COMPOSICIÓN PARA LA REGENERACIÓN Y REPARACIÓN DE LA PIEL.

La composición comprende como componente A una mezcla de compuestos liberados de plaquetas (MCLP) obtenido mediante un procedimiento que comprende la lisis de plaquetas presentes en una fracción de plasma enriquecido en plaquetas obtenida a partir de sangre de un sujeto y como componente B un compuesto emoliente o cicatrizante.

La invención incluye composiciones farmacéuticas y cosméticas y sus aplicaciones en la curación de heridas y la bioestimulación de fibroblastos y en la regeneración de la piel y mejora del aspecto, tersura y elasticidad de la piel.

COMPOSICIÓN PARA LA REGENERACIÓN Y REPARACIÓN DE LA PIEL

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se encuadra dentro del campo de la regeneración y reparación de tejido biológico, particularmente de agentes regenerativos que estimulan el crecimiento celular y de tejidos para el tratamiento de alteraciones en la continuidad de la piel, y, en particular, de alteraciones que requieren la regeneración de la piel tales como el envejecimiento, quemaduras, heridas y similar.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La cicatrización de heridas es un proceso complejo y dinámico. Una vez que la herida comienza a cicatrizar normalmente el proceso se completa con el cierre completo de la herida. Sin embargo el cierre de heridas agudas y crónicas puede verse afectado por diversos factores, algunos derivados del paciente y otros de la herida.

Métodos habituales para el tratamiento de heridas en humanos y animales implican la curación o eliminación de los tejidos muertos o infectados, desinfección usando desinfectantes basados en yodo o en peróxido de hidrógeno y tratamiento con antibióticos (local o sistémico, en forma de polvo, crema o aerosol) . Por último, con el fin de evitar el endurecimiento de la piel y la formación de costra, se aplican gasas impregnadas en humectantes grasos tales como vaselina, aceitas de silicona o glicerol. El recubrimiento de la herida con una gasa estéril se lleva a cabo no sólo para impedir la exposición de la herida a agentes infecciosos sino también para recoger el exudado y las secreciones de la herida.

El tratamiento de heridas de forma tópica se lleva a cabo hoy en día mediante el uso de bacitracina, gentamicina, kanamicina, tetraciclina, oxitetraciclina, meclociclina, polimixina, nitrofurazona, sulfadiazina, ácido fusídico y similares. De hecho, existe una gran demanda de nuevos y superiores agentes promotores de la cicatrización de heridas.

Las plaquetas desempeñan un papel primordial en la cicatrización de las heridas, ya que estos fragmentos citoplásmicos además de poseer propiedades hemostáticas (Hartwig e Italiano 2003 J Thromb Haemost 1, 15801586) también poseen propiedades proinflamatorias, reguladoras (Mannaioni y col 1997 Inflamm Res 46, 4-18) y acciones regenerativas, las cuales están mediadas por la interacción con células (neutrófilos y células endoteliales) y por la liberación de factores de crecimiento, quimiocinas y otras moléculas (Anitua y col 2004 Thromb Haemost 91, 4-15) .

Las plaquetas de los mamíferos contienen tres tipos de gránulos: lisosomales, densos y alfa (α) (Mannaioni y col 1997 Inflamm Res 46, 4-18, Pelagalli y col 2002 J Comp Pathol 127, 126-132) . Los gránulos lisosomales contienen hidrolasas ácidas, guanina, fosfolipasas y quinasas, que actúan como enzimas proteolíticas e hidrolíticas (Tablin 2000 Schalman’s Veterinar y Hematology) . Los gránulos densos almacenan ATP, ADP, calcio, fósforo y serotonina. El ADP induce la migración plaquetaria y en combinación con la serotonina produce la contracción de las arterias lesionadas. El ATP antagoniza la acción del ADP (Pelagalli y col 2002 J Comp Pathol 127, 126-132) . Los gránulos α contienen varias moléculas (citocinas, quimiocinas, factores de crecimiento, entre otras) , algunas específicas para las plaquetas (por ejemplo: factor plaquetario 4 y β-tromboglobulina) y otras que no son específicas para ellas, tales como la albúmina, condroitín 4-sulfato, fibrinógeno, fibronectina, trombospondina, factor V, factor Va y factor von Willebrand (Mannaioni y col 1997 Inflamm Res 46, 4-18) , Anitua y col 2004 (Thromb Haemost 91, 4-15) . Estas proteínas son importantes para todas las funciones plaquetarias, tales como la formación y crecimiento de trombos, modulación inflamatoria y la síntesis de matriz extracelular (ECM) durante la cicatrización de heridas (Gentr y 2000 Schalman’s Veterinar y Hematology. Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, USA, Pp 459 466) . Los gránulos α almacenan numerosos factores de crecimiento directamente implicados en la cicatrización de las heridas, entre ellos: factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF) , factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-β1) , TGF-β2, factor de crecimiento epidérmico (EGF) , factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) , factor de crecimiento insulínico tipo 1 (IGF-I) y factor de crecimiento de hepatocitos (HGF) (Anitua y col 2005 Orthop Res 23, 281-286, Weibrich y col 2005 Int J Oral Maxillofac Implants 29, 118-123) .

