Procedimiento de separación de células nucleadas obtenidas de médula ósea para la formación ósea.
Un procedimiento para separar células nucleadas obtenidas de médula ósea para la formación ósea,
que comprende las etapas de:
(a) lavado de la médula ósea, que comprende las subetapas de:
(a1) almacenamiento de 2-5 ml de médula ósea extraída de un paciente en un tampón de lavado;
(a2) agitación del tampón de lavado de médula ósea 40-50 veces para eliminar suficientemente las impurezas o componentes lipídicos de la médula ósea,
(a3) centrifugación del tampón de lavado agitado a 1600 rpm durante 4-5 minutos;
(a4) retirada del sobrenadante,
(a5) transferencia del componente de médula ósea restante a otro recipiente de lavado,
(a6) agitación del recipiente que contiene la médula ósea 40-50 veces,
(a7) centrifugación de la solución agitada a 1600 rpm durante 4-5 minutos, y
(a8) retirada del sobrenadante de la solución centrifugada;
(b) lisis de los eritrocitos de la médula ósea, que comprende las subetapas de:
(b1) adición de una cantidad de 10 veces un tampón de lisis a la médula ósea; y
(b2) mezcla del tampón de lisis con la médula ósea varias veces utilizando una jeringa, y
(b3) reposo de la solución durante 10-20 segundos;
(c) neutralización del lisado de la médula ósea, que comprende las subetapas de:
(c1) mezcla de la solución de la médula ósea con la misma cantidad de un tampón de neutralización;
(c2) centrifugación de dicha solución a 1600 rpm durante 4-5 minutos, y
(c3) eliminación del sobrenadante a excepción de las células nucleadas precipitadas para la formación ósea;
(d) purificación de las células nucleadas de la médula ósea neutralizada, que comprende las subetapas de:
(d1) mezcla de 4-5 ml de un tampón de mantenimiento con las células nucleadas en un recipiente; y
(d2) centrifugación de dicha solución a 1600 rpm durante 4-5 minutos, y
(d3) eliminación del sobrenadante; y
(e) mezcla de las células nucleadas con un tampón de mantenimiento para la formación ósea.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/KR2006/002434.
Solicitante: SEWON CELLONTECH CO., LTD.
Nacionalidad solicitante: República de Corea.
Dirección: 10, 11TH., GOODMORNING-SHINHAN TOWER 23-2, YOIDO-DONG YOUNGDEUNGPO-GU, SEOUL 150-712 REPUBLICA DE COREA.
Inventor/es: JANG, JAE DEOG, CHANG,Cheong-Ho, PARK,Hyun-Shin, LEE,Sae-Bom.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12N5/077 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células mesenquimales, p. ej. Células óseas, células cartilaginosas, Células del estroma de la médula ósea, células adiposas o células musculares.
PDF original: ES-2585231_T3.pdf
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