/ml a 5 mg/ml o de ,6 mg/ml a 4 mg/ml.

14. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que dicho contenido en humedad no es superior al 2,5% p/p, no es superior al 2% p/p o no es superior al 1,5% p/p

15. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición es una torta liofilizada.

16. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición comprende: polipéptido del Factor Vlla, manitol, sacarosa y un tensioactivo seleccionado a partir de un polisorbato o un poloxámero, tal como Tween 8® o Poloxámero 188®.

17. La composición según la reivindicación 16, que contiene adicionalmente metionina.

18. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones 16-17, que contiene adicionalmente L- histidina.

19. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones 16-18, que contiene adicionalmente uno o varios componentes seleccionados a partir de la lista: CaCh, NaCI y glicilglicina.

2. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición se

selecciona a partir de las formulaciones A y D:

21. La composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la composición se selecciona a partir de la lista de formulaciones Ex a Lx:

22. Las composiciones según una cualquiera de las reivindicaciones 16-21, en las que el polipéptido del Factor VIla es Factor VIla humano.

23. Un método para preparar un polipéptido del Factor Vlla estable que comprende las etapas de:

i) proporcionar dicho polipéptido del Factor Vlla en una solución que comprende una combinación de sacarosa y un poliol seleccionado a partir del grupo que consiste en manitol, sorbitol y xilitol,

en donde dicho poliol está presente en una relación en peso con respecto a dicha sacarosa que varía desde 1:1 a 1:2;

ii) liofilizar dicha solución para obtener una composición sólida con un contenido en humedad que no es superior al 3% p/p.

24. El método según la reivindicación 23, que comprende además un antioxidante seleccionado a partir del grupo que consiste en homocisteína, cisteína, cistationina, metionina, glutatión, y péptidos que contienen uno cualquiera entre homocisteína, cisteína, cistationina, metionina y glutatión.

25. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 23-24, en el que dicho poliol está presente en una

cantidad que varía de ,5 a 75 mg/ml, preferiblemente de 2 a 45 mg/ml, tal como de 5 mg/ml a 45 mg/ml, de 5 a 35

mg/ml, de 5 a 25 mg/ml, de 5 a 2 mg/ml, de 2 a 4 mg/ml o de 2 a 3 mg/ml.

26. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 23-25, en el que dicha sacarosa está presente en una cantidad que varía de ,5 a 75 mg/ml, preferiblemente de 2 a 45 mg/ml, tal como de 5 mg/ml a 45 mg/ml, de 5 a 35 mg/ml, de 5 a 25 mg/ml o de 5 a 2 mg/ml.

27. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 23-26, en el que dicho antioxidante se encuentra en una cantidad que varía de ,5 a 1 mg/ml, preferiblemente de ,1 a 5 mg/ml, más preferiblemente de ,1 mg/ml a 2,5 mg/ml, incluso más preferiblemente de ,1 a 2 mg/ml, lo más preferiblemente de ,1 a 1 mg/ml.

28. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 23-27, en el que el antioxidante es metionina.

29. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 23-28, en el que el poliol es manitol.

3. Uso del polipéptido del Factor Vlla para la preparación de un medicamento para uso en un método para tratar un síndrome sensible al Factor Vil, en donde dicho síndrome se selecciona a partir del grupo que consiste en hemofilia A, hemofilia B, carencia de Factor XI, carencia de Factor Vil, trombocitopenia, enfermedad de von Wille- brand, presencia de un inhibidor del factor de coagulación, cirugía, traumatismo y terapia anticoagulante, en donde dicho medicamento comprende una composición que comprende:

un polipéptido del Factor Vlla y una combinación de sacarosa y un poliol seleccionado a partir del grupo que consiste en manitol, sorbitol y xilitol;

en donde dicho poliol está presente en una relación en peso con respecto a dicha sacarosa que varía de 1:1 a 1:2; teniendo dicha composición un contenido en humedad que no es superior al 3%

31. El uso según la reivindicación 3, en donde la composición es como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24.

32. Una composición tal y como se ha descrito en una cualquiera de las reivindicaciones 1-22, para uso en un método para tratar un síndrome sensible al Factor Vil, en donde dicho síndrome se selecciona a partir del grupo que consiste en hemofilia A, hemofilia B, carencia de Factor XI, carencia de Factor Vil, trombocitopenia, enfermedad de von Willebrand, presencia de un inhibidor del factor de coagulación, cirugía, traumatismo y terapia anticoagulante.