En el documento de Carmona JU. et al (Arch Med Vet 1-10 (2011) ) se resumen las técnicas utilizadas hasta el momento para preparar plasma rico en plaquetas para uso en cicatrización de heridas. Destacan el sistema de aféresis que tiene bajo riesgo de contaminación bacteriana durante la preparación pero requiere alta tecnología y personal experimentado así como gran volumen de sangre. Los sistemas semiautomáticos (buffy coat) permiten concentrar un elevado número de plaquetas y factores de crecimiento y el riesgo de contaminación bacteriana es menor, pero concentran un elevado número de leucocitos, lo que podría ser perjudicial para los tejidos tratados, y

además son métodos costosos. Los métodos manuales (tubo) son sencillos y baratos, pero requieren un estricto manejo aséptico para evitar la contaminación bacteriana.

Todas estas formas de obtener composiciones con plasma rico en plaquetas tienen la desventaja añadida de que contienen plaquetas enteras o fragmentadas, por lo que están presentes sitios de histocompatibilidad de las membranas, y por tanto pueden resultar en un problema de immunocompatibilidad.

Existe por tanto la necesidad de desarrollar composiciones libre de los sitios de histocompatibilidad de las membranas de las plaquetas que de manera segura y rápida faciliten la regeneración tisular.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN

Los autores de la presente invención han desarrollado una composición que comprende una mezcla de compuestos liberados de plaquetas (MCLP) y un compuesto seleccionado de la Tabla 1 que mediante ensayos “Wound healing” y análisis de la regeneración celular (Ejemplo 3) han demostrado su utilidad en la activación de las principales células que componen la piel.

La invención se refiere en un primer aspecto a una composición que comprende:

(i) un componente A, en donde dicho componente A comprende al menos dos compuestos seleccionados del grupo formado por EGF, VEGF, FGF y PDGF, y carece de TGF-β1 o contiene TGF-β1 inactivo; y

(ii) un componente B.

En otro aspecto la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de la composición de la invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención se refiere a una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz de la composición de la invención y un vehículo cosméticamente aceptable.

En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de la composición de la invención en la elaboración de un medicamento para la curación de heridas.

En otro aspecto, la invención se relaciona con el uso de una composición de la invención en la elaboración de un medicamento para la bioestimulación de fibroblastos.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método cosmético de regeneración de la piel que comprende la administración a un individuo de la composición de la invención.

En otro aspecto, la invención se relaciona con un método cosmético para mejorar el aspecto, tersura y elasticidad de la piel que comprende la administración a un individuo de una composición cosmética de la invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

Figura 1. Fotografías de queratinocitos HaCaT (A) y fibroblastos humanos primarios (B) , en cultivo, confluentes al 40% aproximadamente.

Figura 2. Fotografías de queratinocitos HaCaT (A) y fibroblastos humanos primarios (B) , en cultivo, confluentes al 90% aproximadamente.

Figura 3. Esquema de la realización de heridas, por triplicado, en cada uno de los pocillos que contenían las células. Después de lavar, se añadieron los tratamientos correspondientes: control, sin tratamiento; AV 10%, medio de cultivo con Aloe vera al 10%; MCLP 5%, medio de cultivo con MCLP 5% y Mezcla, MCLP al 5% + medio de cultivo con Aloe vera 10%. Para más información véase el Ejemplo 2, apartado 2.2.

