Composición para inducir la regeneración tisular por activación de plasma rico en plaquetas (PRP) y procedimiento para fabricarla.

Un procedimiento de fabricación de una composición para inducir la regeneración tisular por activación de plasma rico en plaquetas (PRP),

comprendiendo el procedimiento las etapas de:

separar el PRP de la sangre completa;

mezclar el PRP con una solución de cloruro de calcio; y

mezclar una mezcla del PRP y la solución de cloruro de calcio con colágeno de tipo I;

en el que la etapa de separar el PRP de la sangre completa comprende las etapas de:

obtener 10 ml de la sangre completa de un animal o un paciente en un tubo de ensayo a vacío que contenga citrato de sodio al 3,2 % y, primariamente, centrifugar la sangre completa obtenida (1.750~1.900 g) durante de 3 a 5 minutos;

obtener un sobrenadante líquido (capa de plasma) que comprende la capa leucocítica a través de dicha centrifugación;

transferir el sobrenadante líquido obtenido(capa de plasma) que comprende la capa leucocítica a un nuevo tubo de ensayo a vacío con una aguja roma y centrifugarlo una segunda vez (4.500~5.000 g) durante de 4 a 6 minutos; y obtener el PRP concentrado en una capa inferior (desde el fondo hasta una altura de aproximadamente 1 ml del tubo de ensayo) con una aguja roma

Composición para inducir la regeneración tisular por activación de plasma rico en plaquetas (PRP) y procedimiento para fabricarla

Campo técnico

La presente invención se refiere a una composición para inducir la regeneración tisular al activar plasma rico en plaquetas (PRP) con una solución de cloruro de calcio y colágeno de tipo I y a un procedimiento para fabricarla. Más en particular, en la presente invención, la composición puede tener una formación de tipo gel que contenga PRP y se puede trasplantar en cualquier lesión con necesidad de regeneración tisular en casos tales como el tratamiento de defectos óseos y la cicatrización de heridas y, en consecuencia, se puede activar el PRP para inducir un factor de crecimiento que es útil para la regeneración tisular a partir del PRP para lograr de forma cómoda y rápida una regeneración tisular eficaz. En consecuencia, el procedimiento es muy útil para potenciar sumamente la credibilidad de la aplicación de PRP a lesiones y presentar una buena imagen ante los consumidores.

Técnica anterior

Como se sabe en general, el plasma rico en plaquetas (PRP) es un material autólogo separado de la sangre completa por centrifugación en gradiente de densidad y es una sustancia Inactiva que incluye una gran cantidad de plaquetas concentradas con respecto a una pequeña cantidad de plasma y contiene leucocitos en una concentración alta.

En el interior de un vaso sanguíneo, las plaquetas ¡nactlvadas mantienen una forma redonda al tiempo que circulan por el vaso sanguíneo. Se sabe que las plaquetas tienen una vida útil de aproximadamente 1 días y que están presentes en una cantidad de aproximadamente 2~4x18 con respecto a 1 mi de sangre.

La plaquetas del PRP se activan por medio de sustancias Incluidas en el Interior del vasos sanguíneo y después liberan factores de crecimiento y diversas sustancias activas. Las sustancias activadoras incluyen colágeno, trombina, difosfato de adenoslna (ADP) y eplnefrlna. En especial, el colágeno y la trombina son conocidos como agonistas fuertes. Se sabe que el colágeno Induce la activación de las plaquetas a través de la adhesión de su secuencia específica a las plaquetas, como se muestra en la FIG. 1.

Cuando los factores activadores activan las plaquetas, las plaquetas liberan factores de crecimiento debido a la desgranulación de sus gránulos alfa. Los factores desempeñan un papel importante en la cicatrización inicial de las heridas. En el presente documento, los factores de crecimiento liberados incluyen el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF-AB), el factor de crecimiento transformante b1 (TGF-b1), el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de crecimiento epidérmico (EGF), el factor de crecimiento insulinoide (IGF) y similares. Asimismo, el PRP libera citocinas, etc. en condiciones in vitro, de modo que se sintetiza ADN de fibroblastos. Esto aumenta la producción de colágeno y, por tanto, permite que se organice una estructura de colágeno.