Figura 4. Fotografías que muestran que la morfología celular entre los grupos control (A) , Aloe vera (B) , MCLP

(c) y Carbómero (D) es idéntica. Sin embargo, se observa una intensa vacuolización... [Seguir leyendo]

1. Una composición que comprende:

(i) un componente A, en la que dicho componente A es una mezcla de compuestos liberados de plaquetas (MCLP) que se obtiene mediante un procedimiento que comprende las etapas de: a) dividir en dos fracciones A y B una cantidad de sangre total de un sujeto, b) permitir la formación del coágulo de la fracción A y separar el coágulo del suero, descartando el coágulo y reservando el suero, c) anticoagular la fracción B con una cantidad de anticoagulante, d) separar la fracción B anticoagulada procedente de la etapa c) en una fracción celular que contiene principalmente células rojas y leucocitos y una fracción de plasma enriquecido en plaquetas que comprende una pluralidad de plaquetas, descartar la fracción celular y reservar la fracción de plasma enriquecido en plaquetas que comprende una pluralidad de plaquetas, e) combinar la fracción de plasma enriquecido en plaquetas y suero procedente de la fracción A para obtener una mezcla, f) inducir la lisis de la pluralidad de plaquetas de la fracción del plasma enriquecido en plaquetas para obtener una fracción de plasma enriquecido en plaquetas que contiene plaquetas lisadas comprendiendo productos almacenados en estructuras de las plaquetas, citosol y fragmentos estructurales de las plaquetas y suero procedente de la fracción A, y g) eliminar los fragmentos estructurales de las plaquetas presentes en dicha mezcla ; y

(ii) un componente B, en el que dicho componente B es un compuesto emoliente o cicatrizante.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que la sangre procede de un mamífero.

3. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 o 2, en la que dicho compuesto emoliente o cicatrizante se selecciona del grupo de los compuestos emolientes o cicatrizantes mencionados en la Tabla 1, o cualquier combinación de los mismos.

4. Composición según la reivindicación 3, en la que el compuesto emoliente o cicatrizante es Aloe vera.

5. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el porcentaje de MCLP está comprendido entre 1% y 8% (v/v) .

6. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el porcentaje de MCLP está comprendido entre 8% y 15% (v/v) .

7. Composición según cualquiera de la reivindicaciones4 a 6, en la que el porcentaje de Aloe vera está comprendido entre 7% y 15% (v/v) .

8. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 que comprende, adicionalmente, un adyuvante.

9. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente eficaz de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

10. Una composición cosmética que comprende una cantidad cosméticamente eficaz de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un vehículo cosméticamente aceptable.

11. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la elaboración de un medicamento para la curación de heridas.

12. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 en la elaboración de un medicamento para la bioestimulación de fibroblastos.

13. Uso de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 11 ó 12, en el que dicha composición es administrada por vía tópica.

14. Método cosmético de regeneración de la piel que comprende la administración a un individuo de una composición cosmética según la reivindicación 10.

15. Método cosmético para mejorar el aspecto, tersura y elasticidad de la piel que comprende la administración a un individuo de una composición cosmética según la reivindicación 10.

16. Método cosmético según cualquiera de las reivindicaciones 14 ó 15, en el que la composición cosmética es administrada por vía tópica.

FIGURA 1

FIGURA 2

FIGURA 3

FIGURA 4

Viabilidad/proliferación celular (%)

Proliferación Fibroblastos Humanos 450 400 350 300 250 200 150 100 50 0

10% 20%

30%

2, 5% 5% 8% 10%

Control Aloe vera MCLP

FIGURA 5

Viabilidad/ Proliferación celular (%)

Proliferación Queratinocitos Humanos 160 140 120 100 80 60 40 20 0

10%

20%

30%

2, 5%

5%

8%

10%

Control

Aloe vera MCLP

FIGURA 6

FIGURA 7

Viabilidad / proliferación celular (%)

Regeneración de Fibroblastos

Regeneración de Queratinocitos

Viabilidad / proliferación celular (%)

104 103 102 101 100

FIGURA 8