Sin embargo, en la aplicación de PRP en estado líquido, es difícil inyectar el PRP en una herida y se produce la pérdida de tejidos circundantes. Por tanto, es necesario desarrollar la gelificación para la coagulación acompañada de propiedades físicas. Para la gelificación, recientemente, se ha llevado a cabo principalmente investigación sobre el uso de la trombina. Sin embargo, en un informe se recoge que al usar trombina (principalmente de origen bovino), que es una proteína de origen animal, se observó una reacción inmunitaria tal como el lupus. En otras palabras, se sabe que la trombina es un factor que plantea problemas clínicos relacionados con un anticuerpo. La trombina es el componente más potente como activador de plaquetas. Sin embargo, cuando se usa trombina, son necesarios anticuerpos frente a la trombina, la protrombina, el factor V y la cardiolipina. Asimismo, a través de la investigación en animales, se ha descubierto que hay problemas clínicos como las hemorragias postoperatorias y un síndrome autoinmunitario. Aunque estos problemas se producen con poca frecuencia, no pueden obviarse en el desarrollo. El uso de trombina puede provocar la extensión de una herida dañada, una resistencia anómala del gel o similar.

Además, debido a la gran capacidad de contracción de un gel activador de la trombina, existe una dificultad en el procedimiento quirúrgico para rellenar el espacio de una herida. Por tanto, se ha reconocido la importancia de un material que reemplace a la trombina.

El colágeno es una proteína fibrosa rígida y es uno de los principales componentes proteínicos del tejido conjuntivo de los mamíferos. Constituye hasta el 3 % o más de las proteínas totales. El colágeno proporciona forma, resistencia y flexibilidad al tejido y tiene diversas funciones tales como constituir el andamiaje tisular, la adhesión celular, la migración celular, la producción de vasos sanguíneos, la morfogenia tisular, la reparación de tejidos y similares. Como fuerte agonista de las plaquetas, el colágeno activa las plaquetas y provoca la agregación plaquetaria. El colágeno fibrilar induce más fuertemente la agregación plaquetaria y soporta una mayor adhesión de plaquetas que el colágeno soluble. Aunque el motivo de dicha diferencia no se ha demostrado claramente, se supone que existe la posibilidad de que el colágeno fibrilar se una a una molécula y aumente la acción de las plaquetas activadas.

El colágeno de tipo i constituye la mayor parte del tejido conjuntivo de los mamíferos. Asimismo, como andamiaje

natural, la Investigación más activa se desarrolla en los campos de la medicina regeneradora y la Ingeniería de tejidos. Debido a estas ventajas del colágeno de tipo I, el colágeno de tipo I desempeña un papel de activación de las plaquetas al reemplazar a la trombina y mantener la forma.

La publicación de patente US 6322785 B1 muestra una composición para inducir la regeneración tisular por activación de PRP con una solución de cloruro de calcio y el colágeno de tipo I.

Divulgación

Problema técnico

Por lo tanto, se ha preparado la presente invención en vista de los problemas mencionados anteriormente, y proporciona una composición para inducir la regeneración tisular por activación de plasma rico en plaquetas (PRP) y un procedimiento para fabricarla. La presente invención logra los siguientes objetivos. En primer lugar, se usa colágeno de tipo I con el fin de mejorar una reacción ¡nmunitaria y problemas clínicos, donde la reacción inmunitaria y los problemas clínicos se originan cuando se usa plasma rico en plaquetas (PRP) junto con una proteína de origen animal, es decir, trombina (principalmente de origen bovino). En segundo lugar, para el tratamiento de defectos óseos o la cicatrización de heridas, se obtiene una pequeña cantidad de sangre, se separa el PRP de la sangre completa y se Inyecta mezclado con colágeno de tipo I. En otras palabras, con el fin de eliminar el rechazo clínico, se usan plasma rico en plaquetas (PRP) como material autólogo y atelocolágeno, que provoca menos reacciones inmunitarias. En tercer lugar, el PRP se separa de forma práctica y rápida in situ para un procedimiento quirúrgico y se inyecta en una mezcla con una solución de cloruro de calcio y colágeno de tipo I, de modo que se puede lograr una regeneración tisular eficaz para pacientes con lesiones graves o pacientes que se someten a procedimientos quirúrgicos repetitivos. En cuarto lugar, cuando se aplica el PRP obtenido de acuerdo con la presente invención a una región que necesita una regeneración tisular en una mezcla con una solución de cloruro de calcio y colágeno de tipo I, el colágeno de tipo I activa el PRP e induce factores de crecimiento útiles para la regeneración tisular a partir del gel de PRP. Esto resulta eficaz para logra de forma práctica y rápida la regeneración tisular. Especialmente, en quinto lugar, la coagulación del colágeno de tipo I como agonista con el PRP puede liberar una cantidad similar o mayor de factores de crecimiento de acuerdo con los tipos de factores de crecimiento, que la de la coagulación de la trombina como agonista con el PRP. Esto induce una regeneración tisular más eficaz. Además, en sexto lugar, el PRP obtenido de acuerdo con la presente invención se inyecta en una mezcla con una solución de cloruro de calcio y colágeno de tipo I en todas las regiones que necesitan tratamiento de defectos óseos o cicatrización de heridas, de modo que se logra una regeneración tisular eficaz. Por último, en séptimo lugar, como consecuencia, la invención potencia sumamente la credibilidad de la aplicación de PRP a lesiones y presenta una buena imagen ante los consumidores.

Solución técnica

1. Un procedimiento de fabricación de una composición para inducir la regeneración tisular por activación de plasma rico en plaquetas (PRP), comprendiendo el procedimiento las etapas de:

separar el PRP de la sangre completa;

mezclar el PRP con una solución de cloruro de calcio; y

mezclar una mezcla del PRP y la solución de cloruro de calcio con colágeno de tipo I; en el que la etapa de separar el PRP de la sangre completa comprende las etapas de:

obtener 1 mi de la sangre completa de un animal o un paciente en un tubo de ensayo a vacío que contenga citrato de sodio al 3,2% y, primariamente, centrifugar la sangre completa obtenida (1.75-1.9 g) durante de 3 a 5 minutos;

obtener un sobrenadante liquido (capa de plasma) que comprende la capa leucocitica a través de dicha centrifugación;

transferir el sobrenadante líquido obtenido(capa de plasma) que comprende la capa leucocitica a un nuevo tubo de ensayo a vacío con una aguja roma y centrifugarlo una segunda vez (4.5-5. g) durante de 4 a 6 minutos; y

obtener el PRP concentrado en una capa inferior (desde el fondo hasta una altura de aproximadamente 1 mi del tubo de ensayo) con una aguja roma.

2. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 1, en el que en la etapa de mezclar el PRP con la solución de cloruro de calcio, se mezcla una vez aproximadamente 1 mi de PRP obtenido por un procedimiento de separación del PRP de la sangre completa con la solución de cloruro de calcio con una concentración de ,3-,55 mg/ml mediante un conector de tres vías.

3. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 1, en el que la etapa de mezclar la mezcla del PRP y la solución de cloruro de calcio con el colágeno de tipo I comprende las etapas de:

dejar el colágeno de tipo I a temperatura ambiente;

mezclar cuatro veces la mezcla del PRP y la solución de cloruro de calcio con el colágeno de tipo I con una concentración de 2-5 mg/ml, en una fase opaca, a través de una conexión mediante un conector de tres vías; e

inyectar la mezcla del PRP y el colágeno de tipo I, cargada en una jeringuilla, en todas las regiones que necesiten regeneración tisular en casos tales como el tratamiento de defectos óseos y la cicatrización de heridas.

4. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 3, en el que el colágeno de tipo I tiene una concentración

de 2-5 mg/ml.

5. El procedimiento como se reivindica en la reivindicación 3, en el que el colágeno de tipo I se deja a temperatura ambiente durante de 15 a 3 minutos.